人参皂苷Rd对大鼠同种异体皮肤移植术后免疫排斥反应的抑制作用

作     者：陈佳佳 

作者单位：兰州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：吴勇杰

授予年度：2012年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：人参皂苷Rd 免疫抑制 皮肤移植 迟发型超敏反应 细胞因子 T细胞亚群 

摘      要：目的器官移植是挽救脏器衰竭终末期病人生命的有效治疗手段,但术后的急、慢性排斥反应是器官移植的主要障碍,目前临床上应用的免疫抑制剂如他克莫司(FK506)、环孢素A(CsA)特异性较差、毒性高,且有较强的副作用。因此,研究高效、低毒的免疫抑制剂是当今医学研究的重点。人参皂苷Rd是人参皂苷的有效成分之一,研究表明人参皂苷对免疫系统具有双向调节作用。本实验从器官、细胞、分子水平研究Rd是否具有免疫抑制作用,为其可能作为新型免疫抑制剂用于临床器官移植术后的免疫排斥反应提供初步的理论和实验依据。方法第一部分:(1)以2,4-二硝基氯苯(DNCB)诱导小鼠迟发型超敏反应,通过激发前单次给药及不同时相连续多次给药,观察人参皂苷Rd对迟发型超敏反应的影响。(2)MTT法观察人参皂苷Rd对刀豆蛋白A(ConA)、脂多糖(LPS)诱导的T、B淋巴细胞增殖的影响。第二部分:Wistar大鼠按体重随机分为正常对照组(0.9%氯化钠,0.2ml/100g)、模型对照组(55%丙二醇,0.2ml/100g)、阳性对照组(CsA,5mg/kg)、人参皂苷 Rd 低(12.5mg/kg)、中(25mg/kg)、高(50mg/kg)剂量组,建立大鼠同种异体皮肤移植模型,于术前1天或3天开始给药,每日一次,至术后两周。通过观察各组大鼠皮片存活状况、统计皮片平均存活时间、术后7天行组织病理学检查、取外周血检测细胞因子(IL-1β、IL-2、IL-10、IL-12、IL-15、TNF-α、INF-γ)及T细胞亚群等指标,研究人参皂苷Rd的免疫抑制作用。结果第一部分:(1)人参皂苷Rd对小鼠迟发型超敏反应的影响:①激发前单次给药对DNCB诱导的小鼠迟发型超敏反应无抑制作用。与模型对照组相比,地塞米松组小鼠耳肿胀度、脾脏指数、胸腺指数均明显降低(P0.05)。第二部分:人参皂苷Rd对大鼠同种异体皮肤移植术后免疫排斥反应的影响:①人参皂苷Rd可显著延长大鼠同种异体皮肤移植术后的皮片平均存活时间,并呈剂量依赖性:模型对照组皮片平均存活时间为9.60 ±2.46天,阳性对照组皮片平均存活时间为17.75±3.15天,Rd低、中、高剂量组皮片平均存活时间分别为 11.60 ± 2.80、15.20 ± 2.78 和 16.13 ± 3.09 天。与模型对照组相比,CsA及Rd中、高剂量可明显延长皮片存活时间(P0.01),而Rd低剂量对大鼠皮片的平均存活时间无影响。②组织学观察:人参皂苷Rd可明显抑制移植皮片的排斥反应,减少炎性细胞浸润。③人参皂苷Rd可显著降低受鼠血清中IL-lβ、IL-2、IL-12、IL-15、TNF-α、INF-y的浓度(P0.01或P0.05),其中IL-2的降低最为明显。同时可上调抑炎因子IL-10的表达(P0.01)。④人参皂苷Rd低、中、高剂量及CsA可显著降低受鼠外周血中CD4+T细胞的百分数(P0.01)。结论(1)人参皂苷Rd对DNCB诱导的小鼠迟发型超敏反应经不同时相连续多次给药后有显著的抑制作用。(2)人参皂苷Rd对ConA诱导的T淋巴细胞增殖有明显的抑制作用。(3)人参皂苷Rd对大鼠同种异体皮肤移植术后的免疫排斥反应有显著的抑制作用。(4)人参皂苷Rd的免疫抑制作用可能与其降低受鼠血清