检索结果-南通市图书馆

A novel padi4/SOX4/PU.1 signaling pathway is involved in the committed differentiation of acute promyelocytic leukemia cells into granulocytic cells

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

A novel PADI4/SOX4/PU.1 signaling pathway is involved in the...

padi4基因在白血病细胞定向分化或凋亡中的作用及关键机制研究

第十届全国免疫学学术大会

作者： Guanhua Song Lulu Shi Yuqi Guo Linchang Yu Lin Wang Xiaoyu Zhang Lianlian Li Xia Ren Qiang Guo Guosheng Jiang Institute of Basic Medicine Shandong Academy of Medical Sciences

Aims:The hematologic malignancy acute promyelocytic leukemia(APL)exhibits a failure of myeloid *** patients with APL can be induced to complete remission by all-trans retinoic acid(ATRA)or arsenic trioxide treatment through presumed degradation of the PML-RARαfusion ***,however,HL-60 cells,which are PML-RARαnegative,can also be induced to differentiate into more mature granulocytes by ATRA or arsenic trioxide,indicating that degradation of PML-RARαis not the only molecular mechanism that can induce myeloid ***,gaining knowledge regarding the molecular mechanisms involved in the pathogenesis of APL is vital to identifying novel combination treatments that enhance actual cure *** this study,we investigate the mechanism for the suppression of padi4 in leukemic ***,its biological and molecular effects were also studied using in vivo ***:The gene expression profiling of HL-60 cells was used to investigate the alternative mechanism of impaired differentiation in *** expression of peptidylarginine deiminase 4(padi4),which could post-translationally converts arginine into citrulline,was restored during ATRA-induced *** further identified that hyper-methylation in the padi4 promoter was associated with its transcriptional repression in HL-60 and NB4(PML-RARαpositive)***,padi4 translocated into the nucleus upon ATRA exposure and promoted the ARTAmediated *** studies using RNAi knockdown or adenovirus-mediated delivery of padi4,along with chromatin immunoprecipitation,helped identify PU.1 as an indirect target and SOX4 as a direct target of ***:Indeed,padi4 regulates SOX4-mediated PU.1 expression,and thereby the differentiation process,in a SOX4-dependent manner.

关键词： padi4 methylation differentiation leukemia

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

PADI4基因在白血病细胞定向分化或凋亡中的作用及关键机制研究

作者：李红江济南大学

学位级别：硕士

背景padi4（Peptidylarginine deiminase4），即肽酰基精氨酸脱亚胺酶，最初发现在人类急性白血病细胞HL-60细胞中，padi4基因编码的酶催化精氨酸残基转化为瓜氨酸残基，此过程称为瓜氨酸化。padi4主要表达在血液淋巴细胞，并且在炎症... 详细信息

背景padi4（Peptidylarginine deiminase4），即肽酰基精氨酸脱亚胺酶，最初发现在人类急性白血病细胞HL-60细胞中，padi4基因编码的酶催化精氨酸残基转化为瓜氨酸残基，此过程称为瓜氨酸化。padi4主要表达在血液淋巴细胞，并且在炎症和免疫反应中发挥作用。因为由HL60细胞诱导的粒细胞和巨噬细胞中检测到了padi4的表达，所以认为padi4和这些细胞的分化、凋亡有关。但是在生理状态下，padi4的准确功能和作用底物还知之甚少。白血病是导致人类死亡的重要原因之一，近几年，研究发现证明padi4在多种恶性肿瘤中高表达并且参与了肿瘤发生发展过程，这说明padi4在肿瘤组织的表达及肿瘤的发病机理中有重要作用，但是padi4基因与白血病的相关研究未见报道。迄今为止，很多生物标志分子已用于恶性肿瘤的诊断，但是对于肿瘤预后的大规模调查来说，这些生物标志的特异性和敏感性还不够，因为这些肿瘤标志仅仅在一种或几种肿瘤有表达。研究表明padi4在各种恶性肿瘤中都高表达，但是在正常组织和良性肿瘤中不表达或表达很低。因此padi4有望作为一种免疫组化标记，从而区分肿瘤细胞和非肿瘤细胞，并且可以定义肿瘤的结构。因为可以检测到恶性肿瘤患者的血液中padi4表达水平很高，但是手术切除肿瘤以后，患者血液中的padi4表达水平明显降低，因此可以将该酶作为肿瘤预后的一种血清标志以弥补目前肿瘤诊断的方法的不足。此外，padi4在肿瘤细胞表达的特殊性使得padi4可以作为肿瘤治疗的潜在靶点。因此padi4具有重要的临床应用价值，我们应该进一步研究该靶点，使其作为一个有效的临床诊断的工具。我们在前人研究的基础上，初步探讨padi4与白血病细胞分化的关系，为白血病的临床治疗提供新的理论依据和治疗靶点。目的本课题在以上研究背景的基础上，通过体外实验探讨padi4基因与白血病细胞分化是否有关为切入点，重点观察HL60细胞经全反式维甲酸诱导向粒系分化后padi4表达变化，以及调控padi4表达后对细胞分化的影响，拟验证padi4基因与白血病的关系，为白血病的临床治疗提供一种新的治疗靶点。方法通过WB、RT-PCR方法检测HL-60、K562、U937等共9种不同类型白血病细胞中padi4的表达情况，收集不同类型白血病患者的临床骨髓活检标本，通过免疫组织化学技术检测padi4的表达情况。分别建立全反式维甲酸或三氧化二砷诱导HL60细胞模型，于诱导的0h、24h、48h、72h和96h分别在转录和翻译水平检测padi4表达变化。体外细胞实验，采用RNAi技术以及构建padi4真核表达载体转染至HL60细胞，调控padi4在HL60细胞中的表达，观察对细胞分化的影响。每组实验均重复3次，实验数据结果采用均数±标准差表示，均数采用T检验或单因素方差分析，以Ppadi4表达，观察对细胞分化的影响。结果9株不同的白血病细胞中padi4均有表达，不同类型白血病细胞表达量不同;全反式维甲酸诱导HL60细胞后，在诱导的96h内，padi4在转录和翻译水平呈现出一致的降低趋势，通过灰度值比较与对照组相比以及四个时间点两两比较均具有统计学意义（Ppadi4在转录和翻译水平呈现出一致的升高趋势，通过灰度值比较，与对照组相比以及四个时间点两两比较均具有统计学意义（P43例白血病患者骨髓活检标本中padi4具有表达，主要表达在胞浆，并且显著高于正常对照组，不同的白血病类型padi4表达不同。结论padi4基因与白血病细胞的分化和凋亡有关。随着HL60细胞分化程度的提高，padi4在转录和翻译水平均逐渐降低;高水平的padi4表达可以诱导HL60的凋亡;padi4基因是白血病治疗的潜在治疗靶点。

关键词： padi4 白血病 HL60细胞 ATRA As2O3 分化凋亡

padi4在ATRA诱导HL-60细胞分化过程中的作用及其信号通路调控研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

PADI4在ATRA诱导HL-60细胞分化过程中的作用及其信号通路调控研究

作者：禹林昌济南大学

学位级别：硕士

背景白血病是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病,因白血病细胞自我更新增强、增殖失控、分化障碍、凋亡受阻而停滞在细胞发育的不同阶段,是导致人类死亡的恶性肿瘤之一。流行病学调查显示,白血病每年发病率约为3-4/105,约占恶性肿瘤总发... 详细信息

背景白血病是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病,因白血病细胞自我更新增强、增殖失控、分化障碍、凋亡受阻而停滞在细胞发育的不同阶段,是导致人类死亡的恶性肿瘤之一。流行病学调查显示,白血病每年发病率约为3-4/105,约占恶性肿瘤总发病率的5%,我国每年新增白血病患者40 000多例,其中20 000多例患者是儿童。骨髓移植(Bonemarrow transplantation,BMT)是急性白血病最有效治疗方法,但受费用昂贵,风险大,HLA相同的供体不足等条件限制,且移植后合并症较多,早期死亡率高,在国内推广使用尚有困难。目前,白血病属于血液系统的恶性克隆性疾病,大部分仍无法彻底治愈,联合化疗仍是急性白血病的主要治疗手段。近年来的研究发现,全反式维甲酸(All-Trans-Retinoic Acid,ATRA)又名维A酸,其他名如维甲酸、维A甲酸等,化学名称为(13E)分子式为C20H2802,主要是维生素A酸的衍生物,为维生素A在体内的中间代谢产物,是维持生长发育不可缺少的物质,可以诱导VSMC分化及抑制VSMC增殖。维甲酸受体(retinoic acid receptor,RAR)是一种重要的细胞核受体,有α、β、γ三种亚型,在VSMC中存在的RARα与ATRA结合后诱导VSMC分化。Krüppel样因子4(krüppel-like factor,KLF4)是含有锌指结构的核转录因子,在VSMC增殖、分化、迁移及凋亡等过程中发挥重要作用。因此ATRA具有很强的诱导细胞分化及免疫调节作用,是目前国内治疗急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocyticleukemia,APL)、骨髓异常增生等血液恶性疾病的临床首选药.肽酰基精氨酸脱亚胺酶--padi4(Peptidylarginine deiminase 4),包含2238个碱基对,编码663个氨基酸,分子量为67KDa,广泛分布于动物组织中,其编码的酶可以催化精氨酸残基转化为瓜氨酸残基,此过程称为瓜氨酸化。该过程需要Ca2+的协助,转化为瓜氨酸残基的蛋白构象也发生改变,从而导致酶的活性变化。已有研究表明在不同的实体瘤中padi4高表达,在HL-60等不同类型的白血病细胞株中padi4的表达情况有所不同padi4在造血细胞中很少表达,但是在经ATRA诱导HL-60细胞向粒细胞以及巨噬细胞分化过程中可以检测到padi4的表达,因此考虑padi4和白血病细胞的分化与凋亡有关。但是在生理状态下,padi4在白血病的分化过程中的功能及其作用的机制还不是很明确。有报道表明全反式维甲酸可以明显的诱导白血病细胞HL-60向粒系分化。部分学者发现在白血病的治疗过程中,MAPK,PI3K/Akt和NF-κB等信号通路参与基因表达调控、细胞增殖和凋亡的过程。其中ERK1/2是MAPK家族成员,分子量分别为44k Da和42k Da,磷酸化的P44/42有介导细胞因子转录活化的作用,并参与细胞增殖与分化。PI3K/Akt通路广泛存在细胞中,是参与细胞生长、增殖、分化调节的信号转导通因此,本研究拟以ATRA诱导HL-60细胞为分化模型,初步探讨padi4在白血病细胞分化过程中的变化规律,并进一步深入探讨padi4参与ATRA诱导HL-60细胞分化过程中MAPK,PI3K/Akt和NF-κB等信号通路是否发挥作用,揭示padi4影响白血病细胞分化的分子机制。这为白血病的新治疗方案提供了重要的理论依据,对治疗白血病有着重大的意义。目的本课题在以上研究背景的基础上,探讨在全反式维甲酸诱导早幼粒白血病细胞HL-60细胞向粒系分化过程中padi4的表达变化与功能机制。通过体外实验探讨padi4基因与白血病细胞HL-60细胞分化是否有关为切入点,重点观察HL60细胞经全反式维甲酸诱导向粒系分化后padi4表达变化,以及调控padi4表达后对MAPK,PI3K/Akt和NF-κB等信号通路影响,拟验证padi4基因与白血病的关系,为白血病的临床治疗提供一个新的治疗靶点。方法ATRA诱导HL-60细胞24 h、48 h、72 h、96 h后,应用Wright-Gimesa染色观察细胞形态学的变化;运用流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD11b的表达变化;应用RT-PCR分析padi4在基因水平的表达趋势,Western blot的方法检测padi4在蛋白水平的表达变化;RNAi技术干扰padi4及padi4抑制剂后流式细胞仪检测CD11b变化,Western blot检测padi4、P42/44、P65、P105、P55等蛋白水平变化。统计学分析试用spss17.0软件。结果HL-60细胞经ATRA诱导后与对照组相比,Wright-Gimesa染色显示细胞核明显缩小,核仁消失.胞浆变多,核浆比明显减小,核有凹陷

关键词： HL-60 分化 padi4 磷酸化 P42/44

padi4、HLA-DRB1*11表达与脑梗死的相关性研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

PADI4、HLA-DRB1*11表达与脑梗死的相关性研究

作者：黄超平湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的:检测肽酰基精氨酸脱亚胺酶(padi4)和人类白细胞抗原-DRB1*11(HLA-DRB1*11)在急性脑梗死患者和对照人群外周血白细胞中的表达量,分析两个基因与脑梗死急性期的相关性及对脑梗死预后的影响。方法:病例组选取2020年3月至2020年10月住... 详细信息

目的:检测肽酰基精氨酸脱亚胺酶(padi4)和人类白细胞抗原-DRB1*11(HLA-DRB1*11)在急性脑梗死患者和对照人群外周血白细胞中的表达量,分析两个基因与脑梗死急性期的相关性及对脑梗死预后的影响。方法:病例组选取2020年3月至2020年10月住院诊疗的80例符合入组标准的急性脑梗死患者,对照组选取符合入组标准的同期住院的非脑梗死患者80例。收集两组患者的临床资料,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法对两组患者外周血白细胞中padi4和HLA-DRB1*11基因表达量进行检测,比较二者在两组人群表达差异,分析基因表达水平与预后的关联,通过绘制受试者工作特征曲线(ROC)评估其对脑梗死预后的诊断效能。结果:1、病例组padi4基因表达高于对照组,差异具有统计学意义(Ppadi4基因表达在预后不良组中升高,差异具有统计学意义(Ppadi4基因高表达与脑梗死不良预后相关(OR=3.389,95%CI:1.291-8.902)。ROC曲线结果表明padi4基因高表达对脑梗死不良预后具有预测诊断效能(AUC=0.726)。相关性分析结果显示padi4基因表达水平与第3天、第7天NIHSS评分呈正相关。2、HLA-DRB1*11基因表达量在病例组与对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。HLA-DRB1*11基因表达量在预后良好组与预后不良组之间的差异同样无统计学意义(P>0.05)。Logistics回归分析结果显示HLA-DRB1*11基因表达与脑梗死预后无明显关联(OR=0.976,95%CI:0.373-2.554)。结论:1、padi4基因在脑梗死急性期表达水平升高,且padi4基因高表达与脑梗死不良预后相关。2、HLA-DRB1*11基因表达水平在脑梗死急性期无明显升高,与脑梗死预后无明显关联。

关键词：脑梗死 padi4 HLA-DRB1*11

padi4在食管鳞癌中的表达水平及其生物学功能的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

PADI4在食管鳞癌中的表达水平及其生物学功能的研究

作者：薛松涛福建医科大学

学位级别：硕士

目的通过验证padi4在食管鳞状细胞癌（以下简称为食管鳞癌）,癌旁正常组织和食管鳞癌细胞系中的表达水平,结合患者的临床病理资料,探讨padi4表达水平与临床病理特征的相关性。同时,探究padi4对食管鳞癌细胞生物学功能的影响及作用机理,... 详细信息

目的通过验证padi4在食管鳞状细胞癌（以下简称为食管鳞癌）,癌旁正常组织和食管鳞癌细胞系中的表达水平,结合患者的临床病理资料,探讨padi4表达水平与临床病理特征的相关性。同时,探究padi4对食管鳞癌细胞生物学功能的影响及作用机理,验证其作为食管鳞癌诊断和治疗的标志物和靶标的潜力。方法1.从接受食管癌根治性切除术的患者病理标本（包括食管鳞癌和癌旁正常组织）中提取总RNA,进行高通量转录组测序分析;2.使用生物信息学技术筛选差异表达的编码基因;3.实时荧光定量PCR检测73例食管鳞癌及癌旁正常组织中padi4的表达水平。结合临床病理资料,探讨padi4表达水平与临床病理特征的关系;4.采用实时荧光定量PCR检测食管鳞癌细胞系中padi4的表达水平;5.特异性小干扰RNA敲低食管鳞癌细胞中padi4的表达,通过MTS,细胞平板克隆和Transwell小室探究padi4对细胞增殖与克隆,迁移和侵袭的影响。结果1.高通量测序数据结果显示,食管鳞癌中存在大量差异性表达的编码基因。相对于癌旁正常组织,食管鳞癌中padi4显著上调表达,表达倍数变化均大于5.5;2.实时荧光定量PCR结果显示,56例（56/73,76.7）食管鳞癌中padi4的表达明显高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义（P＜0.05）;***4的表达水平与肿瘤位置（P=0.011）密切相关,与性别、肿瘤浸润深度、肿瘤分化程度、肿瘤分期以及淋巴结转移无明显相关性（P＞0.05）;4.与癌旁正常组织相比,padi4在食管鳞癌细胞系中表达上调;5.特异性小干扰RNA干扰表达后,padi4在食管鳞癌细胞中的表达水平相较于阴性对照组明显降低（P＜0.001）;***和细胞平板克隆实验表明,与对照组相比,敲低padi4表达后细胞增殖和克隆受到显著抑制（P＜0.001）;***小室结果显示,与阴性对照组相比,干扰padi4表达后细胞迁移和侵袭受到显著抑制（P＜0.001）。结论1.食管鳞癌组织中存在大量异常表达的编码基因;***4在食管鳞癌组织和食管鳞癌细胞系中表达上调,可能是食管鳞癌诊断的潜在生物标志物;***4的表达水平与食管鳞癌患者的肿瘤位置密切相关（P=0.011）,而与性别,淋巴结转移,浸润深度和肿瘤分化程度无关（P＞0.05）;4.特异性小干扰RNA干扰padi4在食管鳞癌细胞中的表达后,细胞增殖与克隆,迁移和侵袭均受到明显抑制,这表明padi4可能在食管鳞癌的发生和发展中发挥致癌基因的作用,并且是治疗食管鳞癌的潜在靶标。

关键词：食管鳞状细胞癌 padi4 增殖迁移侵袭

padi4靶向调控sox4在HL-60细胞定向分化为粒系的功能及表达调控机制

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

PADI4靶向调控sox4在HL-60细胞定向分化为粒系的功能及表达调控机...

作者：史露露济南大学

学位级别：硕士

背景肽酰基精氨酸脱亚胺酶--padi4（Peptidylarginine deiminase4），广泛分布于动物组织中，其编码的酶可以催化精氨酸残基转化为瓜氨酸残基，此过程称为瓜氨酸化。padi4在造血细胞中很少表达，但是在经ATRA和PMA诱导HL60细胞向粒细胞... 详细信息

背景肽酰基精氨酸脱亚胺酶--padi4（Peptidylarginine deiminase4），广泛分布于动物组织中，其编码的酶可以催化精氨酸残基转化为瓜氨酸残基，此过程称为瓜氨酸化。padi4在造血细胞中很少表达，但是在经ATRA和PMA诱导HL60细胞向粒细胞以及巨噬细胞分化过程中可以检测到padi4的表达， padi4包含2238个碱基对，编码663个氨基酸，分子量为67KDa，随着白血病细胞粒系分化，在转录水平和翻译水平都可以检测到padi4的增高，因此考虑padi4和白血病细胞的分化与凋亡有关。但是在生理状态下，padi4的功能及其其作用的机制还不是很明确。Sox家族分子为一类基因转录调控基因，其蛋白以HMG-box与DNA结合，参与性别决定、神经嵴细胞的发育、中枢神经系统、软骨形成、晶状体发育、心脏发育和造血等多种重要的生物学过程。Sox4是Sox(SRY-related HMG-box)转录因子家族重要成员，编码474个氨基酸，分子量为47KDa，在发育发展中起重要作用，可作为转录因子协同PU.1，CREB，PML/RARα以及增强PI3K/AKT和MAPK信号通路等多种机制抑制白血病细胞分化，诱导白血病发生。在急性白血病细胞中，sox4是PI3K/AKT和MAPK途径的重要激活剂。白血病属于血液系统的恶性克隆性疾病，目前大部分仍无法彻底治愈。文献报道，padi4在多种恶性肿瘤中高表达且参与其发生发展，在良性肿瘤中低表达或不表达，表明padi4在恶性肿瘤中发挥相应的作用。然而，padi4在白血病细胞HL-60中不表达，随着细胞向粒系分化，padi4的表达逐渐增高，而sox4通过多种途径抑制白血病细胞的分化，猜想padi4和sox4之间有一定的关联性，为此进行研究，希望可以成为治疗白血病的新靶点。在前人研究的基础上，我们设计了相关实验，探讨padi4和sox4与白血病细胞分化的关系，为其临床治疗提供新的理论依据和治疗靶点。目的通过体外实验探讨padi4基因靶向sox4基因与白血病细胞分化是否有关为切入点，重点观察HL60细胞经全反式维甲酸诱导向粒系分化后padi4和sox4表达变化，以及两者是否存在相互作用，并进一步阐明padi4靶向调控sox4的机制。方法建立全反式维甲酸诱导HL60细胞模型，于诱导的0h和96h后，流式检测CD11b的表达，以及吉姆撒染色观察细胞形态验证模型建立是否成功。于诱导的0h、24h、48h、72h和96h分别在转录和翻译水平检测padi4表达变化，干扰padi4后流式检测CD11b的表达，检验padi4是否影响细胞分化。提取ATRA诱导HL-60后的浆蛋白和核蛋白，检测padi4的变化趋势，免疫细胞化学检测padi4的定位。于诱导的0h、24h、48h、72h和96h分别在转录和翻译水平检测sox4表达变化，体外细胞实验，采用RNAi技术，合成干扰padi4的siRNA转染至HL60细胞，调控padi4在HL60细胞中的表达，RT-PCR观察对sox4基因表达的影响;构建sox4启动子的双荧光素酶报告载体，转染HEC293T细胞，检测padi4与其结合部位，通过ChIP检测其具体结合域;构建sox4的四个结构域，通过Co-IP检测padi4与sox4蛋白间的相互作用。每组实验都要必须重复至少3次，实验数据结果采用均数±标准差表示，均数采用t检验分析，以Ppadi4在转录和翻译水平呈现出一致的升高趋势，干扰padi4后，流式检测到细胞表面的CD11b降低，即padi4影响白血病细胞的分化。Western Blot检测到padi4由胞浆转移到胞核发挥作用。免疫细胞化学结果说明padi4在细胞核内发挥作用。在转录和翻译水平检测sox4，结果呈现和padi4相反的降低趋势，且设计siRNA干扰padi4后，RT-PCR结果sox4的表达升高，说明padi4调控sox4的表达。构建sox4启动子荧光素酶报告基因载体后，做报告基因实验检测padi4可以结合sox4的启动子，通过ChIP实验证明padi4可以结合sox4启动子-220-0区域。Co-IP实验证明padi4和sox4蛋白间存在相互作用。结论padi4基因与白血病细胞的分化有关。随着HL60细胞分化程度的提高，padi4在转录和翻译水平均逐渐升高，干扰padi4后，抑制细胞的分化。padi4可转移到细胞核内，作为转录因子，调控基因的转录。sox4在转录和翻译水平均逐渐降低，干扰padi4后，sox4的表达升高，说明padi4可以调控sox4的表达。padi4可结

关键词： padi4 sox4 HL-60细胞 ATRA 分化

RA患者中医体质分析、外周血HLA-DR4、padi4、STAT4基因mRNA表达及青藤碱制剂对其干预的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

RA患者中医体质分析、外周血HLA-DR4、PADI4、STAT4基因mRNA表达...

作者：吕卓南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis, RA)是一种主要以关节关节滑膜炎症和关节外病变为表现的系统性自身免疫性疾病,当累及关节软骨和骨质时,逐渐形成关节畸形和强直,导致关节功能丧失。在我国的患病率约为0.4%。RA的发病机制... 详细信息

研究背景类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis, RA)是一种主要以关节关节滑膜炎症和关节外病变为表现的系统性自身免疫性疾病,当累及关节软骨和骨质时,逐渐形成关节畸形和强直,导致关节功能丧失。在我国的患病率约为0.4%。RA的发病机制尚不明确,目前认为RA由多种因素联合介导的自身免疫病,环境和遗传等因素共同发挥作用。与RA相关的白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-DR4属HLA-Ⅱ类分子,HLA-Ⅱ类分子在抗原识别、递呈和与TCR结合方面起着重要作用,主要功能是与抗原结合将递呈质T细胞。当受到外界刺激或发生自身改变时,HLA的抗原决定簇发生了改变,借助共同表位和基因剂量效应,使具有HLA成为免疫活化的靶点,产生T细胞激活及一系列免疫介质如细胞因子的释放,导致RA免疫性炎症发生,最终导致滑膜、软骨及骨质的破坏。HLA-DR4阳性的患者更容易发展为侵蚀性病变,预后不好,药物疗效差。RA患者体内存在有多种对瓜氨酸化多肽特异的抗体,瓜氨酸化在RA发病中有很强的特异性,肽基精氨酸脱亚氨酶(peptidylarginine deiminase PAD)所编码的酶具有对mRNA翻译后蛋白进行瓜氨酸化修饰,可以催化抗原蛋白多肽进行瓜氨酸化反应,使蛋白中的精氨酸残基转化为瓜氨酸残基,并通过形成瓜氨酸肽打破机体的免疫耐受而诱发自身免疫反应的发生。2003至今有多项研究显示padi4基因多态性与RA有很强的相关性。T细胞活化在RA发病中起重要作用,CD4+T细胞受不同抗原的刺激分化为不同效应亚群,此过程受调节性转录因子的调控,转录因子起关键作用。信号转导与转录激活因子4(signal transducer and activator of transcription 4, STAT4)被认为是调节Th1细胞分化的关键的调控因子,亦发现与Th17的分化有关。2006年鉴定出STAT4与RA相关,之后有多项研究结果显示其是RA易感基因。信使核糖核酸(MessengerRNA, mRNA)为由脱氧核糖核酸(DNA)转录合成的带有遗传信息的一类单链核糖核酸(RNA),与遗传性疾病的发生与表达密切相关。探讨RA患者体内易感基因的表达水平对RA发病及疾病进展有重要意义。RA属于祖国传统医学“痹病”范畴,因人体遭受风、寒、湿、热之邪的侵袭,气血为病邪阴闭而引起的疾病。以筋骨、肌肉、关节酸痛、麻木、重着、屈伸不利和关节肿大、灼热等为临床主要表现。其主要病机是气血痹阻不通,筋脉关节失于濡养,以祛风、除湿、舒筋活络为治疗大法。中医药治疗RA历史悠久,疗效确切,且不良反应相对较轻,目前得多越来越关注,以期达到缓解症状和提高整体生存质量的目的。清风藤用于治疗关节炎已经有上千年历史。其主要有效成分为青藤碱,现代药理研究显示,青藤碱具有良好的抗炎和抗风湿的作用。清风痛胶囊(青藤碱制剂)具有祛风化湿、温经散寒、活血通络的功效,既往药理及临床研究显示对急、慢性炎症具有良好的抗炎镇痛效果。研究清风痛胶囊对RA的疗效及对HLA-DR4、padi4、STAT4基因mRNA表达水平的影响有助于了进一步探讨研究青藤碱制剂对RA的作用和机理。中医学认为体质是个体在先天遗传和后天获得的基础上表现出的形态结构、生理机能和心理状态方面综合的、相对稳定的特质,是制约和影响疾病发生发展变化的基本因素之一,并与疾病的发展过程、预后密切相关。RA发病存在区域差异性,临床表现存在个体差异性,有必要对RA及其相关基因表达水平与中医体质的关系进行深入研究,而目前这方面研究较少。同时定量检测多种基因表达水平依靠传统检测手段无法实现。QGP技术(QuantiGene Plex)结合了b-DNA (Branched DNA)信号放大与Luminex xMAP液相芯片(liquid chip)平台,其优势是可直接从全血样本中检测mRNA表达,无需对进行RNA提纯、反转录、PCR扩增,可以同时对极少量样本中的3至36个基因进行高通量定量,且消除了众多人为因素的干扰。研究目的1.采用QGP技术对RA患者外周血HLADR4、padi4、STAT4基因表达进行定量,并探讨表达水平与RA病情活动、抗CCP抗体、类风湿因子(RF)的关系。2.评价清风痛胶囊(青藤碱制剂)联合MTX治疗活动性RA12周的疗效、安全性,比较治疗前后HLA-DR4、padi4、STAT4基因表达水平变化,探讨青藤碱制剂的干预影响。3.分析RA患者中医体质类型分布及常见中医体质类型HLA-DR4、padi4、STAT4基因表达水平,为进一步研究中医体质分型与RA相关基因表达的关系提供理论依据。

关键词：类风湿关节炎青藤碱 HLA-DR4 padi4 STAT4 中医体质

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

PTPN22与padi4相互作用的研究

PTPN22与PADI4相互作用的研究

作者：臧艺哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

类风湿关节炎是一种常见的、慢性的、自身免疫系统失调的自身性免疫疾病。临床发现该病的主要特征是关节、骨骼等部位发生炎症,发病过程中引发关节的坏死以及骨骼的侵蚀,最终将导致患者关节的畸形及其功能的丧失。类风湿关节炎的病因尚... 详细信息

类风湿关节炎是一种常见的、慢性的、自身免疫系统失调的自身性免疫疾病。临床发现该病的主要特征是关节、骨骼等部位发生炎症,发病过程中引发关节的坏死以及骨骼的侵蚀,最终将导致患者关节的畸形及其功能的丧失。类风湿关节炎的病因尚不明确。PTPN22,即蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22,目前认为该基因编码的淋巴酪氨酸磷酸酶可以影响T细胞活化,从而影响免疫稳态而导致自身免疫病的发生。padi4,即肽基精氨酸脱亚胺酶4,为编码精氨酸转化为瓜氨酸残基的酶家族的成员,可在粒细胞和巨噬细胞介导的炎症和免疫反应中发挥作用,因而可能与类风湿关节炎的发病相关。padi4是一种翻译后修饰酶,可以在钙离子存在的情况下把精氨酸残基转化成瓜氨酸残基,此过程称作瓜氨酸化。padi4与类风湿性关节炎最密切相关,哺乳动物的PAD受细胞内的钙浓度、自动瓜氨酸化和二聚化的调控蛋白质瓜氨酸化的改变可能可以解释类风湿性关节炎的风险因素,有研究猜测,PTPN22R620可能与padi4相互作用,从而限制了瓜氨酸化以及中性粒细胞胞外杀菌网络的形成。PTPN22R620是天然的padi4的抑制剂,但是PTPN22W620完全剥夺了PTPN22对padi4的抑制作用导致高度瓜氨酸化。而目前对于PTPN22和padi4的相互作用依然不是很清晰,其中主要的限制因素是难以得到大量、均一度高的PTPN22和padi4蛋白,从而造成其数据的缺乏。本论文针对这一难题,探索了PTPN22和padi4在大肠杆菌这一原核表达系统中的表达,并对二者相互作用关系进行了研究。通过优化大肠杆菌的培养温度、培养时间和培养浓度,明显改善了蛋白的表达量、行为及纯度。通过亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤色谱层析等方法提高了蛋白纯度,最终能够在体外得到具有较高浓度、较高纯度的、行为较为均一的PTPN22和padi4蛋白。然而,个别PTPN22重组蛋白和padi4蛋白可以实现共表达,纯化得到的PTPN22和padi4蛋白之间并不存在相互作用。本研究加深了我们对于PTPN22和padi4蛋白的整体认识,为将来的结构解析以及临床应用奠定了良好的基础。

关键词：类风湿关节炎 PTPN22 padi4 SNP 蛋白纯化蛋白之间相互作用

青蒿素靶向padi4诱导肿瘤细胞衰老改善肺癌的作用及机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

青蒿素靶向PADI4诱导肿瘤细胞衰老改善肺癌的作用及机制研究

作者：高帆河南大学

学位级别：硕士

背景:肺癌的发病人数和死亡人数正逐年递增,成为了人类健康的重要威胁之一,新的肺癌防治方案已经成为现阶段肿瘤研究的热点之一。衰老状态下的细胞,会出现DNA损伤、细胞周期停滞、增殖能力和迁移能力减弱的现象,同时不会损伤正常组织的... 详细信息

背景:肺癌的发病人数和死亡人数正逐年递增,成为了人类健康的重要威胁之一,新的肺癌防治方案已经成为现阶段肿瘤研究的热点之一。衰老状态下的细胞,会出现DNA损伤、细胞周期停滞、增殖能力和迁移能力减弱的现象,同时不会损伤正常组织的生理功能,因此诱导肺癌细胞进入衰老状态是一种既能抑制癌细胞增殖同时又能最大程度的保护正常细胞运作的双赢治疗方法。青蒿素自从被分离作为抗疟药开始,从未被证实具有强烈的副作用,因此受到研究人员的广泛关注。有研究表明,青蒿素可以升高细胞内活性氧(ROS)水平,损伤肿瘤细胞DNA,诱导肿瘤细胞进入G1期细胞阻滞。活性氧刺激与损伤细胞DNA都是诱导细胞衰老的常用手段,而细胞周期阻滞是衰老细胞的特征之一,但目前青蒿素能否诱导肺癌细胞进入衰老状态尚不清楚。肽基精氨酸脱亚胺酶4(padi4)是一种钙离子依赖蛋白,在阿尔兹海默病模型中可以抑制衰老细胞的产生,但在其在肺癌中的作用尚不清楚。目的:本研究旨在探讨青蒿素与padi4在肺癌预防中的关系及其机制。方法:体外研究,EDU实验检测青蒿素对肺癌细胞DNA复制的影响;荧光探针DCFH-DA检测青蒿素对肺癌细胞中ROS水平的影响;彗星拖尾实验检测青蒿素对肺癌细胞中DNA的损伤程度;激光全息加细胞形态分析检测青蒿素对肺癌细胞的形态、体积、表面积的影响;JC-1试剂盒检测青蒿素对肺癌细胞中线粒体膜电位的影响;溶酶体探针检测青蒿素对肺癌细胞中溶酶体形态功能的影响;细胞周期试剂盒检测青蒿素对肺癌细胞细胞周期的阻滞效果。体内研究,宿主抗移植物模型检测青蒿素在宿主抗移植物模型中的抗肿瘤效果;移植瘤模型检测青蒿素的直接抗肿瘤效果;乌拉坦联合香烟烟雾诱导的肺癌模型检测青蒿素对肺癌的改善作用;呼吸代谢检测青蒿素对肺癌小鼠肺功能的保护作用;自主活动次数检测青蒿素对肺癌小鼠生存状态的影响;HE染色检测小鼠肺癌组织的病理变化;小动物活体成像检测青蒿素对肺癌小鼠肺癌进展的抑制作用;转录组分析植瘤模型与宿主抗移植物模型的实体瘤中的差异基因,并筛选青蒿素治疗肺癌的关键靶点;蛋白印迹(WB)实验验证转录组的分析结果;分子对接预测青蒿素与转录组分析中的关键靶点的结合作用;免疫组化检测青蒿素在乌拉坦联合香烟烟雾诱导的肺癌模型中对关键靶点的影响。机制研究,建立padi4过表达的A549(A549O)细胞株;以A549O细胞株以及padi4抑制剂GSK484作为对照,探究青蒿素与关键靶点padi4对A549细胞的增殖、迁移能力的影响;网络药理学预测青蒿素的下游靶点及通路;药靶亲和实验检测青蒿素与padi4和下游靶点间是否存在直接作用关系;通过蛋白与蛋白对接、GEO基因芯片挖掘以及免疫共沉淀(CO-IP)实验分析并验证padi4与下游靶点之间的相互作用关系;在乌拉坦联合香烟烟雾诱导的肺癌模型中,使用免疫荧光验证青蒿素对padi4和下游靶点P53的影响以及padi4与下游靶点的相对表达趋势;SA-β-gal染色检验青蒿素和关键靶点padi4对肺癌细胞衰老水平的影响;WB验证青蒿素对padi4以及P53相关衰老通路蛋白的影响。结果:体外研究表明,EDU实验中,与对照组相比,青蒿素给药组中的EDU的掺入显著减少(P49细胞的增殖能力;ROS检测实验中,与对照组相比,青蒿素给药组在525 nm处的吸收峰显著升高(P49细胞中的ROS水平;彗星拖尾实验中,与对照组相比,青蒿素给药组细胞的DNA出现明显的拖尾(P49细胞的DNA;激光全息检测结果表明,与对照组相比,青蒿素给药组的细胞失去了贴壁的梭形结构,胞体出现了扁圆形的细胞形态,细胞体积和表面积显著增大(P49细胞出现了细胞衰老的形态特征;溶酶体探针孵育后,与对照组相比,青蒿素给药组的细胞溶酶体荧光探针反应增强,表明青蒿素可呈剂量依赖性增加A549细胞的溶酶体功能;JC-1探针孵育后,与对照组相比,青蒿素给药组细胞红光强度显著减弱,绿光强度显著增强(P49细胞线粒体膜电位紊乱;细胞周期检测中,与对照组相比,青蒿素给药组中G1期细胞比例显著增加(P49细胞周期停滞于G1期。体内研究表明,宿主抗移植物模型中,与对照组相比,青蒿素给药组的肿瘤质量与肿瘤生长速度显著降低(P<0.05),表明青蒿素可呈剂量依赖性抑制宿主抗移植物模型中实体瘤生长;移植瘤模型中,与对照组相比,青蒿素给药组的肿瘤抑制率为13.6%远低于其在宿主抗移植物模型中的肿瘤抑制率;乌拉坦联合香烟烟雾诱导的肺癌小鼠模型中,与模型组相比,青蒿素给药组小鼠的呼吸代谢、自主活

关键词：肺癌 padi4 衰老青蒿素