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血型B抗原模拟多肽/Fas重组腺病毒对小鼠4T1乳腺癌影响的实验研究

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血型B抗原模拟多肽/Fas重组腺病毒对小鼠4T1乳腺癌影响的实验研究

作者：姜兆静南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景机体的免疫系统具有控制肿瘤发生发展的能力,是肿瘤研究中最古老的概念之一。其中肿瘤微环境的免疫状态在肿瘤发生学及治疗方面又具有至关重要的作用。随着科学技术和方法学的进步,越来越多的肿瘤抗原被鉴定出来。研究者发... 详细信息

研究背景机体的免疫系统具有控制肿瘤发生发展的能力,是肿瘤研究中最古老的概念之一。其中肿瘤微环境的免疫状态在肿瘤发生学及治疗方面又具有至关重要的作用。随着科学技术和方法学的进步,越来越多的肿瘤抗原被鉴定出来。研究者发现,虽然很多肿瘤抗原的免疫原性不弱,而且抗原提呈细胞可迅速呈递大多数肿瘤抗原,肿瘤患者体内也确实存在针对肿瘤抗原所产生的免疫应答,但相关免疫应答产物并不能产生有效的抗肿瘤效应。当前多数免疫治疗方法均能够增强患者全身的免疫功能,但抗瘤效果却与预期的相差很多。原因主要在于肿瘤患者免疫功能状态并不能直接反应机体的抗肿瘤免疫效应,即使患者全身免疫功能得到改善,肿瘤微环境内的免疫效应却仍处于抑制状态。肿瘤微环境是肿瘤细胞发生发展过程中所处的内环境,由肿瘤细胞本身、间质细胞、微血管、组织液及少量浸润细胞,如树突状细胞、巨噬细胞等共同组成。作为肿瘤免疫效应阶段的执行场所,肿瘤微环境内存在多种因素均与局部免疫抑制状态的产生有关,并形成了肿瘤局部微环境中特有免疫模式。肿瘤细胞不仅逃避免疫系统的攻击,同时也抑制其生长环境中的免疫细胞的正常功能。这些因素为开辟新的肿瘤免疫治疗方案提供了思路。随着分子生物医学的发展,免疫治疗作为肿瘤第四种治疗模式-生物治疗的重要组成部分,在肿瘤治疗中的地位和作用日趋重要。逆转肿瘤微环境的免疫抑制状态是当前肿瘤免疫治疗的难题与突破点。研究目的应用健康成人B型血全血腹腔注射免疫BALB/c小鼠使其体内产生抗血型抗原B抗体;构建BALB/c小鼠4T1乳腺癌荷瘤模型;在BALB/c小鼠荷瘤模型中瘤内注射血型B抗原模拟多肽/Fas重组腺病毒,测定其在肿瘤组织中的表达情况,观察其对人红细胞悬液免疫后的小鼠肿瘤生长的抑制作用及对生存期的影响;测定瘤内注射重组病毒后小鼠肿瘤微环境淋巴细胞、TNF-α、IFN-γ、IL-2、微血管密度等免疫功能指标,判定其对肿瘤微环境免疫抑制状态的逆转作用。实验方法 1将健康成人全血稀释成不同浓度红细胞悬液,腹腔注射免疫BALB/c小鼠,每次0.2ml,2次／周,免疫后3天、7天、14天、21天、28天,分别测定小鼠体内产生抗血型抗原B抗体效价,择优选择最适宜的红细胞悬液免疫浓度,分析抗体产生的趋势,为后续试验做准备;2无菌环境下培养4T1乳腺癌细胞,至对数生长期,制备细胞悬液（浓度为106/m1）,小鼠乳腺脂肪垫区皮下注射上述浓度4T1乳腺癌细胞0.2ml。7天左右,肿瘤长至1cm左右大小,选取肿瘤无出血坏死的小鼠进一步实验;3选取肿瘤大小相近、肿瘤无出血坏死的18只荷瘤小鼠,随机分3组,分别瘤内注射重组腺病毒Ad-P1/Fas（效价为7×1010pfu/mL）、空腺病毒（效价为2.21×1011pfu/mL）、0.9%NaCL0.1ml,连续注射3天。注射后第10天处死三组小鼠,取出肿瘤组织,应用western blot方法测定B/Fas在肿瘤组织中的表达情况。流式细胞仪检查肿瘤内淋巴细胞的变化、ELISA法测定TNF-α、IFN-γ、IL-2含量、免疫组织化学法检测CD34表达,并判定其对肿瘤微环境免疫抑制状态的逆转作用;436只荷瘤小鼠,分三组,每组12只,每组随机取5只小鼠应用游标卡尺测量三组小鼠肿瘤长径a和垂直宽径b,比较注射前、注射后3天、7天、14天三组小鼠肿瘤体积变化,并观察所有荷瘤小鼠的生存期,设定观察期限为60天。肿瘤体积计算方法如下：V（cm3）=1/2axb2。观察不同处理对小鼠肿瘤生长的抑制作用及对生存期的影响。 5统计方法（1）计量资料结果以均数±标准差表示;（2）不同分组不同时间抗血型抗原B抗体效价、目的蛋白B/Fas的表达量灰度值、肿瘤体积比较应用SPSS13.0统计软件包采用重复测量数据的方差分析比较,不同时间点各处理组间抗血型抗原B抗体效价、目的蛋白B/Fas的表达量灰度值、肿瘤体积、肿瘤内淋巴细胞亚群、细胞因子的测定、肿瘤内微血管密度比较应用SPSS13.0统计软件包采用one-way ANOVA方法分析及组间比较采用LSD法,如方差不齐则选择近似F检验Welch法,及Dunnett’s T3组间比较。以P＜0.05为差异有显著性。（3）各组小鼠生存期间应用Kaplan-Meier法进行统计学检验。组间比较采用Log rank法。以P＜0.05为差异有显著性。实验结果 1成功应用健康成人B型红细胞悬液诱导小鼠产生抗血型B抗原抗体,不同浓度红细胞悬液之间的免疫作用无统计学差异（F=1.871,P=0.196）,免疫后14天、21天抗体效价值达最高。 2瘤内注射B/Fas重组腺病毒后3天、注射后7天、注射后10天、注射后14天,目的蛋白B/Fas均可在肿瘤组织中稳定表达

关键词：免疫治疗血型B抗原 Fas 4T1 腺病毒

人CCL19基因重组腺病毒载体的构建及其在A549细胞中的表达

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实用医学杂志 2012年第4期28卷 546-548页

作者：李纪强姜兆静张积仁南方医科大学珠江医院肿瘤中心广州市510515

目的:构建人CCL19重组腺病毒,在肺癌细胞株A549中验证其表达情况。方法:通过pAdeasy-1系统,获得重组腺病毒Ad-CCL19颗粒,测定病毒滴度。RT-PCR和Western blot分别检测转染A549细胞内CCL19mRNA和蛋白质的表达。结果:经PCR、双酶切鉴定及... 详细信息

目的:构建人CCL19重组腺病毒,在肺癌细胞株A549中验证其表达情况。方法:通过pAdeasy-1系统,获得重组腺病毒Ad-CCL19颗粒,测定病毒滴度。RT-PCR和Western blot分别检测转染A549细胞内CCL19mRNA和蛋白质的表达。结果:经PCR、双酶切鉴定及测序分析,重组腺病毒构建成功;效价为1.2×1011pfu/mL;感染后A549细胞中CCL19mRNA和蛋白质均有表达。结论:成功构建CCL19重组腺病毒载体,并可在A549细胞中有效表达,为进一步研究CCL19的功能奠定了基础。

关键词：腺病毒载体 CCL19 基因肿瘤

微波消融治疗小鼠黑色素瘤及对肿瘤血管生成的影响

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实用肿瘤杂志 2011年第6期26卷 569-572页

作者：李纪强姜兆静张积仁南方医科大学附属珠江医院肿瘤中心广东广州510282

目的研究微波消融对小鼠黑色素瘤肿瘤负荷、生存期、肿瘤血管生成的影响。方法建立C57BL/6J小鼠B16-BL6黑色素瘤皮下移植模型,随机分成对照组、微波低剂量组、微波中剂量组、微波高剂量组,比较各组瘤重,病理学检测消融后肿瘤坏死、复发... 详细信息

目的研究微波消融对小鼠黑色素瘤肿瘤负荷、生存期、肿瘤血管生成的影响。方法建立C57BL/6J小鼠B16-BL6黑色素瘤皮下移植模型,随机分成对照组、微波低剂量组、微波中剂量组、微波高剂量组,比较各组瘤重,病理学检测消融后肿瘤坏死、复发情况,免疫组织化学检测VEGF和CD34表达,计算微血管密度(microvesseldensity,MVD),记录其生存期。结果微波消融各组小鼠肿瘤重量较对照组显著减少(P0.05)。结论微波消融可抑制小鼠消融后黑色素瘤病灶血管新生,并减少肿瘤负荷,但并未延长小鼠生存期。

关键词：黑色素瘤/病理学黑色素瘤/治疗微波治疗应用抗原,CD34/生物合成内皮生长因子/生物合成免疫组织化学

微波消融对荷恶性黑色素瘤小鼠免疫功能的影响

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实用医学杂志 2013年第7期29卷 1055-1057页

作者：李纪强姜兆静陈俊曾融张积仁南方医科大学珠江医院肿瘤中广州市510282

目的:探讨微波消融对荷恶性黑色素瘤小鼠免疫状态的影响。方法:建立C57BL/6J小鼠B16黑色素瘤皮下移植模型,随机分为消融组和对照组。流式细胞术检测血清T淋巴细胞比例;免疫组化检测肿瘤组织CD68、CD49b的表达;ELISA法检测瘤内IFN-γ、I... 详细信息

目的:探讨微波消融对荷恶性黑色素瘤小鼠免疫状态的影响。方法:建立C57BL/6J小鼠B16黑色素瘤皮下移植模型,随机分为消融组和对照组。流式细胞术检测血清T淋巴细胞比例;免疫组化检测肿瘤组织CD68、CD49b的表达;ELISA法检测瘤内IFN-γ、IL-2、TNF-α含量;观察皮下移植瘤体积变化。结果:与对照组相比,消融组血清CD4+T淋巴细胞比例显著增高(P0.05)。与对照组比较,消融组肿瘤组织CD68、CD49b的含量显著提高(P<0.01)。消融组IFN-γ、IL-2、TNF-α含量显著高于对照组(P<0.01)。在不同观察时间点,消融组皮下移植瘤体积均显著小于对照组(P<0.01)。结论:微波消融能上调抗肿瘤T淋巴细胞亚群,激活天然免疫细胞,增加抗肿瘤细胞因子,从而产生抗肿瘤效应。

关键词：黑色素瘤微波消融 T淋巴细胞细胞因子

P1/Fas-CCL19双表达重组腺病毒载体的构建及表达鉴定

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肿瘤防治研究 2012年第7期39卷 793-797页

作者：姜兆静李纪强张积仁南方医科大学附属珠江医院肿瘤中心广州510282

目的利用pAdEasy-1腺病毒包装系统构建血型B抗原模拟多肽P1/Fas-CCL19双表达重组腺病毒,并在体内外试验中验证其表达及可能的疗效。方法应用腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV、骨架质粒pAdEasy-1构建重组腺病毒质粒pAd-CMV-P1/Fas-CCL19并转... 详细信息

目的利用pAdEasy-1腺病毒包装系统构建血型B抗原模拟多肽P1/Fas-CCL19双表达重组腺病毒,并在体内外试验中验证其表达及可能的疗效。方法应用腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV、骨架质粒pAdEasy-1构建重组腺病毒质粒pAd-CMV-P1/Fas-CCL19并转染至HEK293A细胞,获得重组腺病毒Ad-P1/Fas-CCL19颗粒后进一步感染乳腺癌4T1细胞并鉴定转染4T1细胞内P1/Fas-CCL19mRNA和蛋白质的表达。构建经人B型血红细胞免疫的4T1荷瘤小鼠模型,比较瘤内注射重组腺病毒Ad-P1/Fas-CCL19组、空腺病毒组、0.9%氯化钠溶液组的荷瘤小鼠的肿瘤变化及生存期。结果感染后4T1细胞中P1/Fas-CCL19 mRNA和蛋白质均有表达。瘤内注射重组腺病毒Ad-P1/Fas-CCL19较瘤内注射空腺病毒、0.9%氯化钠溶液明显抑制4T1肿瘤的生长,但三组小鼠的生存期无明显区别。结论 P1/Fas-CCL19重组腺病毒载体成功构建,体内外实验均证明了其稳定表达及有效性,为进一步临床研究奠定了基础。

关键词：腺病毒血型抗原B Fas CCL19 4T1 肿瘤

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试论体验式学习理念下的师生对话

内蒙古教育 2021年第12期 37-42页

作者：姜兆静杨钦芬江苏师范大学

体验式学习理念的本质是,要求参与者的学习能达到"具身"的状态,即学习能够实现身体、环境与认知三者之间的良性互动。而师生对话能够促进身体、环境与认知三者之间的互动,对体验式学习理念的实践具有重要的意义。在体验式学习理念下的... 详细信息

体验式学习理念的本质是,要求参与者的学习能达到"具身"的状态,即学习能够实现身体、环境与认知三者之间的良性互动。而师生对话能够促进身体、环境与认知三者之间的互动,对体验式学习理念的实践具有重要的意义。在体验式学习理念下的师生对话,应该以共享概念体系和实践经历,并从中获得反馈为主要目的;它具有双向性、平等性及不对等性等特征。目前,开展体验式学习理念下的师生对话,最大的障碍是教师权威身份下形成的压迫与被压迫的对话关系。为了能顺利开展师生对话,需要通过转变教师的对话观念、重构师生对话关系去实现。

关键词：体验式学习师生对话

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体验:让英语学习走向意义性

现代英语 2021年第4期 121-123页

作者：姜兆静杨钦芬江苏师范大学教育科学学院江苏徐州221116

英语学习的意义性品质决定着英语学习深度、广度以及效度的最终形态。但是目前因为英语学习目标模糊化、内容碎片化以及方式单一化,导致意义性品质缺失,并带来了一系列问题。英语学习的意义性品质回归就成了必要。体验是英语学习意义性... 详细信息

英语学习的意义性品质决定着英语学习深度、广度以及效度的最终形态。但是目前因为英语学习目标模糊化、内容碎片化以及方式单一化,导致意义性品质缺失,并带来了一系列问题。英语学习的意义性品质回归就成了必要。体验是英语学习意义性品质回归的必要路径。基于意义性的英语学习体验经历四个阶段:共同化、表出化、联结化以及内在化等四个阶段。

关键词：学习深度体验英语学习

EGFR突变阴性非小细胞肺癌二、三线治疗的荟萃分析

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东南大学学报（医学版） 2015年第6期34卷 859-867页

作者：杨锁萍丁为民李凯姜兆静郑燕芳南方医科大学珠江医院肿瘤中心广东广州510282 宁波市第二医院介入科浙江宁波315099

目的：比较酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）与二线或三线化疗治疗表皮生长因子受体（EGFR）突变阴性的非小细胞肺癌（NSCLC）患者的疗效。方法：检索Pub Med、Cochrane Library、EMBASE、中国知网和美国临床肿瘤学会（ASCO）会议摘要,对符合... 详细信息

目的：比较酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）与二线或三线化疗治疗表皮生长因子受体（EGFR）突变阴性的非小细胞肺癌（NSCLC）患者的疗效。方法：检索Pub Med、Cochrane Library、EMBASE、中国知网和美国临床肿瘤学会（ASCO）会议摘要,对符合要求的随机对照试验进行荟萃分析。结果：共纳入7个试验,结局指标包括从随机化分配到疾病进展的时间（PFS）和从方案招募开始到患者死亡的时间（OS）。PFS指标显示,TKIs在统计学上差于化疗（风险比HR=1.34,95%CI为1.08-1.65;P=0.007）;OS指标显示,两者差异无统计学意义（HR=1.07,95%CI为0.92-1.24;P=0.395）。移除2个试验后,PFS指标显示,TKIs仍然差于化疗（风险比HR=1.42,95%CI为1.23-1.63;P=0.000）;OS指标显示,两者差异无统计学意义（HR=1.05,95%CI为0.90-1.23;P=0.536）。所有亚组中厄洛替尼对比化疗差异均无统计学意义。结论：对于EGFR突变阴性且可耐受化疗的NSCLC患者,化疗优于TKIs治疗,但是TKIs可用于体力状况评分差的患者。

关键词：非小细胞肺癌吉非替尼厄洛替尼荟萃分析

乳腺癌复发相关基因的文献计量学和生物信息学分析

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中国肿瘤 2012年第2期21卷 127-131页

作者：姜兆静岑东芝杨菲张积仁南方医科大学附属珠江医院肿瘤中心．广东广州510282 上海市靶向分子医学研究所上海200433

[目的]总结对乳腺癌复发具有重要价值的相关基因,以便在基因检测基础上更精确有效地指导乳腺癌的分子预测,及时发现复发病例。[方法]以Embase、Medline/Pubmed、BIOSIS Preview数据库为文献来源,采用文献计量分析法对近10年乳腺癌复发... 详细信息

[目的]总结对乳腺癌复发具有重要价值的相关基因,以便在基因检测基础上更精确有效地指导乳腺癌的分子预测,及时发现复发病例。[方法]以Embase、Medline/Pubmed、BIOSIS Preview数据库为文献来源,采用文献计量分析法对近10年乳腺癌复发相关基因文献进行统计,对其出版年、作者、国家、研究机构、发表期刊进行计量学分析,并对涉及的基因及其产物进行功能分类及通路分析。[结果]共有378篇文献入组,涉及650个乳腺癌复发相关基因。生物信息学分析提示关键基因共87个,瓶颈基因共44个,同时为关键基因和瓶颈基因的有TP53、ESR1CDH1、MYC、EGFR、TNF、CCND1、PCNA、SRC、NFKB1、Bcl-2、IGF1、PPARG、TOP2A、BIRC5、CDK1、VEGFA、BRCA1、FOS、AR、IL6、CCNA2、PTGS2、CDKN1A、CD44、HIF1A、STAT1、APP、ERBB2、FOXM1、PARP1、RRM2、MMP9、RB1、IL8、MKI67、FEN1、KIAA0101。[结论]乳腺癌复发相关的关键基因和瓶颈基因应重视,在此基础上深入研究,可使这些基因从临床角度更好地指导乳腺癌的复发监测,从而改善乳腺癌患者的预后。

关键词：乳腺癌复发基因计量学分析生物信息学