雷公藤内酯醇诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的实验研究

作     者：欧阳曙明 

作者单位：华中科技大学 

学位级别：硕士

导师姓名：杨业金

授予年度：2007年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：雷公藤内酯醇 非小细胞肺癌 细胞凋亡 半胱天冬酶3 Survivin 

摘      要：目的探讨雷公藤内酯醇(Triptolide,TPL)对人非小细胞肺癌A549细胞增殖的抑制作用及促A549细胞凋亡的分子机制,为雷公藤内酯醇治疗非小细胞肺癌提供一定的实验依据。 方法1、以A549细胞为细胞模型,采用MTT法测定不同浓度不同时间TPL对A549细胞的增殖抑制作用。2、采用琼脂糖凝胶电泳法(DNA ladder法)、吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光染色法检测A549凋亡。3、采用Caspase-3活性检测法分析TPL促A549细胞凋亡机制。4、采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测A549细胞Survivin mRNA的水平,分析其凋亡调控途径。 结果1、在浓度6.25-100ng/ml、时间12-48h检测范围内,TPL对A549细胞增殖抑制作用同对照组相比具有显著差异(p0.05)。2、DNA ladder法检测到DNA梯状条带,证明A549细胞凋亡的发生;AO/EB荧光染色法检测到凋亡细胞特异性形态学改变,且48h内凋亡率随着时间延长而增加(p0.05)。3、TPL激活Caspase-3,48h内Caspase-3活性较对照组有显著提高(p0.05),12h处活性最大;TPL浓度6.25-100ng/ml内,Caspase-3活性升高,并具有浓度依赖性(p0.05)。4、TPL显著抑制A549细胞Survivin mRNA水平(p0.05)。5、Survivin mRNA水平与Caspase-3活性呈负相关。 结论低浓度TPL能有效抑制A549细胞的增殖,这种抑制作用与TPL激活Caspase-3,降低Survivin mRNA水平从而促进细胞凋亡有关。