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lncRNA U90926编码短肽调控巨噬细胞极化在病毒性心肌炎中的作用及机制研究

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lncRNA U90926编码短肽调控巨噬细胞极化在病毒性心肌炎中的作用...

作者：殷国泉皖南医学院

学位级别：硕士

目的:筛选并鉴定具有短肽编码能力的巨噬细胞极化相关lncRNAs;明确lncRNA(long non-coding RNA,lncRNA)U90926及其编码的短肽MPM-87(Macrophage polarization micropeptide-87aa,MPM-87)在巨噬细胞极化过程中的功能,阐明MPM-87调控巨噬细胞极化在病毒性心肌炎中的作用机制。方法:利用生物信息学技术对巨噬细胞中差异表达的lncRNAs进行小开放阅读框s ORF(small open reading frames,s ORF)的鉴定和编码潜能的预测;构建融合表达质粒ORF-GFPmut(start codon-mutated GFP,GFPmut)并转染HEK293T细胞,应用高内涵筛选(high content screening,HCS)技术检测转染细胞中GFP荧光的表达,筛选具有编码潜能的lncRNAs。根据筛选结果,初步锁定其中编码潜能较高的lncRNA U90926做下一步的功能探讨。使用q RT-PCR检测lncRNA U90926分子在巨噬细胞极化过程中的表达和功能;构建CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠模型,检测lncRNA U90926分子在心肌炎小鼠心脏中的表达。构建lncRNA U90926的ORF-Flag标签融合质粒并包装慢病毒表达载体,使用Flag抗体确定lncRNA编码短肽的表达;设计、合成MPM-87多肽序列,并免疫家兔制备特异性抗体,western blot检测MPM-87在巨噬细胞极化过程中的内源性表达;免疫荧光及核质分离蛋白免疫沉淀确定MPM-87在巨噬细胞中的定位;检测MPM-87在正常及CVB3感染小鼠心脏组织内的表达;构建MPM-87的ORF序列(ORF)、U90926的全长序列(U90926)和MPM-87的ORF起始密码子突变(ATG突变为ATT)的U90926全长序列(U90926-ORFmut)的FLAG融合质粒慢病毒表达载体感染RAW264.7巨噬细胞,q RT-PCR、流式细胞术、杀菌实验检测MPM-87在巨噬细胞极化中的作用;免疫共沉淀及质谱分析筛选MPM-87的互作蛋白。结果:应用生物信息学软件Mi Pepid(https://***/Mind AI/Mi Pepid)这一基于机器学习的微肽识别工具对所注释的巨噬细胞中差异表达的lncRNAs序列进行小开放阅读框s ORFs的鉴定及编码潜能的预测;通过设定编码潜能的阈值(Coding Probability>0.9),共筛选出65个具有编码潜能的巨噬细胞极化相关lncRNAs。根据筛选结果,选择编码潜能较高的lncRNA U90926做后续功能探讨。q RT-PCR结果显示lncRNA U90926在M1巨噬细胞中表达上调,si RNA沉默lncRNA U90926表达后,利用q RT-PCR检测M1型巨噬细胞的标志物表达,发现i NOS、TNF-α、IL-12的表达显著降低,提示lncRNA U90926分子能够促进巨噬细胞的M1极化。通过对lncRNA U90926的序列进行分析,我们找到一个264nt的小开放阅读框s ORF,可编码87个氨基酸的微肽,初步将编码的微肽命名为MPM-87(macrophage polarization micropeptide-87aa,MPM-87)。使用Flag抗体检测构建的MPM-87的ORF序列(ORF)、U90926的全长序列(U90926)和MPM-87的ORF起始密码子突变(ATG突变为ATT)的U90926全长序列(U90926-ORFmut)的FLAG融合质粒慢病毒表达载体感染的RAW264.7巨噬细胞,确定只有MPM-87的ORF序列(ORF)、U90926的全长序列(U90926)组可表达FLAG融合蛋白,而对照组和ORF起始密码子突变(ATG突变为ATT)的U90926全长序列(U90926-ORFmut)组不能表达FLAG融合蛋白。利用制备的抗MPM-87多抗,在RAW264.7巨噬细胞系中通过免疫荧光的方法检测M0和M1细胞中的微肽MPM-87的表达,结果显示,MPM-87在巨噬细胞胞胞浆和胞核中均有表达;免疫印迹验证MPM-87在M1巨噬细胞中的表达显著高于在M0巨噬细胞中的表达。此外,我们还确定与正常小鼠相比,MPM-87在VM小鼠心脏浸润的巨噬细胞中表达明显升高。用q RT-PCR、流式细胞术以及大肠杆菌杀菌实验检测构建的MPM-87的ORF序列(ORF)、U90926的全长序列(U90926)和MPM-87的ORF起始密码子突变(ATG突变为ATT)的U90926全长序列(U90926-ORFmut)的FLAG融合质粒慢病毒表达载体感染的RAW264.

关键词：病毒性心肌炎编码短肽长链非编码RNA 巨噬细胞极化

lncRNA HOTAIR作为肺鳞癌预后标记物的生物信息学研究

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皖南医学院学报 2023年第5期42卷 419-422,435页

作者：殷国泉吕坤皖南医学院第一附属医院弋矶山医院中心实验室安徽芜湖241001 皖南医学院第一附属医院弋矶山医院检验科安徽芜湖241001

目的:通过生物信息学分析确定长链非编码RNA HOTAIR(HOTAIR)作为肺鳞癌(LUSC)预后生物标记基因。方法:利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析HOTAIR在泛癌中的表达情况,根据中位数将数据分为高、低表达HOTAIR组,采用Kaplan-Meier法对两组... 详细信息

目的:通过生物信息学分析确定长链非编码RNA HOTAIR(HOTAIR)作为肺鳞癌(LUSC)预后生物标记基因。方法:利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析HOTAIR在泛癌中的表达情况,根据中位数将数据分为高、低表达HOTAIR组,采用Kaplan-Meier法对两组患者进行生存分析并绘制生存曲线、利用linkedOmics数据库分析HOTAIR在LUSC中的临床特征关系及其共表达基因,利用TIMER软件验证不同HOTAIR mRNA表达水平与LUSC患者免疫细胞浸润的相关性,通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估模型的准确性。结果:HOTAIR在多种类型癌症中表达较高,在配对及非配对LUSC样本中,HOTAIR在肿瘤患者的表达均高于正常患者。ROC分析HOTAIR可作为LUSC的潜在的生物标志物,ROC曲线下面积(AUC)=0.883;HOTAIR的表达与病理阶段显著相关(P<0.05);HOTAIR与LUSC患者的总体生存率(OS)、疾病特异性生存期(DSS)、无进展生存期(PFI)相关性无统计学意义;HOTAIR共表达的基因富集在多种免疫反应生物过程中。结论:HOTAIR在LUSC中表达上调,并且与不良生存预后显著相关,可作为LUSC的生物标记物和潜在的治疗靶点。

关键词：肺鳞癌长链非编码RNA HOTAIR 生物信息学

病毒性心肌炎血清外泌体来源的miR-320通过靶向Pik3r1抑制AKT/mTOR通路促进小鼠心肌细胞凋亡

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第6期39卷 516-525页

作者：张欣李雪琴朱良宇殷国泉张苑吕坤皖南医学院重大疾病非编码RNA转化研究安徽普通高校重点实验室皖南医学院弋矶山医院中心实验室安徽芜湖241001

目的探讨病毒性心肌炎血清外泌体miR-320对心肌细胞凋亡的影响及机制。方法使用柯萨奇病毒B3(CVB3)腹腔注射,建立病毒性心肌炎小鼠模型;采用血清外泌体抽提试剂盒提取血清外泌体,与心肌细胞共培养,激光共聚焦显微镜观察心肌细胞摄取外... 详细信息

目的探讨病毒性心肌炎血清外泌体miR-320对心肌细胞凋亡的影响及机制。方法使用柯萨奇病毒B3(CVB3)腹腔注射,建立病毒性心肌炎小鼠模型;采用血清外泌体抽提试剂盒提取血清外泌体,与心肌细胞共培养,激光共聚焦显微镜观察心肌细胞摄取外泌体情况;使用miR-320抑制剂或模拟物转染心肌细胞,实时荧光定量PCR检测miR-320表达水平;采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,Western blot法检测B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)和Bcl2相关X蛋白(BAX)表达水平;生物信息学预测miR-320靶基因并进行基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析;荧光素酶报告基因检测miR-320与其靶基因磷脂酰肌醇3激酶调节亚基1(Pik3r1)的作用关系;Western blot法检测miR-320对蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AKT/mTOR)通路蛋白的影响。结果病毒性心肌炎血清外泌体促进心肌细胞凋亡并上调BAX水平,同时降低Bcl2水平;病毒性心肌炎小鼠心肌组织中miR-320显著上调,且miR-320成熟体和miR-320前体pri-miR-320表达在心肌细胞均明显上调;病毒性心肌炎血清外泌体处理的心肌细胞中miR-320水平显著上调,而转染miR-320抑制剂逆转了外泌体引起的miR-320上调及凋亡率升高;Pik3r1是miR-320的靶基因,其过表达逆转miR-320上调导致的心肌细胞凋亡;miR-320过表达抑制AKT/mTOR通路激活。结论病毒性心肌炎血清外泌体miR-320通过靶向Pik3r1抑制AKT/mTOR通路促进小鼠心肌细胞凋亡。

关键词：病毒性心肌炎外泌体磷脂酰肌醇3激酶调节亚基1(Pik3r1) miR-320 心肌细胞凋亡

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广播电视节目全面预算管理关键环节分析

财讯 2024年第1期 113-115页

作者：殷泉青岛市广播电视台

文章首先分析了目前广播电视节目预算管理中存在的问题，其次明确了开展该研究的目的是提高广播电视节目的经济效益和管理效率，然后采用相关理论和方法，对广播电视节目全面预算管理的关键环节进行了系统研究和探索。通过对研判分析，... 详细信息

文章首先分析了目前广播电视节目预算管理中存在的问题，其次明确了开展该研究的目的是提高广播电视节目的经济效益和管理效率，然后采用相关理论和方法，对广播电视节目全面预算管理的关键环节进行了系统研究和探索。通过对研判分析，揭示了广播电视节目全面预算管理的核心问题和难点所在。最后，通过总结分析，归纳出了一些创新性的管理策略和方法，以完善广播电视节目全面预算管理体系，提高管理水平和质量。希望文章能对广播电视行业在节目预算管理方面的改进和发展有所裨益。

关键词：广播电视节目全面预算管理关键环节分析

评弹盛会青春闪亮——第九届中国苏州评弹艺术节随笔

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曲艺 2024年第7期 16-19页

作者：殷德泉不详

中国苏州评弹艺术节是全国评弹爱好者的共同节日,不少爱好者提前攻略,共赴苏州三年一度的评弹之约。第九届中国苏州评弹艺术节自6月3日开幕以来,全国12家苏州评弹表演团体汇聚一堂,8天里18台精彩演出接踵而至,包含书目演出(分中篇评弹... 详细信息

中国苏州评弹艺术节是全国评弹爱好者的共同节日,不少爱好者提前攻略,共赴苏州三年一度的评弹之约。第九届中国苏州评弹艺术节自6月3日开幕以来,全国12家苏州评弹表演团体汇聚一堂,8天里18台精彩演出接踵而至,包含书目演出(分中篇评弹和短篇选回),专场演出(评话专场和票友专场)等内容。181位名家新秀接连登场,3类12场配套活动同期举办,天天有好戏,场场有精彩,充分展现了苏州评弹艺术的厚重底蕴和创新活力。

关键词：专场演出苏州评弹创新活力票友艺术节

叙论从《啼笑因缘》到《“娜”事Xin说》演变传承

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曲艺 2024年第6期 58-61页

作者：殷德泉不详

张恨水的小说《啼笑因缘》于1930年连载于上海《新闻报》,引起了新老读者的轰动,1931年12月出版单行本,影响更广。因情节发展脉络清晰而集中、矛盾与巧合的设置富有故事张力、细腻的语言动作描墓形成强烈的画面感等特点,以及契合市民阶... 详细信息

张恨水的小说《啼笑因缘》于1930年连载于上海《新闻报》,引起了新老读者的轰动,1931年12月出版单行本,影响更广。因情节发展脉络清晰而集中、矛盾与巧合的设置富有故事张力、细腻的语言动作描墓形成强烈的画面感等特点,以及契合市民阶层对通俗文学需求的市场潜力,都使得《蹄笑因缘》天然就有进行艺术化改编的巨大可能。

关键词：市民阶层《啼笑因缘》通俗文学《新闻报》张恨水画面感语言动作市场潜力

一种基于改进YOLOv7的相机标定特征点检测方法

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兵器装备工程学报 2024年

作者：陈松闫国闯马方远王西泉田晓耕西安交通大学复杂服役环境重大装备结构强度与寿命全国重点实验室中国兵器工业试验测试研究院

在基于视觉方法的军事目标检测等技术中，相机的精确标定是进行目标高精度测量的前提，同时也是开展后续图像处理、目标跟踪、三维重建的基础。相机标定的关键在于准确的检测图像中的标定特征点。以当前使用范围较广的棋盘格标定法为对... 详细信息

在基于视觉方法的军事目标检测等技术中，相机的精确标定是进行目标高精度测量的前提，同时也是开展后续图像处理、目标跟踪、三维重建的基础。相机标定的关键在于准确的检测图像中的标定特征点。以当前使用范围较广的棋盘格标定法为对象，针对受干扰(模糊、重噪声、极端姿态和大镜头失真)的标定图像难以进行特征点提取的问题，提出一种融合改进YOLOv7-tiny深度学习网络和Harris角点检测的相机标定特征点检测算法。针对原始网络在相机标定特征区域检测中的各种问题，引入Gather-and-Distribute信息聚合分发机制替换YOLOv7-tiny的加强特征提取网络(FPN)部分，提高不同层之间特征融合的能力；在主干特征提取部分后加入Biformer注意力机制，提高对小尺寸特征点候选区域的捕捉能力；在Head部分使用改进Efficient Decoupled Head解耦头，在提高精度的同时维持了较低的计算开销。测试结果表明，改进后的YOLOv7-tiny网络对特征点候选区域检测的准确率有显著的提高，达到95.3%，证明了改进后网络的有效性和可行性。

关键词：相机标定深度学习 YOLOv7-tiny 信息聚合分发机制注意力机制 Harris算法

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高校法学专业民法课程教学改革分析

中国科技经济新闻数据库教育 2024年第5期 0104-0107页

作者：罗裕泉殷熙贵州警察学院贵州贵阳550005 重庆市北碚区两江小学重庆400700

我国经济的快速发展带动了法律的不断进步,在高校法学专业的教学中,民法作为重要的必修课程,对于培养实用性的法律人才具有重要意义。当前,在民法课程教学中存在着教学方法过于单一、教学内容缺乏实践性以及专业教师相对欠缺的情况,这... 详细信息

我国经济的快速发展带动了法律的不断进步,在高校法学专业的教学中,民法作为重要的必修课程,对于培养实用性的法律人才具有重要意义。当前,在民法课程教学中存在着教学方法过于单一、教学内容缺乏实践性以及专业教师相对欠缺的情况,这就需要对课程教学进行改革,从而达到提高法律人才自身能力的目的,进而为社会输入高素质法律人才。

关键词：高校法学专业民法课程教学改革

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IP多播的快速转发

通信技术 2002年第4X期35卷 11-13页

作者：殷国泉李乐民电子科技大学宽带光纤传输与通信系统技术国家重点实验室成都610054

随着视频点播、视频会议、远程教育等多播应用的普及,多播分组在路由器中的转发已不能满足日益增长的带宽需求,第三层交换机能以线速处理数据包,能极大地减轻路由器的负载,提高分组的转发速度。对IP多播分组的转发技术进行了讨论,着重... 详细信息

随着视频点播、视频会议、远程教育等多播应用的普及,多播分组在路由器中的转发已不能满足日益增长的带宽需求,第三层交换机能以线速处理数据包,能极大地减轻路由器的负载,提高分组的转发速度。对IP多播分组的转发技术进行了讨论,着重探讨了在第三层交换机中的快速转发、转发存在的问题以及目前的三种解决方案。

关键词： IP多播快速转发多播记录协议