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牛大力叶蛋白肽的酶法制备、表征及其应用

牛大力叶蛋白肽的酶法制备、表征及其应用

作者：罗思媛华南理工大学

学位级别：硕士

牛大力主要分布在广东、广西等亚热带地区,资源丰富。其干燥根可入药,具有补虚润肺、强筋活络的功效。牛大力叶子也可用于泡水或煲汤,具有疏散风热、清热解毒的功用。作为药食两用中药,牛大力具有很高的营养和保健价值,但其活性成分的... 详细信息

牛大力主要分布在广东、广西等亚热带地区,资源丰富。其干燥根可入药,具有补虚润肺、强筋活络的功效。牛大力叶子也可用于泡水或煲汤,具有疏散风热、清热解毒的功用。作为药食两用中药,牛大力具有很高的营养和保健价值,但其活性成分的研究尚不深入,主要集中于多糖及黄酮类化合物。本实验以牛大力叶子为原料,采用碱提酸沉法提取出牛大力叶蛋白,探究其理化及功能特性。再通过酶解法制备牛大力叶蛋白肽,经分离纯化、结构鉴定、以及抗氧化、ACE抑制等活性研究,挖掘生物活性肽的构效关系。最后将牛大力叶蛋白肽作为纳米硒的模板调控剂,强化纳米硒的生物活性,拓宽叶蛋白肽的应用范围。本研究的实验结果如下:1、采用碱提酸沉法提取牛大力叶蛋白,通过单因素试验和响应面试验分析法,确定最佳提取工艺为:料液比1:40（w/v）、提取时间2.0 h、提取温度50℃,此条件下蛋白提取率较高,可达79.25±0.78%,且工艺简单,操作可行,易于实现。红外光谱和圆二色谱的分析结果表明牛大力叶蛋白的主要二级结构为β-折叠与β-转角。经SDS-PAGE分析,叶蛋白的分子量在14.4-18.4 k Da范围内。此外,分析牛大力叶蛋白的氨基酸组成发现,该蛋白是一种优质的天然蛋白质,含有丰富的氨基酸,且必需氨基酸与非必需氨基酸含量比值为65.37%,高于WHO/FAO理想蛋白质标准规定的60%。其中,谷氨酸相对含量最高,达13.72%,甲硫氨酸相对含量最少,为1.20%,是第一限制性氨基酸。经研究表明,叶蛋白的持水力和吸油力分别为4.85±0.19%、7.52±0.22 g/g。叶蛋白的等电点在p H 3.0左右,此处叶蛋白的溶解性最小,起泡稳定性和乳化稳定性较好。当p H为7.0时,叶蛋白的起泡性及乳化稳定性较好。2、选取胰蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶四种蛋白酶,分别在各自适宜的条件下水解牛大力叶蛋白,结果表明碱性蛋白酶是最佳酶解用酶,其水解速度相对较快,水解后的蛋白肽抗氧化能力相对较强。再采用响应面分析法探究不同酶解温度、加酶量、酶解时间对牛大力叶蛋白肽抗氧化能力的影响,以优化酶解条件,最终确定为:酶解温度55℃,加酶量3%,酶解时间5 h,该条件下制备的牛大力叶蛋白肽的抗氧化能力极强,在一定浓度范围内甚至超过抗坏血酸,同时,还表现出良好的ACE抑制活性。经研究表明,牛大力叶蛋白肽的主要二级结构为β-折叠,同时,与叶蛋白主要呈明显片层结构不同,叶蛋白肽主要呈管状、球状。此外,由分子量分布可知,叶蛋白肽中5 k Da以下的小分子肽占据93.52%。选取凝胶层析法进行叶蛋白肽的分离纯化,得到G1、G2两个组分,后者表现出更高水平的抗氧化活性及ACE抑制活性。通过UPLC-MS/MS分离鉴定组分G2,得到四条二肽,氨基酸序列分别为Gly-Asp、Asp-Pro、Glu-Ala以及Glu-Met,分子量分别为195.1 Da、225.1 Da、229.1 Da、279.2 Da。而氨基酸组成则表明,牛大力叶蛋白肽及其两个分离组分氨基酸组成齐全,必需氨基酸分别占总量的32.38%、39.36%、47.62%。谷氨酸（Glu）、天冬氨酸（Asp）、亮氨酸（Leu）和缬氨酸（Val）是含量最多的几种氨基酸。3、将牛大力叶蛋白肽作为纳米硒的模板调控剂,在亚硒酸钠与抗坏血酸的还原体系中制备牛大力叶蛋白肽-纳米硒,并研究了不同体积比、底物模板、浓度对纳米硒粒径及分布的影响。结果表明当亚硒酸钠:抗坏血酸:牛大力叶蛋白肽的体积比为1:1:2、叶蛋白肽浓度为1.0 mg/m L时,此条件下可制得形貌理想、平均粒径在80-100 nm范围、分布均一、可稳定放置20天左右的叶蛋白肽-纳米硒颗粒。经研究表明,在反应过程中,牛大力叶蛋白肽与纳米硒可能是通过Se-O、Se-N和物理吸附共同作用。牛大力叶蛋白肽-纳米硒具有良好的抗氧化活性,并且对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用。此外,通过细胞毒性试验发现牛大力叶蛋白肽、牛大力叶蛋白肽-纳米硒以及亚硒酸钠都对Hep G2细胞有抑制作用,其中,叶蛋白肽的毒性最小,叶蛋白肽-纳米硒、亚硒酸钠次之,并且结果表明毒性呈现浓度依赖性。

关键词：牛大力叶子酶解蛋白肽抗氧化活性生物纳米硒

化归思想方法指导下的解题教学研究 ——以高中圆锥曲线为例

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化归思想方法指导下的解题教学研究 ——以高中圆锥曲线为例

作者：罗思媛福建师范大学

学位级别：硕士

化归思想方法十分重要,它不仅是数学问题解决中重要的思维方式,也是十分常用的数学思想方法.高中数学教师能够意识到化归思想方法在解题中的重要性,但在实际教学中仍只重视解题结果,缺乏解题思路的分析与指导.针对这一现状,本文以圆锥... 详细信息

化归思想方法十分重要,它不仅是数学问题解决中重要的思维方式,也是十分常用的数学思想方法.高中数学教师能够意识到化归思想方法在解题中的重要性,但在实际教学中仍只重视解题结果,缺乏解题思路的分析与指导.针对这一现状,本文以圆锥曲线综合题为载体,探讨了化归思想方法解题教学设计,为化归思想方法指导解题教学提供借鉴.本研究整理并总结了数学思想方法、化归思想方法以及圆锥曲线解题教学的研究成果,梳理了化归思想方法的内涵与原则,结合典型例题进行了化归思想方法指导下的圆锥曲线解题分析.通过试卷分析法、访谈记录法以及个案研究法对高中圆锥曲线解题教学现状以及化归思想方法在圆锥曲线解题教学中的应用情况进行了调查,针对习题课中训练化归思想方法的三个阶段,编写了三个利用化归思想方法解题的教学设计,并通过教学实践,检验了教学设计的有效性与可操作性.调查表明学生虽重视圆锥曲线内容,但学习态度与习惯仍存在许多问题,对化归思想方法的认识与应用现状也并不乐观;教师教学时有渗透化归思想方法的意识,但缺乏系统的教学设计,教学时会说明条件如何转化,但没有明确化归对象、化归途径以及化归目标,导致学生步骤化记忆解题过程.研究表明,圆锥曲线综合题可分成曲线方程与轨迹问题、圆锥曲线定义与基本性质问题以及直线与圆锥曲线问题三个基本题型.研究表明,经过多次孕育、初步形成及自如应用三个阶段的训练,学生在圆锥曲线解题中能有意识地应用化归思想方法.不仅如此,这一系列的训练还能有效提升学生解题能力、培养学生思维能力,使学生自主思考形成解题思路,反思解题过程,构建与完善解题图式.

关键词：化归思想方法圆锥曲线解题教学

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不同端员电气石组成与晶体化学特征

中国陶瓷 2010年第6期46卷 3-7页

作者：罗思媛孙阳艺费慧龙教育部纳米矿物材料及应用工程研究中心中国地质大学材料科学与化学工程学院武汉430074

电气石作为一类以含硼元素为典型特征的环状结构硅酸盐矿物,由于在电磁、催化、红外辐射、保健、环保、宝石等材料工业领域有着广泛应用价值,近年来成为人们广泛关注的新型环境矿物材料。本文从电气石族矿物的化学成成和结构出发,对比... 详细信息

电气石作为一类以含硼元素为典型特征的环状结构硅酸盐矿物,由于在电磁、催化、红外辐射、保健、环保、宝石等材料工业领域有着广泛应用价值,近年来成为人们广泛关注的新型环境矿物材料。本文从电气石族矿物的化学成成和结构出发,对比研究了铁电气石、镁电气石、锂电气石、锰电气石、富硼电气石几种端员的矿物特征差异,概述了组成与结构对电气石族矿物典型物化性质的影响规律。

关键词：电气石矿物端员晶体结构

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钐(Ⅲ)配合物的荧光性能影响因素研究进展

稀土 2010年第4期31卷 70-74页

作者：费慧龙罗思媛孙阳艺马峰胡秋萍中国地质大学材料科学与化学工程学院湖北武汉430074

钐的有机配合物是一类潜在的发光材料,其光性能受到配体的能量、取代基、对称性及第二配体和异核金属的影响。从配体和异核金属的引入两个方面出发,综述探讨了钐配合物荧光性能的相关影响因素。

关键词：钐(Ⅲ)配合物荧光性能配体杂核金属

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我国控温储粮的现状及研究进展

粮食科技与经济 2017年第5期42卷 41-43,48页

作者：罗思媛郭红英张杰湖南农业大学食品科技学院湖南长沙410128 湖南中储粮粮油质监中心湖南长沙410600

粮食储藏不但要确保安全,更重要的是要实现绿色环保,控温储粮便是行之有效的方法之一。文章综述了中国粮食控温储藏的推广应用情况及研究进展,并结合当前存在的问题,展望了中国粮食控温储藏技术的未来趋势。

关键词：控温储粮技术研究现状发展趋势

麦胚蛋白双酶酶解物的制备及其体外醒酒活性的研究

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中国粮油学报 2018年第5期33卷 87-93页

作者：罗思媛郭红英张琳娜王锋谭兴和何蕾湖南农业大学食品科学与技术学院长沙410128 食品科学与生物技术湖南省重点实验室长沙410128

为充分利用麦胚资源,制备具有醒酒作用的麦胚肽,本研究以Na_2CO_3预处理过的麦胚为原料,以肽得率(TCA-PSI)、水解度(DH)及乙醇脱氢酶(ADH)激活率为指标,研究了碱性蛋白酶(Alcalase)、中性蛋白酶(Neutral)双酶分步酶解工艺及酶解物的醒... 详细信息

为充分利用麦胚资源,制备具有醒酒作用的麦胚肽,本研究以Na_2CO_3预处理过的麦胚为原料,以肽得率(TCA-PSI)、水解度(DH)及乙醇脱氢酶(ADH)激活率为指标,研究了碱性蛋白酶(Alcalase)、中性蛋白酶(Neutral)双酶分步酶解工艺及酶解物的醒酒活性。结果表明,双酶分步酶解的最优工艺条件为麦胚蛋白质量分数为3.5%,Alcalase添加量4 000 U/g,Neutral添加量1000 U/g,所得酶解物的TCA-PSI、DH、ADH激活率分别为:75.49%、65.18%、68.37%。表明麦胚蛋白双酶酶解物可以显著提高ADH的活力,具有较好的体外醒酒活性。

关键词：麦胚蛋白双酶酶解肽得率乙醇脱氢酶醒酒活性

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浅谈我国鸡蛋干产品的研究进展及前景展望

中国市场 2017年第33期 12-14,25页

作者：罗思媛刘焱王馨颖陈俊佑周策睿湖南农业大学食品科学与技术学院湖南长沙410128 湖南农业大学食品科学与生物技术湖南省重点实验室湖南长沙410128

禽蛋是我国"菜篮子"工程不可或缺的重要大宗农产品。近年来,我国禽蛋生产和蛋品加工业均发生了巨大的变化,在蛋与蛋制品加工等领域取得了长足的进步,新产品层出不穷。鸡蛋干是一种新型的蛋品深加工产品,具有极大的市场潜力。文章简单介... 详细信息

禽蛋是我国"菜篮子"工程不可或缺的重要大宗农产品。近年来,我国禽蛋生产和蛋品加工业均发生了巨大的变化,在蛋与蛋制品加工等领域取得了长足的进步,新产品层出不穷。鸡蛋干是一种新型的蛋品深加工产品,具有极大的市场潜力。文章简单介绍了鸡蛋干生产加工的原料选择和研究进展,并对存在的问题进行讨论,以期为该产品的进一步开发和推广提供参考。

关键词：禽蛋鸡蛋干研究进展前景展望

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铕掺杂无机红色荧光材料的研究进展

电子元件与材料 2010年第5期29卷 75-78页

作者：孙阳艺罗思媛费慧龙陈洪尚淑娟王永钱中国地质大学材料科学与化学工程学院湖北武汉430074

介绍了高温固相反应法、sol-gel法、化学共沉淀法、水热合成法、微波辐射法等几种制备铕掺杂红色荧光材料的方法,并比较了各种制备方法的优缺点;总结了以氧化物、无机非金属酸盐和金属酸盐为基质材料的铕掺杂红色荧光材料的制备方法及... 详细信息

介绍了高温固相反应法、sol-gel法、化学共沉淀法、水热合成法、微波辐射法等几种制备铕掺杂红色荧光材料的方法,并比较了各种制备方法的优缺点;总结了以氧化物、无机非金属酸盐和金属酸盐为基质材料的铕掺杂红色荧光材料的制备方法及应用。最后对铕掺杂红色荧光材料的发展进行了展望。

关键词： Eu3+掺杂红色荧光材料综述制备方法应用

研究社会文化变迁的新视角——表征相似性分析:以老年人心理健康为例

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心理学报 2024年第7期56卷 938-953,I0011-I0029页

作者：袁航罗思阳中山大学心理学系、社会认知神经科学与精神健康广东省哲学社会科学重点实验室广州510006

在心理学及其他社会科学研究中,社会变迁研究主要使用单维度线性分析方法探索特定心理或行为的变化趋势以及影响社会变迁的潜在因素,缺乏对多维变量内部结构变迁的关注,也难以比较不同尺度的社会变迁现象。本研究将介绍一种从模式角度... 详细信息

在心理学及其他社会科学研究中,社会变迁研究主要使用单维度线性分析方法探索特定心理或行为的变化趋势以及影响社会变迁的潜在因素,缺乏对多维变量内部结构变迁的关注,也难以比较不同尺度的社会变迁现象。本研究将介绍一种从模式角度进行社会变迁研究的方法——表征相似性分析,并以1998~2018年间对中国老年人健康影响因素的纵向追踪数据(CLHLS)与对应时期的社会文化变迁测量为实例,演示如何构建多维度的表征相似性框架,依次介绍多变量单维模式分析[时间、空间、心理与意识空间(Mental space,简称“意间”)]、多变量跨维度模式分析(意间−时间,意间−空间,意间−时间−空间)、跨尺度模式分析(地区−国家)、概念模式分析,以及表征相似性分析与传统方法的耦合分析,随后展望了表征相似性分析的拓展方向。

关键词：社会文化变迁表征相似性模式分析跨尺度老年人心理健康

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