O-GlcNAc修饰对泛素化相关基因的调控

作     者：周丰 

作者单位：天津大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王劲峰;张连文

授予年度：2014年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

主      题：蛋白间相互应答 泛素化 O-GlcNAc修饰 F-box蛋白 FBXW10 FBXO4 Real-timePCR 阵列分析 

摘      要：多种翻译后修饰之间存在着复杂的联系，这种联系对于细胞活动特别是蛋白的降解和功能的调节起着重要作用。泛素化和O-GlcNAc修饰作为两种重要的翻译后修饰，二者之间存在联系。其中泛素化是泛素激活酶（E1）、泛素结合酶（E2）、泛素连接酶（E3）催化的多步反应，这些酶中有一些能被O-GlcNAc修饰，或在转录水平受O-GlcNAc修饰的蛋白调节。本研究发现了在HEK293T细胞中的蛋白泛素化和O-GlcNAc修饰的联系。通过在HEK293T细胞中转染OGT，使其过表达sOGT、ncOGT，以及加入PUGNAc（OGA的抑制剂）和加入GLcN三种方式来提高细胞中蛋白的O-GlcNAc的修饰水平。在三种提高O-GlcNAc修饰水平的条件下，通过RT2profiler PCR array方法，检测人泛素化途径相关的84个基因转录水平的变化。其中FBXW10蛋白是一种泛素化的靶特定蛋白F-Box蛋白，在以上增加O-GlcNAc修饰的方式中都出现下调表达。根据GlcN对FBXW10基因有负调节作用，在HEK293T细胞中加入GlcN，在不同时间点进行real-timePCR和Western Blot检测，本研究发现在不同时间点mRNA水平和蛋白水平都有明显下调。另外本研究还发现HEK293T细胞中内源的FBXW10被O-GlcNAc修饰，O-GlcNAc修饰可能在多重水平上调节FBXW10。这些发现都说明O-GlcNAc修饰与泛素化相关基因的调节有关，对理解O-GlcNAc和泛素化之间的相互联系起到重要作用。