粉防己生物碱抗肺癌活性及其作用机制研究

作     者：李碧晨 

作者单位：中南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘韶

授予年度：2023年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：粉防己生物碱 非小细胞肺癌 RNA-seq MGLL BBC3 

摘      要：目的:研究粉防己总生物碱(total alkaloids in ***,TAS)及其主要成分粉防己碱、防己诺林碱、千金藤碱在体外抗非小细胞肺癌的活性及其与顺铂协同抗肺癌作用的机制。方法:1.通过CCK8实验初步探讨TAS对NSCLC细胞的直接抑制作用以及对细胞增殖能力的影响。通过划痕实验、克隆实验、流式细胞术验证TAS对NSCLC细胞迁移、克隆形成及细胞凋亡的影响。通过将低浓度的TAS及其单体成分与顺铂联用,验证TAS对NSCLC细胞对顺铂敏感性的影响。2.通过测序手段进一步探究TAS抑制NSCLC的作用机制,利用RNA-seq检测TAS处理后的H1299细胞转录组水平变化,对差异表达基因进行鉴定和分析,并通过GSEA分析确定差异基因富集的通路。分别用RT-qPCR和Western Blot法测定细胞内差异表达基因的mRNA和蛋白质表达水平。3.采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对TAS化学成分组成进行分析,初步探讨TAS协同顺铂发挥抗肺癌作用的潜在药效物质基础。结果:***对A549和H1299细胞的增殖、迁移、克隆均有抑制作用,并增加细胞凋亡率,且呈时间和剂量依赖性。非细胞毒性浓度(对A549细胞:1.0μg/ml;对H1299细胞:3.0μg/ml)的TAS及其生物碱单体(对A549细胞:5μM;对H1299细胞:10μM)和顺铂联合使用可以显著抑制A549和H1299细胞的活力,增加细胞凋亡率。***测序以及体外实验验证结果表明MGLL和BBC3为差异表达基因,TAS可通过上调MGLL和BBC3的表达来调节脂肪酸代谢和诱导细胞凋亡。3.通过UPLC-Q-TOF-MS/MS共鉴定TAS中37种生物碱单体成分,为探索TAS抗肺癌的潜在药效物质基础提供理论依据。结论:***对NSCLC细胞有较强的抑制作用,通过诱导细胞凋亡发挥抗肺癌作用。***及其主要生物碱成分可协同顺铂发挥抗肺癌作用,并具有作为多靶点药物治疗肺癌的潜力。***表现出较强的NSCLC细胞抑制活性的可能原因是多种生物碱协同发挥作用的结果,通过阐明TAS的化学成分组成能为研究粉防己生物碱抗肺癌的药效物质基础提供依据。图21幅,表9个,参考文献73篇