大肠杆菌外膜蛋白ompW基因敲除菌的构建及其对两种抗生素的敏感性

作     者：吴贤斌 邹海杰 田丽花 潘建义 赵辅昆 

作者机构：浙江理工大学生命科学学院杭州310018 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2012年第52卷第8期

页      面：1021-1026页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：浙江省自然科学基金项目(Y2090396) 浙江省公益性技术研究项目(2011C23067)~~ 

主　　题：Red同源重组 外膜蛋白 OmpW 最小抑菌浓度 生存率 

摘      要：探讨大肠杆菌ompW基因敲除后,硫酸新霉素和氨苄青霉素对敲除菌最低抑菌浓度(MIC)和生存率的影响,进而分析OmpW的功能。【方法】运用Red重组技术将大肠杆菌K12染色体上基因ompW敲除,构建缺陷株ΔompW。然后分别测定硫酸新霉素和氨苄青霉素对正常菌和ΔompW菌的最小抑菌浓度(MIC)及次抑菌浓度(1/2 MIC)下K12和ΔompW菌的生存率。【结果】经PCR鉴定和通过提取膜蛋白进行western blot分析表明,成功获得ompW敲除菌。抗生素分析表明,K12菌对硫酸新霉素的MIC为8.0μg/mL,生存率为98.0%;ΔompW菌对新霉素的MIC为1.7μg/mL,而其生存率仅为39.0%。而k12对氨苄新霉素的MIC为16.0μg/mL,ΔompW为3.3μg/mL;1/2 MIC下K12生存率为70.4%,而ΔompW为30.3%。【结论】ompW基因缺陷株对两抗生素的敏感性大大增强,表明ompW在细菌抗性方面起着关键作用。