脱氢表雄酮在雌性大鼠体内生物转化规律及其机制的研究

作     者：周英俏 

作者单位：南京农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：马海田

授予年度：2014年

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：脱氢表雄酮 正常和去卵巢大鼠 原代大鼠卵巢颗粒细胞 生物转化 雄激素和雌激素 类固醇合成相关酶 

摘      要：类固醇激素是动物体内胆固醇重要的代谢产物,在调控动物的各种生理学功能中发挥十分重要的作用。脱氢表雄酮（Dehydroepiandrosterone, DHEA）是胆固醇代谢在肾上腺和性腺组织中重要的中间产物之一。本实验室前期研究表明,DHEA可明显调节成年和老年雄性大鼠体内各种类固醇激素的含量及类固醇代谢关键酶的表达,尤其明显促进动物机体内雄激素和雌激素的分泌。但是关于在雌性成年动物体内性腺组织的生物转化规律还不清楚。卵巢是雌性动物体内甾体类激素的主要内分泌器官,其中大部分性激素（雌激素、雄激素和孕激素）的合成主要是由卵泡内的颗粒细胞和膜细胞完成。在肾上腺和卵巢组织中,雄激素的主要合成步骤为3p-HSD催化DHEA转化为△4-雄烯二酮,17β-HSD进而使△4-雄烯二酮转化为睾酮;而雌激素主要是由经颗粒细胞中的Aromatase催化睾酮和雄烯二酮转化生成雌二醇和雌酮,由芳香化酶催化的这一步是雌激素合成的主要限速阶段。DHEA对雌性动物各种生理学机能的调节作用,尤其是对女性内分泌的调节及在维持健康状态中所起的作用引起了人们的广泛关注。已有研究表明,DHEA发挥其生学物功能主要是通过在体内转化为活性类固醇激素,但DHEA在雌性动物体内的生物转化规律、其生物转化的主要靶组织均还不是很清楚,代谢转化过程中这三种类固醇激素合成酶在成年雌性大鼠体内中的变化如何,动态生物转化以及消长关系的研究很少,具体的调控机制如何,目前尚未完全明了。因此,本文以正常和去卵巢成年雌性大鼠为研究对象,探讨DHEA对雌性大鼠体内各种类固醇激素含量及特定靶组织中关键酶基因表达的影响;并采用机械分离法分离培养原代大鼠卵巢颗粒细胞,研究DHEA在特定的靶细胞中的生物转化及关键酶表达规律的变化,旨在揭示DHEA在正常生殖期雌性动物体内生物转化模式和细节,以期为促进动物健康养殖和人类相关疾病的防控提供理论依据。1脱氢表雄酮对雌性大鼠体内类固醇激素含量及其代谢途径关键酶表达的影响本实验以正常成年雌性大鼠为研究对象,探讨外源性DHEA对雌性大鼠体内的类固醇激素含量及肾上腺和卵巢中相关类固醇激素代谢关键酶mRNA水平的影响。实验选用清洁级雌性SD大鼠70只,随机分对照组和DHEA处理。处理组一次性按25mg/kg·WB灌胃DHEA（溶解于10%DMSO中）,对照组灌胃等量的DMSO溶液。各处理组分别于灌胃后0 h,3 h,6 h,12 h,24 h和48 h宰杀大鼠,收集血清待测,收集肾上腺和卵巢-80℃保存。用放射免疫法测血清中雄烯二酮,雌二醇,睾酮,孕酮,皮质醇,醛固酮含量变化;Realtime-PCR法检测卵巢和’肾上腺3β-HSD、17β-HSD和Aromatase mRNA表达水平。试验结果表明,与对照组相比,DHEA处理后血清雄烯二酮在3-12 h内均极显著升高（P0.01）,12-48 h内均显著升高（P0.05）其含量在3 h达到最大值,较同时间点的对照组增加了165%;血清睾酮含量在DHEA处理后3-6 h极显著高于对照组（P0.01）,其含量也在3 h达到最大值,较同时间点的对照组增加了8000%。血清雌二醇含量则在DHEA处理后的6 h极显著升高（P0.01）,且达到最大值,较同时间点的对照组增加了113%,雌酮和孕酮含量在48 h内均无显著变化。与对照组相比,DHEA处理后血清皮质醇含量在3 h显著升高（P0.05）,而后逐渐降低,在24 h则显著低于对照组（P0.05）;血清醛固酮含量在6 h显著升高（P0.05）。类固醇激素代谢关键酶mRNA表达分析结果表明,与对照组相比,DHEA处理后肾上腺组织中3β-HSD和17β-HSD mRNA表达水平在3-12 h显著升高（P0.05）,而Aromatase mRNA表达水平在DHEA处理后的3 h和12 h显著高于对照组（P0.05）;在卵巢组织中DHEA处理后3β-HSD mRNA表达水平在3和12 h极显著下降（P0.01）,6h显著下降（P0.05）;17β-HSD mRNA表达水平仅在12 h极显著低于对照组（P0.01）,而Aromatizes mRNA表达水平在3h极显著降低（P0.001）,6 h极显著升高（P0.01）,12 h再次极显著降低（P0.01）,之后在24-48 h再次极显著上升（P0.01）,其在3-12 h内变化趋势与肾上腺中Aromatase mRNA表达趋势正好相反。以上结果提示,外源性DHEA可以显著升高正常雌性大鼠体内的雄激素（雄烯二酮和睾酮）、雌激素（雌二醇）和肾上腺皮质激素（皮质醇和醛固酮）的含量;DHEA在雌性大鼠体内的生物转化主要是优先向雄激素而不是雌激素转化,且其主要是通过促进肾上腺3β-HSD和17β-HSD的mRNA表