小鼠体细胞核移植胚胎端粒酶活性的测定

作     者：张日欣 

作者单位：延边大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李钟淑

授予年度：2014年

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 090501[农学-动物遗传育种与繁殖] 

主      题：体细胞克隆胚胎 端粒酶活性 端粒重复序列法(TRAP) 银染法 

摘      要：端粒酶作为生命的“生物钟在胚胎发育的过程中起到了至关重要的作用,同时有保持染色体稳定性和细胞活性并能延长缩短的端粒。并且端粒酶对于研究体细胞克隆胚胎重编程有着重要意义。目的：为了解小鼠早期卵母细胞及体细胞核移植重构胚(NT)早期端粒酶活性的变化特点,本研究对小鼠卵母细胞和体细胞核移植重构胚2-细胞,4-细胞,8-细胞,桑葚胚以及囊胚各阶段相对端粒酶活性变化规律。方法：依据PCR产物进行电泳,利用端粒酶重复序列扩增法(TRAP)-银染,电泳条带在成像系统下的光密度值,对总产品产量相对定量计算(TPG)。结果： 1.阳性细胞对照标准条带中,相对端粒酶活性与细胞浓度呈正相关。 2.小鼠卵母细胞、体内受精胚胎及核移植胚胎各细胞期端粒酶检测为阳性。随胚胎分裂端粒酶活性呈上升趋势,在囊胚期达到最高。在体内受精胚胎中,合.子期(1-cell)相对端粒酶活性较高。 3.核移植胚胎与体内受精胚胎比较在2-细胞相对端粒酶活性有差异(P0.05)。 4.体内受精胚胎与核移植胚胎在各自胚胎发育过程中呈现相似的规律：2-细胞、4-细胞、8-细胞相对端粒酶活性差异不显著(P0.05)。囊胚期相对端粒酶活性与各胚胎时期差异显著(P0.05)。 5.胚胎的单卵裂球相对活性呈总下降趋势到囊胚达最低。胚胎2-细胞期差异显著(P0.05)。 6.通过对体内受精胚胎与体细胞重构囊胚的胚胎时期计数,体内受精胚胎单卵裂球细胞数多于体细胞核移植胚胎的囊胚,二者呈显著性差异(P0.05)。