芹黄素对人角质形成细胞氧化应激诱导的未折叠蛋白反应及CXCL16释放的抑制作用

作     者：张德利 

作者单位：西南医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刁庆春

授予年度：2019年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：芹黄素 过氧化氢 人角质形成细胞细胞 氧化应激 未折叠蛋白反应 CXCL16 

摘      要：目的:1.建立过氧化氢诱导人角质形成细胞氧化应激模型。2.研究芹黄素(Apigenin,4’,5,7-三羟基黄酮)对氧化应激诱导的未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)及CXCL16释放的影响及其可能机制。3.探讨芹黄素在白癜风治疗中的应用前景。方法:1.MTT法检测不同浓度HO(100、150、200、250、300、350μmol/L)、不同浓度芹黄素(5、10、25、50、100、200μmol/L)对Hacat细胞活性的影响。不同浓度芹黄素(6.25、12.5、25μmol/L)预处理Hacat细胞,再加入HO(250μmol/L)作用,MTT法检测Hacat细胞活性。2.流式细胞术检测不同浓度芹黄素(6.25、12.5、25μmol/L)对HO作用后Hacat细胞ROS含量的影响。3.实时荧光定量PCR检测不同浓度芹黄素(6.25、12.5、25μmol/L)对HO作用后Hacat细胞totalXBP1(XBP1t)、spliced XBP1(XBP1s)及unspliced XBP1(XBP1u)mRNA表达水平的影响。4.Western Blot检测不同浓度芹黄素(6.25、12.5、25μmol/L)对HO作用后Hacat细胞p-eIF2α、eIF2α、p-NF-κB、NF-κB蛋白表达水平的影响。5.ELISA法检测不同浓度芹黄素(6.25、12.5、25μmol/L)对HO作用后Hacat细胞CXCL16水平的影响。结果:1.HO可抑制Hacat细胞活性,随浓度增加抑制作用增强(P0.05)。当芹黄素浓度大于或等于50μmol/L时,随着芹黄素浓度上升,细胞活力逐渐下降(P0.05),说明芹黄素不引起Hacat细胞ROS含量升高。3.HO可显著诱导Hacat细胞XBP1t、XBP1s、XBP1u mRNA表达升高(P0.01),芹黄素对由HO诱导的Hacat细胞XBP1t、XBP1s、XBP1u mRNA表达的升高均有显著的抑制作用,并且随芹黄素浓度升高而抑制作用增强(P0.01)。4.HO可显著诱导Hacat细胞p-eIF2α、eIF2α、p-NF-κB、NF-κB的表达升高(P0.01),芹黄素以浓度依赖性显著下调HO诱导的Hacat细胞p-eIF2α、eIF2α、p-NF-κB、NF-κB的表达(P0.01)。5.HO可显著诱导Hacat细胞CXCL16分泌水平升高(P0.01),芹黄素可显著降低HO引起的Hacat细胞CXCL16分泌水平,并且CXCL16分泌水平随芹黄素浓度升高而降低(P0.01)。结论:1.芹黄素可以抑制HO诱导的人角质形成细胞ROS生成,具有抗氧化作用。2.芹黄素可抑制HO诱导的人角质形成细胞未折叠蛋白反应和CXCL 16释放水平,芹黄素可能具有开发成为白癜风治疗药物的潜力。