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苦荞FtNAC16、FtNAC33、FtNAC64基因的克隆、功能及序列变异研究

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苦荞FtNAC16、FtNAC33、FtNAC64基因的克隆、功能及序列变异研究

作者：柯瑾贵州师范大学

学位级别：硕士

苦荞(Fagopyrum tataricum)作为一种重要的药食同源特色作物,起源于我国西南地区,属于蓼科荞麦属双子叶植物。苦荞种子不仅含有丰富的营养物质,还含有丰富的生物活性物质,如黄酮、酚酸、三萜和生物碱等,对人体具有极高的保健作用。近年... 详细信息

苦荞(Fagopyrum tataricum)作为一种重要的药食同源特色作物,起源于我国西南地区,属于蓼科荞麦属双子叶植物。苦荞种子不仅含有丰富的营养物质,还含有丰富的生物活性物质,如黄酮、酚酸、三萜和生物碱等,对人体具有极高的保健作用。近年来,苦荞因其优异的保健作用深受人们喜爱,使其加工业得到快速发展。然而,目前生产上的栽培苦荞均属于厚壳苦荞,其种子被厚且坚韧的果壳包裹,导致苦荞脱壳非常困难。苦荞难脱壳已成为制约其加工产业发展的世界性难题。因此,解析苦荞果壳的细胞、生理和分子合成机制对研究并培育易脱壳的薄壳苦荞具有重要意义。本课题组基于前期转录组数据鉴定到3个可能在苦荞果壳细胞次生壁生物合成中起关键调控作用的NAC转录因子基因Ft Pin G0000381200.01、Ft Pin G0007471500.01和Ft Pin G0002596000.01,分别命名为FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64。本研究在此基础上,利用PCR(reverse transcription,RT-PCR)技术,以常规栽培品种厚壳苦荞‘品苦1号’籽粒为模板,克隆得到基因FtNAC16(Gen Bank ***723785)、FtNAC33(Gen Bank ***070416)和FtNAC64(Gen Bank ***070417)。通过对其转录因子特性和表达分析,以及转基因功能验证,探讨转录因子基因FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64对次生壁生物合成及调控网络相关基因表达的影响,以及在苦荞果壳生长发育过程中细胞次生壁生物合成中的功能及其分子调控机制,为培育高产、优质、适应性强的薄壳苦荞新品种提供优异的基因资源和理论依据。主要研究结果如下:1、利用RT-PCR从常规栽培品种厚壳苦荞‘品苦1号’中成功克隆了FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64,其CDS序列全长分别为1 086 bp、861 bp和1 092 bp,分别编码362个、287个和364个氨基酸。蛋白多序列比对和系统进化树分析表明,FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64属于植物NAC转录因子NST亚家族成员。2、构建亚细胞定位载体p BWA(V)HS-FtNAC16-GLosgfp、p BWA(V)HS-FtNAC33-GLosgfp和p BWA(V)HS-FtNAC64-GLosgfp,在烟草下表皮细胞进行瞬时表达,结果表明FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64转录因子均定位于细胞核。3、以构建到pGBKT7载体上的FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64基因为诱饵,和p GADT7质粒共转化至酵母菌株AH109,分析转录激活活性,结果表明FtNAC16不具有转录激活特性,FtNAC33和FtNAC64具有较强的转录激活特性。4、基因共表达分析表明,在种子不同发育时期FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64及下游调控基因(二级调控开关Ft MYB83,三级调控开关Ft MYB103和Ft MYB54)和结构基因(纤维素合成酶Ft CESA4、Ft CESA7和Ft CESA8)共表达。5、12个厚壳苦荞与12个薄壳苦荞次生壁组分(纤维素、木质素和半纤维素)含量分析表明,纤维素和半纤维素含量降低,木质素含量升高,可能是影响薄壳苦荞果壳易碎脱落的原因。6、构建苦荞FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64基因的过表达载体p K7WG2D-FtNAC16、p K7WG2D-FtNAC33和p K7WG2D-FtNAC64,采用农杆菌介导侵染法转化苦荞毛状根,分析转基因毛状根中细胞壁厚度、次生壁组分含量和次生壁生物合成途径相关基因的表达情况。结果表明,过表达FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64转基因毛状根的细胞壁明显加厚,显著提高转基因毛状根中纤维素、木质素和半纤维素的含量,显著提高下游调控基因(Ft MYB54)和结构基因(Ft CESA7、Ft IRX9)等的表达。7、与参考基因组数据比对,20个厚壳苦荞和20个薄壳苦荞的重测序结果表明,FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64的上游启动子序列与基因序列均无明显的变异位点。综上所述,FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64属于NAC转录因子NST亚家族成员,是三个核定位的转录因子,且FtNAC16不具有转录激活特性,FtNAC33和FtNAC64具有较强转录激活特性,可能通过正向调控次生壁合成网络中相关基因的表达促进苦荞种子果壳中次生壁组分的生物合成。

关键词：苦荞 NAC转录因子基因克隆次生壁合成

中药AW戒毒有效部位AW挥发油的制剂学研究

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中药AW戒毒有效部位AW挥发油的制剂学研究

作者：柯瑾成都中医药大学

学位级别：硕士

近年来，毒品泛滥已成为世界公害，其中尤以阿片类(如吗啡、海洛因等)为甚，据调查，目前我国登记在册的吸毒人员已逾105万，每年至少消耗270亿元。吸毒已经成为了亟待解决的社会问题。而作为我国宝贵传统财富的中药戒毒药，以其不含阿... 详细信息

近年来，毒品泛滥已成为世界公害，其中尤以阿片类(如吗啡、海洛因等)为甚，据调查，目前我国登记在册的吸毒人员已逾105万，每年至少消耗270亿元。吸毒已经成为了亟待解决的社会问题。而作为我国宝贵传统财富的中药戒毒药，以其不含阿片类成分不成瘾、副作用小、作为处方中成药易于购买等优势，正打破西药独霸戒毒药物市场的现状。AW作为传统中药，古本草中早有各种解毒的记述，已经进行的药理筛选研究证明，其挥发油部分静脉给药具有显著的戒毒活性，其静脉给药制剂的开发显示出良好的前景。 AW作为传统中药虽已有较为广泛的应用，但其化学研究基础却较为薄弱，挥发油中有效成分与指标成分化学分离的研究未见有任何报道;同时，由于各种增溶剂临床应用的限制，对于脂溶性挥发油制成静脉给药制剂，在制剂学上也有较大的难度。本课题即是针对中药戒毒药的需求，选择经药理筛选确定的戒毒有效部位AW挥发油，以化学方法探明其主要有效成分及指标成分，提取纯化有效部位并制成静脉给药注射剂，对该制剂的质量控制与稳定性进行研究。 AW挥发油化学研究主要通过GC-MS测定，了解了挥发油组成成分情况，筛选出指标成分并建立其可行可控的制备工艺并对其化学结构进行确定，在此基础上建立挥发油中该指标成分含量测定方法，为后期制剂学研究奠定基础。 AW挥发油及AW油乳注射液制备工艺研究中，先对AW挥发油提取纯化工艺系统的筛选确定其条件。再重点进行AW油乳注射液处方及制备工艺的研究。最后通过AW油乳注射液中试研究，验证制备工艺工业化生产的可行性。 AW挥发油及AW油乳注射液质量控制主要对其性状、检查、含量测定等常规项目进行研究，此外作为静脉注射剂为了更全面地对两者的质量进行监控，还建立了AW药材、AW挥发油和AW油乳注射液的指纹图谱以确保其安全有效。对AW油乳注射液的室温留样稳定性和加速稳定性进行考察，验证了AW挥发油及AW油乳注射液液质量稳定。最后委托对AW油乳注射液安全有效性进行考察。该课题的创新点是对AW挥发油成份和理化性质进行了较详细的研究，建立了戒毒有效成分—仲丁基-1-丙烯基二硫化物的分离纯化工艺，并建立其专属性强、重现性好、灵敏度高、易于操作含量测定方法，为AW挥发油其他剂型药品的研发铺平了道路;同时该制剂的研制成功，给众多中药脂溶性成分静脉给药构建了研究平台，拓宽该类成分的给药方式，以进一步提高疗效，丰富我国的药品市场。

关键词：戒毒中药 AW挥发油静脉乳剂仲丁基-1-丙烯基二硫化物制剂学研究指纹图谱

基于多模态教学的高一英语教师ICT能力研究

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基于多模态教学的高一英语教师ICT能力研究

作者：王柯瑾云南师范大学

学位级别：硕士

随着科学技术的不断发展,信息和通信技术（ICT）对社会、经济和教育的影响也随之不断扩大。近年来,国家投入大量的资金用于ICT的校园建设,各级各类学校也都积极投身其中。在英语教学中,尤其是在多模态的英语课堂中,ICT能否产生积极的影... 详细信息

随着科学技术的不断发展,信息和通信技术（ICT）对社会、经济和教育的影响也随之不断扩大。近年来,国家投入大量的资金用于ICT的校园建设,各级各类学校也都积极投身其中。在英语教学中,尤其是在多模态的英语课堂中,ICT能否产生积极的影响,能够产生多大的影响,英语教师的ICT能力是关键所在。对英语教师的ICT能力进行研究是十分有必要的。具体来说,本研究旨在回答以下两个问题:（1）高一年级英语教师对ICT的认知程度如何?持何种态度?（2）在多模态教学过程中,高一年级英语教师ICT能力处于何种水平?呈现什么特点?本研究中,教师的ICT认知由三个部分组成,包括其“在教学中作用的认知”、“对学习者作用的认知”及“对影响教师ICT能力发展因素的认知”。教师的ICT态度由“情感”、“行为”和“认识”三个方面组成。教师的ICT能力由“ICT使用能力”、“ICT素养”、“ICT研究能力”及“ICT意识”四个因素组成。本研究针对昆明市区某校高一年级的三位英语教师展开研究。采用定性和定量相结合的研究方法,通过教师调查问卷、学生调查问卷、访谈提纲及课堂观察表四个研究工具进行数据收集。运用SPSS 22.0对定量数据进行分析,主要包括描述性分析、频率分析及皮尔逊相关分析。访谈获得的定性信息经过文字转写和分析,辅助支持定量数据分析结果。通过研究发现:高一年级英语教师对ICT有一个良好的认知,但仍有待提高。再有,教师认同ICT对英语教学及学习者的积极作用,但对其能否提高教学质量,培养学生的学习能力及信息化能力仍持保留意见。教师认为影响他们ICT能力发展的因素主要包括教师的ICT意识和ICT能力及学校的软硬件设备。三位教师均对ICT持积极态度。此外,高一年级英语教师具备基本的ICT能力,但仍需加强。在ICT能力组成的四个因素中,教师的“ICT研究能力”最强,而“ICT意识”最弱。除“ICT研究能力”外,其他三个因素之间相互都存在显著正相关关系。同时,教师的ICT能力存在人口学变量上的差异,主要体现在教龄、学历、海外经历三个方面。通过研究,作者认为在中学英语教学中,可以从加强各级各类学校的ICT基础设施建设,加强教师培训等方面入手,以提高英语教师的ICT能力。由于本研究存在可用教师样本数量少、教师ICT能力组成因素尚待完善等问题,在未来的研究中,可以通过扩大样本数量、纳入更多的ICT能力组成因素等方法,深入地开展研究。

关键词： ICT 能力多模态教学

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唐诗中的岭南空间书写

唐诗中的岭南空间书写

作者：朱柯瑾烟台大学

学位级别：硕士

岭南地域的空间概称在秦汉之际常以“越”来指代,根据文献记载,以“五岭以南”为内涵的岭南概念最迟不会晚于南北朝时确立,唐王朝继续沿用岭南概念并设立了岭南一道行政单位。唐代贬谪现象十分频繁,岭南又作为首要的流人安置地,使得众... 详细信息

岭南地域的空间概称在秦汉之际常以“越”来指代,根据文献记载,以“五岭以南”为内涵的岭南概念最迟不会晚于南北朝时确立,唐王朝继续沿用岭南概念并设立了岭南一道行政单位。唐代贬谪现象十分频繁,岭南又作为首要的流人安置地,使得众多精英文人渗入到这片荒蛮区域。当诗人踏上这片异域蛮荒,周遭的空间环境刺激着诗人的感官,他们常有意或无意地与中原环境作对比,并对岭南的自然地理、气候特征、社会环境等进行了多角度、全方位、多层次的书写。由此,岭南作为一个不可忽视的空间存在,在唐代诗人笔下大放异彩。本文以唐代诗人书写岭南的诗作为研究对象,从地域文化、空间意象等角度为切入点,对唐代诗人书写岭南的文本进行细致地梳理和分析,提炼出自然空间、社会空间和心理空间三大意象丛,并详细论述了这三大意象丛的构成元素。文章共分四个部分进行论述,第一章为岭南概述,从古称“南越”、“杨越”到“岭南”的名称演变,由族名、政权名到中国山脉以南,实际上显示了岭南地区逐渐内化为中国版图的过程。由于自然空间书写在唐代不同时期的诗人笔下呈现出较大的风格差异,本文第二章采取了较为常见的分法,即初、盛、中、晚唐四个时期。采用纵向对比的方法可以较为直观地展现出不同时期诗人的群体特征和创作风格。神龙逐臣以尽态极妍的宫廷笔法真实地还原了岭南的自然地理风貌,而元和谪臣则描摹风神,风格显得奇绝险怪,由此可以看出由写实逐渐过渡到写意。第三章从社会意象的角度分析了岭南主要的城市意象——广州。广州是名副其实的富裕之都,来往商贸不断,是一座气派的商业大都市,其他州则相形见绌,不可同日而语。同时对岭南独特的人文景观意象和社会空间风尚进行归纳和论述。第四章为心理空间镜像,由于诗人被贬的共同遭遇,他们的心态往往具有相似性,加之万里投荒,死亡伴随,他们的诗句中常渗透死亡气息,所以“忧惧见鬼出”,众多魑魅鬼怪意象在诗人心底投射。同时故乡代表着美好的一面,投射在诗人心里则是他们最纯净的空间期盼。

关键词：唐诗岭南自然空间社会空间心理空间

“星座文化”对大学生受挫行为合理化的影响研究

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“星座文化”对大学生受挫行为合理化的影响研究

作者：王柯瑾东北财经大学

学位级别：硕士

随着改革开放步伐的加快,中西方文化交流日益密切,加之如今互联网技术的迅速发展,给文化传播提供了便利的途径,许多西方文化不断向我国内地渗透,这些文化对中国当代大学生的影响非常广泛。星座文化虽然作为一种亚文化,但在大学生中的传... 详细信息

随着改革开放步伐的加快,中西方文化交流日益密切,加之如今互联网技术的迅速发展,给文化传播提供了便利的途径,许多西方文化不断向我国内地渗透,这些文化对中国当代大学生的影响非常广泛。星座文化虽然作为一种亚文化,但在大学生中的传播速度十分迅速,对大学生的生活、学习和就业产生了一定的影响。本文基于星座文化对大学生的这些影响,研究迷恋星座文化的大学生对自己的受挫行为是如何合理化的。本文中,笔者采用了访谈法和文献分析法对迷恋星座文化的大学生进行了深入、细致的访谈和分析,然后通过对访谈内容进行整理分析,总结出星座文化对大学生受挫行为合理化的影响主要包括三个大方面：其一为星座文化对大学生受挫行为成因合理化的影响,其二为星座文化对大学生受挫行为本身合理化的影响,其三为星座文化对大学生受挫行为处理方面合理化的影响。然后通过研究星座文化本身的特性,将每一大方面细化为两个小方向：第一,从星座文化具有可预测性和消极暗示性入手,分析其对大学生受挫行为成因合理化的影响;第二,从星座文化带给大学生的选择性记忆和心理自我防御入手,分析其对大学生受挫行为本身合理化的影响;第三,从星座文化具有宿命论特征和将个体贴标签式的归类方式入手,分析其对大学生受挫行为处理方面合理化的影响。最后得出结论：大学生利用星座文化对自己受挫后不恰当的行为进行合理化,是一种暂时的合理化,不能从根本上起到解决问题的作用,大学生应该正确认识星座文化的本质,恰当处理星座文化对自己的影响,不应该对其过分迷恋。星座文化对大学生的影响非常广泛,本文的创新点主要在于三个方面：第一,将星座文化与大学生的受挫行为相结合,专注研究星座文化对大学生受挫行为的合理化影响,揭示了星座文化的种种特性对大学生受挫后的心理和行为的影响,最终得出结论证明了笔者最初的假设：当大学生受到挫折表现出不当行为时的合理化主要表现为情感合理化,即个人可以依据行为可能产生积极或消极的情感结果而选择趋向或回避某种行为,但“合理化”本身就存在着严重的问题,是一种虚假的合理。另外,经过访谈、调查和文献分析,笔者发现性别、专业、宗教信仰、过去经历、家庭环境等会影响到受挫大学生对合理化的选择。第二,将星座文化对大学生受挫行为合理化的影响划分为二个层面,即受挫行为成因的合理化、受挫行为本身的合理化和对受挫行为处理的合理化。笔者在分析国内外关于星座文化对大学生影响的研究文献中发现没有学者将星座文化对大学生的影响从这三个层面进行分析和研究,所以,这种分层属于笔者在研究切入点上的创新,而且这种分类贯穿全文,属于笔者研究分析的核心内容,是笔者在本文中创新型研究的集中反映。第三,笔者的研究对分析大学生对其受挫行为处理不当的原因提供了新的思路,拓展了星座文化与受挫行为之间的理论和现实意义,丰富了大学生宿命心理学的研究。目前确实有一部分大学生并不是完全抛弃宿命论的信仰,星座文化只是抛砖引玉,它是大学生迷信行为的新型表现。迷信的消极作用人尽皆知,为了引导大学生树立正确的世界观、人生观和价值观,自觉摒弃一切迷信及变相迷信行为,大学生对星座文化的过分迷恋应当引起当代教育工作者的重视。本文的不足之处亦有很多,由于目前国内外对星座文化对大学生影响的研究并不多,专门研究星座文化对大学生受挫行为的文献更是少之又少,很多时候笔者只能通过自己的观察和研究得出结论,受学术水平和研究经验的限制,难免会有一些不足之处,比如,星座文化是否对大学生的影响始终如一,会不会随环境的变化而变化,如果发生了变化是否说明星座文化对大学生产生的影响并不重要等等,这些都是笔者在今后研究中需要进一步研究和证明的。

关键词：星座文化大学生受挫行为合理化