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不同的恒定PH_3浓度下嗜虫书虱抗性品系的种群灭绝时间

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郑州工程学院学报 2003年第3期24卷 1-5,9页

作者：曹阳郭忠建邱丽华王小坚郑州工程学院粮油食品学院河南郑州450052 浙江大学应用昆虫研究所浙江杭州310029 广州市海珠粮食仓库广东广州510335

在(25±1)℃、75%±5%RH条件下,利用连续通气熏蒸仪器测定了嗜虫书虱敏感的参考品系QLe-3和PH3抗性品系GLZLe-1在不同的恒定PH3浓度下的种群灭绝时间(timetopopulationextinction,简称TPE),在50、100、200、400和700mL/m3的浓度下,参考品系QLe-3的TPE分别为6、4、3、2、2d.由于50mL/m3对GLZLe-1品系为无效浓度,无法测得TPE,除此之外GLZLe-1的TPE分别为13、10、7、6d.恒定的PH3浓度和TPE之间的关系可用Cn·t=k式表示,参考品系QLe-3的关系式为C0.44·TPE=42.05(mg/L)n·h,抗性品系GLZLe-1为C0.41·TPE=138.55(mg/L)n·h.两品系的卵对PH3的耐药性都强于成虫和若虫.上述结果表明,采用PH3熏蒸防治抗性储粮书虱的实践中,推荐的最低有效浓度应为100mL/m3,熏蒸时间大于13d.

关键词：嗜虫书虱连续通气熏蒸仪器测定种群灭绝时间磷化氢抗药性储粮害虫

家蚕核型多角体病毒orf25基因在病毒感染过程中编码一个30kDa的晚期蛋白(英文)

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微生物学报 2008年第2期48卷 247-251页

作者：王海燕陈克平郭忠建姚勤江苏大学生命科学研究院镇江212013

首次对家蚕核型多角体orf25基因进行了描述。扩增Bm25基因,亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-2,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达含有GST标签的融合蛋白。IPTG诱导后高效表达GST-Bm25融合蛋白。纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利... 详细信息

首次对家蚕核型多角体orf25基因进行了描述。扩增Bm25基因,亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-2,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达含有GST标签的融合蛋白。IPTG诱导后高效表达GST-Bm25融合蛋白。纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用制备的抗GST-Bm25融合蛋白的多克隆抗体进行表达时相分析显示:24h p.i.检测到30 kDa的蛋白条带。RT-PCR方法,在18-72 h p.i检测到Bm25基因的转录本。结论:以上数据表明Bm25基因编码一晚期表达的30kDa蛋白。

关键词： BmNPV Bin25 表达时相 RT-PCR 多克隆抗体

分子伴侣系统HSC/HSP70促进家蚕核型多角体病毒的增殖

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蚕业科学 2020年第6期46卷 733-739页

作者：郭忠建王宇涛陶柳性江苏大学生命科学学院江苏镇江212013

作为分子伴侣系统之一,HSC/HSP70在细胞许多生理生化通路中起着十分重要的作用。杆状病毒的感染诱导宿主细胞HSC/HSP70的表达,但对HSC/HSP70在家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)生命周期中的作用的研究仍较... 详细信息

作为分子伴侣系统之一,HSC/HSP70在细胞许多生理生化通路中起着十分重要的作用。杆状病毒的感染诱导宿主细胞HSC/HSP70的表达,但对HSC/HSP70在家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)生命周期中的作用的研究仍较少。利用特异性染料,本研究发现BmNPV表达的多种蛋白质在细胞质中形成聚集体。运用槲皮苷抑制HSC/HSP70表达后,BmNPV基因组复制、多角体蛋白表达量以及子代芽生病毒和多角体产量都显著降低。这些结果表明HSC/HSP70对BmNPV的增殖起着非常重要的作用。

关键词： HSC/HSP70 聚集体增殖

家蚕浓核病毒中国株非结构蛋白1(NS1)的表达

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微生物学报 2008年第2期48卷 191-196页

作者：余蔚姚勤郭忠建包方尹慧娟陈克平江苏大学生命科学研究院镇江212013

利用PCR技术扩增出BmDNV-3 NS1基因,将目的基因与原核表达载体pET-30a进行连接,转化BL2l star菌并在该菌中表达,经Western blot鉴定表达的产物为BmDNV-3 NS1蛋白,纯化NS1蛋白并制备兔多克隆抗体。同时BmDNV-3 NS1基因亚克隆到杆状病毒... 详细信息

利用PCR技术扩增出BmDNV-3 NS1基因,将目的基因与原核表达载体pET-30a进行连接,转化BL2l star菌并在该菌中表达,经Western blot鉴定表达的产物为BmDNV-3 NS1蛋白,纯化NS1蛋白并制备兔多克隆抗体。同时BmDNV-3 NS1基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBac-HTb-eGFP中,转化BmDH10BAC感受态细胞,提取的重组Bacmid通过脂质体包埋转染家蚕BmN细胞,再以收获的重组病毒感染家蚕幼虫。家蚕BmN细胞和幼虫感染重组病毒2d后均观察到绿色荧光,经SDS-PAGE分析真核表达的产物与预测的NS1-eGFP融合蛋白大小不一致,说明NS1-eGFP融合蛋白被昆虫内源性的蛋白酶降解。降解的产物用NS1蛋白抗体进行Western blot鉴定为BmDNV-3 NS1蛋白。

关键词：家蚕浓核病毒非结构蛋白1 表达杆状病毒表达系统 Western blot

家蚕生殖细胞相关基因nanos的克隆表达及在胚胎发育中的表达模式

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昆虫学报 2007年第11期50卷 1092-1098页

作者：赵国力陈克平姚勤郭忠建江苏大学生命科学研究院江苏镇江212013

【目的】探讨nanos基因在家蚕Bombyxmori胚胎发育中的表达模式,为进一步研究该基因在家蚕胚胎发育中的功能奠定基础。【方法】根据本实验室提交到GenBank中家蚕nanos的cDNA序列(登录号EF647589)设计引物,扩增出了一条长684bp的编码片段... 详细信息

【目的】探讨nanos基因在家蚕Bombyxmori胚胎发育中的表达模式,为进一步研究该基因在家蚕胚胎发育中的功能奠定基础。【方法】根据本实验室提交到GenBank中家蚕nanos的cDNA序列(登录号EF647589)设计引物,扩增出了一条长684bp的编码片段,对该片段进行了克隆和表达,亲和纯化表达的蛋白并免疫新西兰大白兔制备抗体。Western blot检测家蚕早期胚胎nanos的表达情况,荧光定量PCR检测nanos在整个家蚕胚胎发育中的表达情况。【结果】克隆并表达了一条长684bp的编码片段,得到了分子量约33kD的融合蛋白。用制备的抗血清对家蚕早期胚胎蛋白的Western blot检测表明,nanos在此阶段基本是恒定表达。荧光定量PCR结果显示刚产的卵中nanos的表达量最大,第2天开始急剧下降,此后到第10天表达量几乎没有变化。【结论】本实验克隆的nanos是家蚕中的一个同源物,该基因在家蚕胚胎发育中的表达模式与蜜蜂等有很大的不同,反映了昆虫生殖细胞形成机制的多样性。

关键词：家蚕 nanos 胚胎发育原始生殖细胞荧光定量PCR Western blot

家蚕核型多角体病毒orf90基因在Bac-to-Bac家蚕杆状病毒系统中快速表达

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中国农业科学 2008年第10期41卷 3286-3291页

作者：王强陈克平郭忠建姚勤王海燕陈慧卿江苏大学生命科学研究院

【目的】利用BmNPV的Bac-to-Bac系统快速表达目的基因orf90,为深入研究该基因打下基础。【方法】将目的基因BmNPVorf90克隆到转移载体pFasBacHTb上,并将报告基因egfp插入到orf90的3’末端,形成重组转移载体pFasBacHTb-egfp-90。在将其... 详细信息

【目的】利用BmNPV的Bac-to-Bac系统快速表达目的基因orf90,为深入研究该基因打下基础。【方法】将目的基因BmNPVorf90克隆到转移载体pFasBacHTb上,并将报告基因egfp插入到orf90的3’末端,形成重组转移载体pFasBacHTb-egfp-90。在将其转化到含穿梭载体bacmid的感受态细胞DH10Bac中,通过转座作用,经白斑筛选得到重组穿梭载体。纯化DNA,用脂质体介导转染家蚕BmN细胞,得到重组病毒bacmid-egfp-90。【结果】转染细胞72h后在荧光显微镜下可以观察到强烈的绿色荧光。重组病毒穿刺接种家蚕蛹,5d后观察到很强的荧光。结果表明构建的Bac-to-Bac系统能在家蚕细胞和蛹体中正确的快速表达外源基因。【结论】证明BmNPV的Bac-to-Bac是一个快速表达系统,适合在家蚕上广泛应用。

关键词： BmNPV Bac-to-Bac表达系统 orf90 egfp基因

利用Red系统快速敲除家蚕核型多角体病毒orf60基因

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生物工程学报 2007年第5期23卷 801-805页

作者：王强郭忠建姚勤王海燕陈克平江苏大学生命科学研究院镇江212013

用Red重组系统和最近构建的家蚕核型多角体病毒(BmNPV)bacmid在大肠杆菌BW25113中快速地敲除BmNPVorf60基因。从大肠杆菌BmDH10Bac中提取BmNPVbacmid,将其电转化到含有质粒pKD46(能表达Red重组酶)的大肠杆菌菌株BW25113中,获得了可用于B... 详细信息

用Red重组系统和最近构建的家蚕核型多角体病毒(BmNPV)bacmid在大肠杆菌BW25113中快速地敲除BmNPVorf60基因。从大肠杆菌BmDH10Bac中提取BmNPVbacmid,将其电转化到含有质粒pKD46(能表达Red重组酶)的大肠杆菌菌株BW25113中,获得了可用于BmNPV基因打靶的菌株BW25113-Bac。设计一对长63bp的引物(5′端为orf60基因的左右同源臂,长45bp;3′端长18bp,为氯霉素抗性基因(cat)的首尾序列),以pKD3质粒(含cat)为模板,PCR扩增携带orf60左右同源臂的cat,即打靶线性化片段。将该线性化片段电转入BW25113-Bac菌株,在Red重组酶的作用下,线性化片段与BmNPVbacmid中的orf60基因发生同源重组。设计3对特异引物,用PCR方法证明cat成功地替换了BmNPVorf60基因。重组bacmid DNA转染BmN细胞后,Western blot分析未检测到orf60基因的表达。

关键词： Red重组系统 orf60 基因敲除

家蚕自噬受体蛋白Bmp62与Bmref(2)P形成聚集体的研究

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蚕业科学 2022年第2期48卷 111-117页

作者：郭忠建韩楷钊于萌涵田婷江苏大学生命科学学院江苏镇江212013

p62聚集体在自噬体形成和抗氧化应激过程中起着十分重要的作用。人源p62通过PB1结构域自我寡聚。家蚕基因组只含有一个p62基因。该基因表达两个蛋白,即Bmp62和Bmref(2)P。Bmref(2)P比Bmp62缺少PB1结构域。在家蚕细胞中瞬时表达Bmp62和Bm... 详细信息

p62聚集体在自噬体形成和抗氧化应激过程中起着十分重要的作用。人源p62通过PB1结构域自我寡聚。家蚕基因组只含有一个p62基因。该基因表达两个蛋白,即Bmp62和Bmref(2)P。Bmref(2)P比Bmp62缺少PB1结构域。在家蚕细胞中瞬时表达Bmp62和Bmref(2)P,发现Bmp62和Bmref(2)P在细胞质中共定位且形成聚集体。为研究Bmp62和Bmref(2)P各结构域在聚集体形成中的作用,构建Bmp62和Bmref(2)P的缺失突变体并与eGFP融合表达,发现缺失氨基酸残基1—101的Bmref(2)P在细胞质中弥散分布且不能形成聚集体,而含有PB1的Bmp62缺失突变体都能在细胞质中形成聚集体。对p62同源蛋白的结构域进行分析发现,部分p62不含有PB1结构域。

关键词： Bmp62 Bmref(2)P 聚集体

利用N-端融合(His)_6标签观察家蚕核型多角体病毒泛素蛋白的亚细胞定位

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蚕业科学 2010年第6期36卷 944-948页

作者：郭忠建唐旭东朱颖敏江苏大学生命科学研究院江苏镇江212013 中国农业科学院蚕业研究所江苏镇江212018

为了给家蚕核型多角体病毒(BmNPV)泛素蛋白(UB)的功能研究提供亚细胞定位信息,利用Red重组系统和BmN-PV的bacmid系统,进行2次同源重组,成功地将(His)6标签编码序列引入到BmNPV泛素基因(ub)起始密码子ATG和第2个密码子CAA之间,使得表达的... 详细信息

为了给家蚕核型多角体病毒(BmNPV)泛素蛋白(UB)的功能研究提供亚细胞定位信息,利用Red重组系统和BmN-PV的bacmid系统,进行2次同源重组,成功地将(His)6标签编码序列引入到BmNPV泛素基因(ub)起始密码子ATG和第2个密码子CAA之间,使得表达的BmNPV UB的N-端融合(His)6标签。通过对(His)6的免疫荧光分析观察到BmNPV UB在BmN细胞中呈现3种方式的亚细胞定位:均匀地分布于整个细胞;主要分布于细胞核;分布于细胞核,同时在细胞质中出现零星的点分布。BmNPV UB具有多种不同的亚细胞定位方式,提示其功能的多样性。

关键词：家蚕核型多角体病毒泛素 (His)标签亚细胞定位