SNHG1促进非小细胞肺癌细胞增殖和迁移的研究

作     者：房念珍 

作者单位：天津医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：尤嘉琮

授予年度：2015年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：非小细胞肺癌 非编码RNA SNHG1 增殖 迁移 

摘      要：背景与目的:肺癌是全世界最常见的恶性肿瘤,肺癌的死亡率在所有癌症中高居首位,而且肺癌的临床预后情况及5年生存率均不甚理想。因此,寻求一种用于早期诊断和治疗肺癌的新型生物标志物尤为重要。越来越多的证据表明,非编码RNA（nc RNA）广泛参与肺癌的发生和发展。nc RNA是一类不能翻译成蛋白质的RNA序列,依据其长度可将nc RNA分为两类:小于200 nt的称为小RNA（small RNA）,大于200nt的称为长链非编码RNA（Lnc RNA）。其中小RNA又包括微RNA（micro RNA,mi R）、干扰小RNA（small interfering RNA,si RNA）、核小RNA（small nuclear RNA,sn RNA）和核仁小RNA（small nucleolar RNA,sno RNA）等。在哺乳动物中,sno RNA由RNA聚合酶II转录而来,其长度为60-300kb,通常被称之为“管家基因或是作为mi RNA的参考基因。目前,已发现的sno RNA有400多个。但其中只有半数的sno RNA的靶点被确定或预测。最新研究表明,sno RNA在癌症的进展中可能发挥重要作用。本研究旨在筛选与肺癌发生发展密切相关的非编码RNA,并对其在非小细胞肺癌中的生物功能进行探讨。材料与方法:（1）通过文献检索分析筛选出20种可能与肺癌发生发展相关的nc RNA,应用实时定量PCR（real-time PCR）方法检测它们在7株非小细胞肺癌（non small cell lung cancer）细胞系和1株正常支气管上皮细胞系中的表达水平,从中筛选出在非小细胞肺癌细胞系和正常支气管上皮细胞系中表达水平存在显著差异的nc RNA;（2）从筛选到的nc RNA中选取SNHG1进行进一步研究,应用RNA干扰（RNAi）将不同片段si-SNHG1转染H1299细胞系,应用real-time PCR技术检测干扰效率,确定有效干扰片段;（3）应用平板克隆结晶紫染色方法,检测SNHG1对H1299细胞增殖能力的影响;（4）应用细胞计数法,分别对转染si-SNHG1 24、48、72、96和120小时后的H1299细胞进行细胞计数,绘制细胞生长曲线,检测SNHG1对H1299细胞生长的影响;（5）应用RNA干扰和划痕实验,检测SNHG1对H1299细胞迁移能力的影响;（6）通过软件预测和real-time PCR方法,预测和验证SNHG1调控的靶基因。结果:（1）real-time PCR实验显示:与正常支气管上皮细胞系（BEAS-2B）相比,LOC100505685在肺癌细胞系L9981、H1299、SK-MES-1和YTMLC-9中的表达水平显著上调（p0.05）;（2）real-time PCR实验显示:与正常支气管上皮细胞系（BEAS-2B）相比,LOC101926959在L9981、H460、SK-MES-1和YTMLC-9细胞中表达水平显著上调（p0.05）;（3）real-time PCR实验显示:与正常支气管上皮细胞系（BEAS-2B）相比,SNHG1在NL9980、L9981、H1299、H460、SK-MES-1和YTMLC-9细胞中表达水平显著上调（p0.05）;（4）real-time PCR实验显示:与正常支气管上皮细胞系（BEAS-2B）相比,MIR210HG在L9981和SK-MES-1细胞中表达水平显著上调（p0.05）;（5）real-time PCR实验显示:与正常支气管上皮细胞系（BEAS-2B）相比,LINC00426在L9981、SK-MES-1和YTMLC-9细胞中表达水平显著上调（p0.05）。（6）RNA干扰和real-time PCR实验结果显示,si-SNHG1-862和si-SNHG1-126片段的干扰效率显著,为有效的干扰片段,而si-SNHG1-468片段干扰效果不显著（p0.05）;（7）平板克隆结晶紫染色实验结果显示,分别转染si-SNHG1-862和si-SNHG1-126后H1299细胞的增殖能力显著降低（p0.05）,而转染si-SNHG1-468后H1299细胞的增殖能力无显著变化（p0.05）;（8）细胞计数法绘制生长曲线实验结果显示,分别转染si-SNHG1-862和si-SNHG1-126后H1299细胞的生长能力显著降低（p0.05）,转染si-SNHG1-468后H1299细胞的生长情况无显著变化（p0.05）;（9）划痕实验结果显示,转染si-SNHG1-862、si-SNHG1-126和后H1299细胞的迁移能力均显著降低（p0.05）;（10）通过软件预测并经real-time PCR验证,转染si-SNHG1-126后的H1