PADI4在食管鳞癌中的表达水平及其生物学功能的研究

作     者：薛松涛 

作者单位：福建医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈椿

授予年度：2019年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：食管鳞状细胞癌 PADI4 增殖 迁移 侵袭 

摘      要：目的通过验证PADI4在食管鳞状细胞癌（以下简称为食管鳞癌）,癌旁正常组织和食管鳞癌细胞系中的表达水平,结合患者的临床病理资料,探讨PADI4表达水平与临床病理特征的相关性。同时,探究PADI4对食管鳞癌细胞生物学功能的影响及作用机理,验证其作为食管鳞癌诊断和治疗的标志物和靶标的潜力。方法1.从接受食管癌根治性切除术的患者病理标本（包括食管鳞癌和癌旁正常组织）中提取总RNA,进行高通量转录组测序分析;2.使用生物信息学技术筛选差异表达的编码基因;3.实时荧光定量PCR检测73例食管鳞癌及癌旁正常组织中PADI4的表达水平。结合临床病理资料,探讨PADI4表达水平与临床病理特征的关系;4.采用实时荧光定量PCR检测食管鳞癌细胞系中PADI4的表达水平;5.特异性小干扰RNA敲低食管鳞癌细胞中PADI4的表达,通过MTS,细胞平板克隆和Transwell小室探究PADI4对细胞增殖与克隆,迁移和侵袭的影响。结果1.高通量测序数据结果显示,食管鳞癌中存在大量差异性表达的编码基因。相对于癌旁正常组织,食管鳞癌中PADI4显著上调表达,表达倍数变化均大于5.5;2.实时荧光定量PCR结果显示,56例（56/73,76.7）食管鳞癌中PADI4的表达明显高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义（P0.05）;***4的表达水平与肿瘤位置（P=0.011）密切相关,与性别、肿瘤浸润深度、肿瘤分化程度、肿瘤分期以及淋巴结转移无明显相关性（P0.05）;4.与癌旁正常组织相比,PADI4在食管鳞癌细胞系中表达上调;5.特异性小干扰RNA干扰表达后,PADI4在食管鳞癌细胞中的表达水平相较于阴性对照组明显降低（P0.001）;***和细胞平板克隆实验表明,与对照组相比,敲低PADI4表达后细胞增殖和克隆受到显著抑制（P0.001）;***小室结果显示,与阴性对照组相比,干扰PADI4表达后细胞迁移和侵袭受到显著抑制（P0.001）。结论1.食管鳞癌组织中存在大量异常表达的编码基因;***4在食管鳞癌组织和食管鳞癌细胞系中表达上调,可能是食管鳞癌诊断的潜在生物标志物;***4的表达水平与食管鳞癌患者的肿瘤位置密切相关（P=0.011）,而与性别,淋巴结转移,浸润深度和肿瘤分化程度无关（P0.05）;4.特异性小干扰RNA干扰PADI4在食管鳞癌细胞中的表达后,细胞增殖与克隆,迁移和侵袭均受到明显抑制,这表明PADI4可能在食管鳞癌的发生和发展中发挥致癌基因的作用,并且是治疗食管鳞癌的潜在靶标。