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“一流本科教育”背景下生物制药混合式教学模式的改革探索

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生物工程学报 2023年第12期39卷 5014-5023页

作者：蔡文涛雷骏雨董衍明梁继超赵晶李路军陈勇湖北大学生命科学学院湖北武汉430062

近年来生物制药产业飞速发展,对高素质、创新应用型人才需求日益迫切。在“一流本科教育”背景下,进行生物制药课程混合式教学模式的改革探索,对培养适应产业发展的专业人才具有重要意义。湖北大学生物制药课程基于专属在线课程(small p... 详细信息

近年来生物制药产业飞速发展,对高素质、创新应用型人才需求日益迫切。在“一流本科教育”背景下,进行生物制药课程混合式教学模式的改革探索,对培养适应产业发展的专业人才具有重要意义。湖北大学生物制药课程基于专属在线课程(small private online course,SPOC)和超星平台开展混合式教学,瞄准一流课程“两性一度(高阶性、创新性和挑战度)”的要求,围绕课程目标的达成,夯实课前、课中和课后3个阶段,积极创新教学方法,并有机融入典型案例。此外,通过加强课程的形成性评价,来提升考评分辨率;通过调研学生的学习行为,并利用边际效用曲线分析小组活动特点,来指导学生如何提高学习效率;结合职业生涯规划,给予学生个性化学习指导。生物制药课程混合式教学模式的改革取得了明显成效,如学生满意度、学生创新创业能力和课程建设水平均得到提升,以期为相关课程教学改革和研究工作提供有益借鉴。

关键词：线上线下混合生物技术制药教学改革成绩评价翻转课堂

B19病毒11kDa蛋白对Hela细胞内NF-κB信号通路的影响

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生物工程学报 2013年第7期29卷 965-973页

作者：董衍明黄玉彭建新李毅华中师范大学生命科学学院昆虫所湖北武汉430079 武汉生物工程学院生物工程系湖北武汉430079

11 kDa蛋白作为B19病毒的一个非结构蛋白,可能在病毒复制周期中发挥重要作用。为了研究11 kDa蛋白对细胞内NF-κB信号通路的影响,首先通过原核表达纯化获得GST-11 kDa融合蛋白,并制备免疫血清,利用免疫血清验证了11 kDa蛋白在Hela细胞... 详细信息

11 kDa蛋白作为B19病毒的一个非结构蛋白,可能在病毒复制周期中发挥重要作用。为了研究11 kDa蛋白对细胞内NF-κB信号通路的影响,首先通过原核表达纯化获得GST-11 kDa融合蛋白,并制备免疫血清,利用免疫血清验证了11 kDa蛋白在Hela细胞呈胞浆定位。荧光素酶检测系统发现11 kDa蛋白能上调细胞内NF-κB转录活性,Western blotting进一步表明11 kDa蛋白能够引起细胞内IκB-α的降解。同时,11 kDa蛋白还能够上调细胞内炎性因子IL6启动子的活性,而该反应主要依赖于NF-κB通路。结果表明,11 kDa蛋白通过参与细胞内信号途径激活相关炎性因子的表达。

关键词：人细小病毒B19 11kDa蛋白核转运因子

表达兔出血症病毒VP60蛋白的重组兔粘液瘤病毒的构建与初步评价

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生物工程学报 2020年第10期36卷 2083-2091页

作者：王媛于倩李毅董衍明湖北文理学院医学院湖北襄阳441053 江苏大学生命科学研究院江苏镇江212013 武汉生物工程学院生命科学与技术学院湖北武汉430415 湖北大学生命科学学院省部共建生物催化与酶工程国家重点实验室湖北武汉430062

兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)及兔粘液瘤病毒(Myxoma virus,MYXV)分别引起兔出血症(兔瘟)和兔粘液瘤病,是两种严重危害家兔养殖业以及导致原产地欧洲野兔-穴兔(Oryctolagus cuniculus)种群近濒危的重要病原。V... 详细信息

兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)及兔粘液瘤病毒(Myxoma virus,MYXV)分别引起兔出血症(兔瘟)和兔粘液瘤病,是两种严重危害家兔养殖业以及导致原产地欧洲野兔-穴兔(Oryctolagus cuniculus)种群近濒危的重要病原。VP60为构成RHDV衣壳的主要抗原蛋白。为研制能同时免疫预防该两种疫病的重组二联疫苗,本研究分别以MYXV和其复制非必需基因——胸腺激酶(Thymidine kinase,TK)基因为重组载体和同源重组靶基因,构建穿梭载体p7.5-VP60-GFP。将p7.5-VP60-GFP载体转染被MYXV感染的兔肾细胞株RK13,经同源重组后,在荧光显微镜下筛选出表达GFP的重组病毒,并将其命名为rMV-VP60-GFP。通过PCR和Western blotting进行重组病毒vp60基因特异性插入和表达验证结果显示,vp60和gfp基因成功插入MYXV基因组中并且可成功表达,表明成功构建了表达RHDV衣壳蛋白基因vp60的重组MYXV。动物攻毒保护试验表明,制备的重组病毒能保护家兔抵抗MYXV的致死性攻击,这为后续疫苗的研发奠定了基础。

关键词： VP60蛋白胸腺激酶基因绿色荧光蛋白同源重组粘液瘤病毒兔出血症病毒

人细小病毒B19VP1u多克隆抗体的制备及其保守区外N端氨基酸对sPLA2活性影响的初步研究

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微生物学通报 2014年第2期41卷 319-326页

作者：王媛董衍明易千慧赵丹李毅华中师范大学生命科学学院昆虫所湖北武汉430079 武汉生物工程学院生物工程系湖北武汉430415

【目的】制备人细小病毒B19-VP1u的多克隆抗体,探究VP1u多克隆抗体及其保守区外N端氨基酸对病毒磷脂酶A2活性的影响。【方法】首先通过分子克隆方法构建相应原核表达载体;利用原核表达系统纯化含MBP标签的VP1u全长及N端系列截短突变融... 详细信息

【目的】制备人细小病毒B19-VP1u的多克隆抗体,探究VP1u多克隆抗体及其保守区外N端氨基酸对病毒磷脂酶A2活性的影响。【方法】首先通过分子克隆方法构建相应原核表达载体;利用原核表达系统纯化含MBP标签的VP1u全长及N端系列截短突变融合蛋白;接着免疫新西兰大白兔制备全长VP1u蛋白的多克隆抗体;最后利用磷脂酶A2活性检测试剂盒检测了纯化蛋白的磷脂酶A2活性。【结果】Western blot及免疫荧光实验证实制备的多克隆抗体具有较高的特异性;磷脂酶A2活性检测发现全长VP1u-MBP融合蛋白具有一定的活性,该活性可以被VP1u的抗体抑制;N端保守区外截短系列蛋白的酶活检测发现,N端截掉12个氨基酸时酶活降低53%,截掉67个氨基酸时酶活性几乎完全丧失。【结论】首次发现VP1u保守区外N端氨基酸,尤其是第12个氨基酸前的区域以及第22-67个氨基酸之间的区域,对sPLA2活性的保持具有重要意义,推测该区域可能对维持正常的蛋白构象起重要的作用;而其特异性多克隆抗体的制备也为进一步研究B19病毒VP1u在病毒复制周期的作用奠定基础。

关键词：人细小病毒B19 VP1u 多克隆抗体磷脂酶A2

人博卡病毒HBoV1非结构蛋白NP1对细胞转录因子的调控

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微生物学报 2013年第7期53卷 737-745页

作者：孙彬李永淑董衍明刘凯于杨勇波李毅华中师范大学生命科学学院武汉430079 武汉生物工程学院生物工程系武汉430415

【目的】研究人博卡病毒非结构蛋白NP1对细胞转录因子活性和炎症细胞因子TNF-α和IL-6表达的调控作用。【方法】通过双荧光素酶报告基因系统分析NP1对转录因子的调控作用,通过ELISA和荧光定量PCR分别从蛋白质和RNA水平检测NP1是否影响T... 详细信息

【目的】研究人博卡病毒非结构蛋白NP1对细胞转录因子活性和炎症细胞因子TNF-α和IL-6表达的调控作用。【方法】通过双荧光素酶报告基因系统分析NP1对转录因子的调控作用,通过ELISA和荧光定量PCR分别从蛋白质和RNA水平检测NP1是否影响TNF-α、IL-6的表达,最后利用哺乳动物双杂交系统分析NP1是否通过寡聚化发挥功能。【结果】在293T细胞中,NP1可分别提高AP-1、STAT3和GAS转录因子报告载体荧光素酶活性3.69倍、2.45倍和3.03倍,但对NF-κB转录因子报告载体荧光素酶活性无明显影响(P>0.05)。转染24 h和48 h后,NP1表达细胞和对照细胞培养基中IL-6和TNF-α蛋白浓度没有显著性差异(P>0.05),但TNF-αmRNA的表达水平上调。哺乳动物双杂交实验表明NP1蛋白自身没有相互作用。【结论】结果首次表明HBoV1非结构蛋白NP1对细胞转录因子和炎症细胞因子具有调节作用,揭示NP1可能与HBoV1致病性有关,为进一步探究HBoV1病毒致病的分子机制提供参考。

关键词：人博卡病毒非结构蛋白NP1 转录因子细胞因子

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人细小病毒B19分子生物学研究进展

生物工程学报 2020年第5期36卷 879-890页

作者：董衍明李京京徐鹏李毅马立新王媛湖北大学生命科学学院省部共建生物催化与酶工程国家重点实验室湖北武汉430062 湖北文理学院医学院湖北襄阳441053 湖北师范大学生命科学学院食用野生植物保育与利用湖北省重点实验室湖北黄石435002 武汉生物工程学院生命科学与技术学院湖北武汉430415

人细小病毒B19(Human parvovirus B19,简称B19病毒),是目前为止已知能够感染并引起人类疾病的两种细小病毒科成员之一。B19病毒作为一种重要病原,能够引起如儿童传染性红斑、急性再障危象、胎儿水肿甚至死胎等疾病。文中从B19病毒基因... 详细信息

人细小病毒B19(Human parvovirus B19,简称B19病毒),是目前为止已知能够感染并引起人类疾病的两种细小病毒科成员之一。B19病毒作为一种重要病原,能够引起如儿童传染性红斑、急性再障危象、胎儿水肿甚至死胎等疾病。文中从B19病毒基因型、病毒受体、基因组结构特点与复制、病毒转录与转录后调控、病毒非结构和结构蛋白特点与功能以及病毒诊断及抗病毒药物研究策略6个方面来综述B19病毒的最新研究进展,以期为B19病毒致病机制的深入研究与治疗诊断策略的制定提供参考。

关键词： B19病毒基因型基因组特点转录与转录后调控病毒蛋白特点与功能病毒诊断和抗病毒药物

B19病毒非结构蛋白11 kD对p6启动子和细胞因子启动子的调控作用

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微生物学通报 2020年第5期47卷 1460-1467页

作者：王媛柯峰戈勇殷焦黄玉董衍明湖北文理学院医学院湖北襄阳441053 襄阳市中心医院湖北襄阳444102 湖北大学生命科学学院湖北武汉430062 华大海洋研究院广东深圳518083 Department of Biological Sciences George Washington UniversityWashington DC 20052USA

【背景】人细小病毒B19是可以感染并引起人类疾病的两种细小病毒科成员之一。B19病毒的唯一启动子p6负责病毒RNA的转录。研究表明p6启动子活性与其转录因子结合位点以及B19病毒NS1蛋白的调节有关。但是,关于其他重要位点和B19病毒蛋白... 详细信息

【背景】人细小病毒B19是可以感染并引起人类疾病的两种细小病毒科成员之一。B19病毒的唯一启动子p6负责病毒RNA的转录。研究表明p6启动子活性与其转录因子结合位点以及B19病毒NS1蛋白的调节有关。但是,关于其他重要位点和B19病毒蛋白是否也具有影响p6启动子活性的作用还未有报道。【目的】探究影响p6启动子活性的重要因素,并明确B19病毒11 kD蛋白与p6启动子及细胞因子启动子的调控关系。【方法】通过生物信息方法预测分析p6启动子转录结合位点及其CpG位点,利用体外甲基化分析CpG位点对p6启动子活性的影响。同时,利用增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)和荧光素酶报告系统分析影响p6启动子活性的转录因子结合区域以及11 kD蛋白对p6启动子和细胞因子启动子的影响。【结果】p6启动子在不同非敏感细胞系中均有较高活性,并且其302-479区段的转录结合位点CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)、阴阳因子(Yin Yang 1,YY1)、信号传导与转录激活因子(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、Sp1/3和E2F转录调节因子7(E2F transcription factor 7,E2F7)对维持启动子活性很重要。同时,p6启动子活性可被其CpG位点的甲基化修饰所抑制,但不被11kD蛋白所调控。然而11 kD蛋白却能显著上调肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白介素6(interleukin 6,IL6)、STAT3启动子的活性。【结论】本研究明晰了B19病毒p6启动子的潜在转录因子结合位点和CpG位点对维持其启动子活性的重要性,并进一步揭示了非结构蛋白11kD与p6启动子以及细胞内因子启动子的关系,推测11 kD蛋白可能通过影响细胞内相关因子的表达,进而在B19病毒与细胞相互作用过程中扮演重要角色。

关键词： B19病毒 11 kD蛋白 p6启动子细胞因子启动子

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单细胞蛋白饲料的开发与利用

饲料研究 2005年第9期28卷 25-27页

作者：董衍明马雁玲华中师范大学生命科学学院

文章概述了单细胞蛋白生产原理,生产单细胞蛋白的微生物种类,以及单细胞蛋白的营养成分,介绍了单细胞蛋白生产的一般工艺,探讨了单细胞蛋白饲料的应用效果及应用中存在的问题及解决办法,最后展望了单细胞蛋白在饲料加工中的应用前景。

关键词：单细胞蛋白饲料加工开发与利用

人细小病毒B19非结构基因ns1和7.5ku蛋白基因的克隆与表达

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中国病原生物学杂志 2010年第7期5卷 481-484页

作者：董衍明冯志鸿王也张楠王媛徐鹏李毅华中师范大学生命科学学院湖北武汉430079

目的通过分子克隆技术,构建人细小病毒B19非结构基因ns1和7.5kugene的原核表达载体,并诱导重组NS1和7.5ku融合蛋白的表达,为蛋白的纯化奠定基础。方法以含有B19病毒全基因组感染性克隆为模板,用PCR法扩增目的基因ns1和7.5kugene,以pET-... 详细信息

目的通过分子克隆技术,构建人细小病毒B19非结构基因ns1和7.5kugene的原核表达载体,并诱导重组NS1和7.5ku融合蛋白的表达,为蛋白的纯化奠定基础。方法以含有B19病毒全基因组感染性克隆为模板,用PCR法扩增目的基因ns1和7.5kugene,以pET-28a为表达载体,构建重组表达质粒pET28a-ns1和pET28a-7.5ku,转化***21(DE3),获得重组工程菌株。经IPTG诱导培养6h后,通过SDS-PAGE、Western blot鉴定表达产物。结果成功构建了pET28a-ns1和pET28a-7.5ku,IPTG诱导能获得较高的目的蛋白。结论人细小病毒B19的非结构基因能在大肠埃希菌中获得成功的表达,为蛋白的纯化和抗体制备奠定基础。

关键词：人细小病毒B19 ns1 7.5ku基因克隆与表达