大肠杆菌DnaA和LexA蛋白影响ybfE基因的表达

作     者：王树文 

作者单位：内蒙古大学 

学位级别：硕士

导师姓名：莫日根

授予年度：2015年

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 07[理学] 

主      题：表达调控 DnaA LexA 大肠杆菌 ybfE基因 

摘      要：大肠杆菌DnaA蛋白既是复制起始蛋白也是转录调节因子,而LexA蛋白是SOS应激反应调控蛋白。.ybfE是功能未知的基因,有文献报道ybfE基因表达可能受LexA蛋白的调控。DnaA和LexA蛋白都是通过结合基因启动子区的保守序列DnaA-box或者LexA-box来行使功能,我们通过序列分析了解到在ybfE启动子区有六个DnaA-box和一个LexA-box。本文为了探究DnaA和LexA蛋白对ybfE表达的影响,首先将报告基因lacZ插入到染色体ybfE基因启动子下游,然后用Miller的方法在不同DnaA或LexA蛋白水平的细胞中测定了p-半乳糖苷酶活性。进而分析DnaA和LexA蛋白对ybfE基因表达的影响。结果发现：过表达DnaA或者降低DnaA可用量,对ybfE基因的表达并没有明显的影响。但在dnaA345突变体中,ybfE基因的启动子活性明显高于野生型。在lexA3突变体和△lexA细胞中ybfE的启动子活性与野生型相比没有明显的变化。其次我们构建了ybfE启动子活性分析质粒,将ybfE的启动子基因插入到pTAC3953质粒上没有启动子的lacZ基因上游。在质粒水平我们同样检测了不同浓度的DnaA和LexA蛋白对ybfE基因表达的影响。并且我们对pTACYL质粒上的DnaA-box和LexA-box做了删除突变和多点突变。结果发现突变DnaA-box对ybfE的表达没有明显影响,突变LexA-box会导致ybfE的表达明显下降,然而突变LexA-box后在dnaA345细胞中ybfE基因的表达量较野生型细胞有明显的提高。此外我们体外进行了gel-shift实验,检测到LexA蛋白与.ybfE的启动子有作用。这些结果说明DnaA和LexA蛋白可能调控ybfE基因的表达。