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热打击单核细胞来源外泌体中miR-155对肝细胞炎症的影响及其机制

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解放军医学杂志 2023年第9期48卷 1017-1022页

作者：张明李悦杨经文施学智肖吉彪童华生广州医科大学附属第六医院/清远市人民医院重症医学科一区广东清远511500 解放军南部战区总医院重症医学科/全军热区损伤与组织修复重点实验室广东广州510010

目的研究热打击单核细胞来源外泌体对肝细胞炎症损伤的影响及其与外泌体miR-155的关系。方法将单核细胞THP-1分为对照组、热打击组、乌司他丁组,分别提取3组细胞的外泌体,将其孵育肝细胞系HepG2细胞后,检测肝细胞上清中谷丙转氨酶(ALT)... 详细信息

目的研究热打击单核细胞来源外泌体对肝细胞炎症损伤的影响及其与外泌体miR-155的关系。方法将单核细胞THP-1分为对照组、热打击组、乌司他丁组,分别提取3组细胞的外泌体,将其孵育肝细胞系HepG2细胞后,检测肝细胞上清中谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)水平,肝细胞存活率,以及肝细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素-6(IL-6)mRNA水平,评估外泌体对肝细胞的作用;采用RT-qPCR检测单核细胞来源外泌体中miR-155含量的变化;通过数据库检索、双重荧光素酶报告基因检测及Western blotting实验分析miR-155的潜在靶点;观察热打击单核细胞外泌体对肝细胞miR-155的影响,以及使用乌司他丁或miR-155抑制剂处理对这些外泌体功能的影响。结果热打击单核细胞来源外泌体使肝细胞上清ALT及LDH水平、TNF-αmRNA及IL-6 mRNA水平明显增高(P<0.01),细胞存活率下降(P<0.05);热打击能增加单核细胞及其释放外泌体内含的miR-155水平;miR-155可能以细胞因子信号传导抑制分子1(SOCS1)作为靶基因发挥作用;采用热打击单核细胞外泌体孵育肝细胞可使后者miR-155水平增高,乌司他丁或miR-155抑制剂能降低热打击单核细胞外泌体miR-155水平并减少肝细胞TNF-α和IL-6 mRNA的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论热打击单核细胞可上调肝细胞炎性因子导致的炎症损伤,这可能是通过释放外泌体miR-155至肝细胞并以SOCS1为潜在靶点实现的;乌司他丁可能缓解此条件下肝细胞内炎性因子mRNA的表达。

关键词：中暑外泌体单核细胞乌司他丁肝细胞 miR-155

热打击单核细胞外泌体高迁移率族蛋白B1对内皮细胞炎症的作用

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解放军医学杂志 2023年第6期48卷 670-675页

作者：张明杨经文李悦施学智李华楚童华生广州医科大学附属第六医院/清远市人民医院重症医学科一区广东清远511500 南部战区总医院重症医学科/解放军热区损伤与组织修复重点实验室广东广州510010

目的观察热打击单核细胞外泌体高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对内皮细胞炎症的作用。方法制备中暑大鼠模型,将大鼠分为对照组(n=6)与中暑组(n=6),分离单核细胞提取外泌体并进行鉴定;对外泌体蛋白进行质谱分析并采用注释数据库进行功能描述;采... 详细信息

目的观察热打击单核细胞外泌体高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对内皮细胞炎症的作用。方法制备中暑大鼠模型,将大鼠分为对照组(n=6)与中暑组(n=6),分离单核细胞提取外泌体并进行鉴定;对外泌体蛋白进行质谱分析并采用注释数据库进行功能描述;采用Western blotting及酶联免疫吸附法(ELISA)分别验证中暑大鼠及患者单核细胞来源外泌体HMGB1的表达变化;将脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为对照组、中暑组以及中暑+丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate,EP)组,分别添加来自对照组、中暑组大鼠外周血单核细胞上清中提取的外泌体及EP,采用RT-qPCR及Western blotting检测内皮细胞NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)及白细胞介素-1β(IL-1β)的表达水平;采用ELISA检测健康志愿者及中暑患者外泌体NLRP3及IL-1β的表达水平。结果与对照组比较,中暑组大鼠单核细胞来源外泌体数量(×104/单核细胞)明显增多(11.24±2.66 vs.1.52±0.21,P<0.001)。蛋白质组学分析表明中暑组外泌体HMGB1表达较对照组上调18.63倍(P<0.001),且在NOD样受体等信号通路富集。Westernblotting检测结果显示,中暑组大鼠外泌体内含HMGB1表达量较对照组明显升高(4.13±0.22 vs.1.00±0.15,P<0.001)。ELISA检测结果显示,中暑组患者外泌体内含HMGB1水平(ng/ml)较对照组明显升高(0.29±0.11 vs.0.12±0.04,P=0.006)。RT-qPCR及Western blotting检测结果显示,与对照组比较,中暑组内皮细胞中NLRP3及IL-1β的mRNA和蛋白表达水平均明显升高,与中暑组比较,中暑+EP组NLRP3及IL-1β的mRNA和蛋白表达水平则明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论热打击可提高单核细胞来源外泌体HMGB1水平,并可能通过HMGB1介导内皮细胞的炎症反应。

关键词：中暑外泌体单核细胞高迁移率族蛋白B1

血必净注射液对重症中暑大鼠急性肺损伤的改善作用

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解放军医学杂志 2023年

作者：丁程佳陀劲曹晶晶黄洁恩刘超帆童华生陈怿东莞市滨海湾中心医院重症医学科深圳市龙岗区第二人民医院暨南大学医学部南部战区总医院急诊科

目的探讨血必净注射液调控血管内皮糖萼异常改善重症中暑急性肺损伤的机制。方法将24只大鼠随机分为对照组、中暑组、血必净组，每组8只。采用高温高湿[温度(40±2) ℃，湿度65%±5%]打击60 min制备中暑大鼠模型，血必净组大鼠于造模... 详细信息

目的探讨血必净注射液调控血管内皮糖萼异常改善重症中暑急性肺损伤的机制。方法将24只大鼠随机分为对照组、中暑组、血必净组，每组8只。采用高温高湿[温度(40±2) ℃，湿度65%±5%]打击60 min制备中暑大鼠模型，血必净组大鼠于造模前连续3 d予尾静脉注射血必净注射液(2 ml/kg，2次/d)。各组大鼠于造模后2 h行麻醉处理并取材，记录肺湿/干重比，测定肺泡灌洗液蛋白(BALF)浓度，伊文思蓝(EB)法测定肺血管通透性，HE染色观察肺组织病理学变化，采用免疫荧光观察肺血管表面的透明质酸(HA)变化，Western blotting检测肺组织多配体蛋白聚糖1(Syndecan-1)、磷脂酰肌醇聚糖1(Glypican-1)、血管内皮钙黏蛋白(Ve-cadherin)、紧密连接蛋白(Occludin)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)及E-选择素(E-selectin)等蛋白的表达；采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及肺组织中乙酰肝素酶(HPA)的表达水平。结果血必净可下调肺湿/干重比，减少蛋白渗出，改善肺血管通透性(P<0.01)；减轻肺组织损伤(P<0.01)；减少肺血管表面HA、Syndecan-1、Glypican-1降解(P<0.01)；增加肺血管连接蛋白Ve-cadherin、Occludin的表达(P<0.01)；调控黏附蛋白VCAM-1、E-selectin的过度表达(P<0.01)；下调TNF-α、IL-6及HPA蛋白的表达(P<0.01)。结论血必净可减少HPA、改善糖萼崩解、修复肺血管完整性、减轻细胞连接损伤、下调黏附分子表达并抑制炎症反应，进而缓解重症中暑所致急性肺损伤。

关键词：重症中暑血必净注射液糖萼急性肺损伤

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重症中暑转化医学研究回顾与展望

解放军医学杂志 2017年第2期42卷 103-108页

作者：苏磊童华生广州军区广州总医院重症医学科、全军热区创伤救治组织修复重点实验室广州510010

重症中暑救治存在一系列问题,如发病机制不清楚、基于外在表现的临床分型过于简单化且与其病理生理过程和预后无内在联系、分层诊断和预后预测指标缺失、针对性治疗规范指导缺乏等,以致重症中暑死亡率和致残率居高不下。本研究团队于200... 详细信息

重症中暑救治存在一系列问题,如发病机制不清楚、基于外在表现的临床分型过于简单化且与其病理生理过程和预后无内在联系、分层诊断和预后预测指标缺失、针对性治疗规范指导缺乏等,以致重症中暑死亡率和致残率居高不下。本研究团队于2002年开始进行中暑的流行病学调查,在探讨重症中暑脏器损伤规律的基础上,将重症医学理论体系和救治技术运用于重症中暑救治,以转化医学理念展开了重症中暑脏器损伤机制研究,取得了阶段性的研究成果,获得了一系列重症中暑救治关键性技术,这些技术在全国30家医院进行了推广,提高了重症中暑救治能力。

关键词：重症中暑转化医学规范

中性粒细胞侧向荧光强度对重症中暑合并弥散性血管内凝血的早期诊断价值

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解放军医学杂志 2023年第4期48卷 431-436页

作者：陈文达彭娜刘帅童华生唐柚青刘靖华苏磊南部战区总医院急诊科广东广州510010 广东药科大学研究生院广东广州510080 南方医科大学基础医学院病理生理学教研室/广东省蛋白质组学重点实验室广东广州510515 南部战区总医院重症医学科/全军热区创伤救治与组织修复重点实验室广东广州510010

目的探讨中性粒细胞侧向荧光(NE-SFI)强度对重症中暑(HS)合并弥散性血管内凝血(DIC)的早期诊断价值。方法选取南部战区总医院2017年1月1日-2018年12月31日收治的HS患者34例,依据国际血栓与止血学会(ISTH)发布的显性DIC评分标准,将34... 详细信息

目的探讨中性粒细胞侧向荧光(NE-SFI)强度对重症中暑(HS)合并弥散性血管内凝血(DIC)的早期诊断价值。方法选取南部战区总医院2017年1月1日-2018年12月31日收治的HS患者34例,依据国际血栓与止血学会(ISTH)发布的显性DIC评分标准,将34例患者分为HS未合并DIC组(DIC评分0.05)。HS合并DIC组3 h内核心温度降至38.5℃以下患者比例、GCS评分低于HS未合并DIC组,谷丙转氨酶(ALT)、肌酐、ISTH评分、并发多器官功能障碍综合征(MODS)比例高于HS未合并DIC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。发病第1~3天,HS合并DIC组的NE-SFI值均高于HS未合并DIC组,差异有统计学意义(P<0.001)。HS合并DIC组患者的血清dsDNA、MPO、CitH3水平[分别为(372.93±135.77) ng/ml、(108.32±38.58) pg/ml、(600.18±183.74) ng/μl]明显高于HS未合并DIC组[分别为(30.14±7.01) ng/ml、(56.39±34.64) pg/ml、(320.26±89.60) ng/μl],差异有统计学意义(P<0.001)。Spearman相关分析显示:发病第1~3天的NE-SFI值与发病第1天的dsDNA、MPO、CitH3水平均呈正相关(P<0.05或P<0.01)。ROC曲线分析显示,发病第2天的NE-SFI值对HS合并DIC的诊断效能最高,其AUC为0.921(95%CI0.820~1.000,P<0.001)。结论 NE-SFI可作为早期诊断HS并发DIC的有效指标。

关键词：重症中暑弥散性血管内凝血中性粒细胞侧向荧光多器官功能障碍综合征

基于出血性凝血衰竭理念对创伤性凝血病的预测

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中华全科医学 2022年第4期20卷 655-660页

作者：陈少川童华生南方医科大学第一临床医学院广东广州510515 南部战区总医院急诊科广东广州510030

严重创伤救治是全球性难题,全球每年因严重创伤死亡人数约占总死亡数的10%,而创伤性凝血病(TIC)导致创伤性大出血占创伤患者死因的30%~40%。TIC由多因素与多系统所综合诱发,预防和纠正TIC是严重创伤或多发伤管理的核心之一,而复杂的发... 详细信息

严重创伤救治是全球性难题,全球每年因严重创伤死亡人数约占总死亡数的10%,而创伤性凝血病(TIC)导致创伤性大出血占创伤患者死因的30%~40%。TIC由多因素与多系统所综合诱发,预防和纠正TIC是严重创伤或多发伤管理的核心之一,而复杂的发生机制致使其诊断标准滞后与救治不及时。有研究提出的出血性凝血衰竭理论认为:严重组织损伤和失血,导致休克低灌注与氧债的发生,同时伴随血管内皮的一系列病变反应启动了TIC的发生。本文基于这一机制理论,尝试建立能够预测TIC发生的综合指标组合。通过检索国内外相关文献,综述了在血性凝血衰竭过程中的重要临床指标变化,以及这些指标对TIC的发生与进展的影响。创伤严重程度评分,代表出血休克的血红蛋白变化、平均动脉压和休克指数,反映低灌注与无氧代谢的乳酸、pH值与碱剩余指标,血管内皮糖萼、syndecan-1、血管内皮细胞标记物血栓调节蛋白(TM)与血管性血友病因子(VWF)因子等指标均具有评估患者TIC发生发展的潜在价值。因此,从出血性凝血衰竭发生机制的角度出发,了解由严重组织创伤、创伤性休克和组织低灌注,继而导致的血管内皮病变过程所诱导的TIC发生机制,能够为实施TIC的早期诊断乃至救治提供可靠的指标组合。

关键词：严重创伤创伤性凝血病血管内皮糖萼

SDD/SOD：ICU感染控制未解决的问题

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中华急诊医学杂志 2015年第2期24卷 121-127页

作者：苏磊童华生广州军区广州总医院重症医学科广州510010

感染是ICU的共性问题,可使患者的病死率增加,内源性感染是ICU感染的重要形式,常来源于咽喉和胃肠预先携带或定植的潜在病原微生物.选择性消化道祛污（selective decontamination of the digestive tract,SDD）和选择性口咽祛污（selecti... 详细信息

感染是ICU的共性问题,可使患者的病死率增加,内源性感染是ICU感染的重要形式,常来源于咽喉和胃肠预先携带或定植的潜在病原微生物.选择性消化道祛污（selective decontamination of the digestive tract,SDD）和选择性口咽祛污（selective oropharyngeal decontamination,SOD）通过清除胃肠和咽喉携带的潜在病原微生物进而预防ICU内源性感染,循证医学证据表明SDD/SOD可有效地预防ICU感染,降低病死率,减少医疗发费.然而SDD/SOD策略仍未在ICU广泛采纳和运用,主要原因是SDD/SOD的有效性、安全性、减少或促进抗生素耐药的倾向性和成本效益仍需进一步商榷.

关键词：感染控制 ICU感染内源性感染病原微生物循证医学证据抗生素耐药成本效益病死率

血必净注射液抑制肺血管内皮糖萼降解改善重症中暑大鼠急性肺损伤

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解放军医学杂志 2023年第12期48卷 1387-1394页

作者：丁程佳陀劲曹晶晶黄洁恩刘超帆童华生陈怿东莞市滨海湾中心医院重症医学科广东东莞523900 深圳市龙岗区第二人民医院广东深圳518000 暨南大学医学部广东广州510632 南部战区总医院急诊科广东广州510632

目的探讨血必净注射液调控血管内皮糖萼异常,改善重症中暑大鼠急性肺损伤的机制。方法将48只Wistar大鼠随机分为对照组、中暑组、血必净组,每组16只,其中8只用于伊文思蓝(EB)法测定。采用高温高湿[温度(40±2)℃,湿度65%±5%]打击60 mi... 详细信息

目的探讨血必净注射液调控血管内皮糖萼异常,改善重症中暑大鼠急性肺损伤的机制。方法将48只Wistar大鼠随机分为对照组、中暑组、血必净组,每组16只,其中8只用于伊文思蓝(EB)法测定。采用高温高湿[温度(40±2)℃,湿度65%±5%]打击60 min制备中暑大鼠模型,血必净组大鼠于造模前连续3 d尾静脉注射血必净注射液(2 ml/kg,2次/d)。各组大鼠于造模后2 h行麻醉处理并取材,记录肺湿/干重比,测定肺泡灌洗液(BALF)蛋白浓度,EB法测定肺血管通透性,HE染色观察肺组织病理学变化,免疫荧光染色观察肺血管表面透明质酸(HA)的表达变化,Western blotting检测肺组织多配体蛋白聚糖‐1(Syndecan-1)、磷脂酰肌醇聚糖-1(Glypican-1)、血管内皮钙黏蛋白(VE-Cadherin)、紧密连接蛋白(Occludin)、血管细胞黏附分子‐1(VCAM-1)及E-选择素(E-selectin)等蛋白的表达,酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清中肿瘤坏死因子‐α(TNF-α)、白细胞介素‐6(IL-6)及肺组织中乙酰肝素酶(HPA)的表达水平。结果血必净可下调肺湿/干重比,减少蛋白渗出,改善肺血管通透性(P<0.01),减轻肺组织损伤(P<0.01),减少肺血管表面HA、Syndecan-1、Glypican-1降解(P<0.01),增加肺血管连接蛋白VE-Cadherin、Occludin的表达(P<0.01),调控黏附蛋白VCAM-1、E-selectin的过度表达(P<0.01),下调TNF-α、IL-6及HPA蛋白的表达(P<0.01)。结论血必净可减少HPA、改善糖萼崩解、修复肺血管完整性、减轻细胞连接损伤、下调黏附分子表达并抑制炎症反应,进而缓解重症中暑所致急性肺损伤。

关键词：重症中暑血必净注射液糖萼急性肺损伤

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热休克蛋白表达异质性在重症中暑中的作用

广东医学 2011年第1期32卷 120-123页

作者：童华生苏磊广州军区广州总医院ICU科广州510010

中暑作为一病理状态被认识已愈数世纪,其确切病理生理机制仍不十分明确。有学者认为中暑是一种高热状态,同时存在全身性炎症反应继而导致以脑病为突出表现的多脏器功能障碍。热休克蛋白（heat shock proteins，HSPs）为一高度保守蛋白... 详细信息

中暑作为一病理状态被认识已愈数世纪,其确切病理生理机制仍不十分明确。有学者认为中暑是一种高热状态,同时存在全身性炎症反应继而导致以脑病为突出表现的多脏器功能障碍。热休克蛋白（heat shock proteins，HSPs）为一高度保守蛋白质，在机体遭受高温、缺血、缺氧、创伤等应激因素作用时常表达迅速增加，可减轻应激损害而维持机体自身稳定状态。近年来，研究表明HSPs在中暑发病机制和脏器功能保护中发挥一定的作用，本文旨在对此进行综述。

关键词：热休克蛋白重症中暑蛋白表达异质性多脏器功能障碍全身性炎症反应高度保守蛋白质病理状态