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半胱天冬酶3前酶增强胞嘧啶脱氨酶-胸苷激酶融合双自杀基因系统治疗人卵巢癌的体外研究

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中华妇产科杂志 2005年第6期40卷 411-416页

作者：宋悦孔北华马道新曲迅江森山东大学齐鲁医院妇产科山东大学齐鲁医院肿瘤防治中心血液病研究室

目的探讨半胱天冬酶3前酶(procaspase3)能否增强胞嘧啶脱氨酶胸苷激酶/5氟胞嘧啶+更昔洛韦(CDTK/5FC+GCV)系统对人卵巢癌细胞的体外杀伤作用。方法构建procaspase3的表达载体pcDNA3casp3和人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控下的CDTK融... 详细信息

目的探讨半胱天冬酶3前酶(procaspase3)能否增强胞嘧啶脱氨酶胸苷激酶/5氟胞嘧啶+更昔洛韦(CDTK/5FC+GCV)系统对人卵巢癌细胞的体外杀伤作用。方法构建procaspase3的表达载体pcDNA3casp3和人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控下的CDTK融合双自杀基因表达载体pBTdel279CDTK。应用蛋白印迹法检测pcDNA3casp3和pcDNA3质粒转染后的3AO细胞(3AOpcDNA3casp3、3AOpcDNA3细胞)中procaspase3蛋白的表达情况;应用RTPCR技术检测pBTdel279CDTK和pBTdel279分别转染的3AOpcDNA3casp3和3AOpcDNA3细胞中CD和TK基因的表达情况;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞仪技术、蛋白印迹法和荧光底物分析法分别检测4种细胞在CDTK/5FC+GCV系统作用后的细胞存活率、细胞周期及半胱天冬酶3(caspase3)活性。结果3AOpcDNA3casp3细胞有明显的procaspase3蛋白表达,而3AOpcDNA3细胞则无表达。3AOpcDNA3casp3和3AOpcDNA3细胞在pBTdel279CDTK转染后均可检测到CD和TK基因,但在pBTdel279质粒转染后则CD和TK基因表达均为阴性。在5FC+GCV作用下,3AOpcDNA3casp3+pBTdel279CDTK细胞的存活率显著低于3AOpcDNA3+pBTdel279CDTK细胞。在5FC(2mmol/L)+GCV(10μg/ml)作用48h后,3AOpcDNA3casp3+pBTdel279CDTK细胞的凋亡率为37.98%,S期比例为49.67%,分别高于3AOpcDNA3+pBTdel279CDTK细胞的21.34%和35.76%,两者分别比较,差异有统计学意义(P3AOpcDNA3casp3+pBTdel279CDTK细胞中的caspase3活性值为189.7,高于3AOpcDNA3+pBTdel279CDTK细胞的44.9,两者比较,差异有统计学意义(P3可显著增强CDTK/5FC+GCV系统对人卵巢癌细胞的杀伤作用。

关键词：胞嘧啶脱氨酶半胱天冬酶3 胸苷激酶双自杀基因体外研究系统治疗 caspase-3蛋白融合人端粒酶逆转录酶人卵巢癌细胞 CD-TK PCR技术检测四甲基偶氮唑蓝流式细胞仪技术蛋白印迹法 GCV系统体外杀伤作用 5-氟胞嘧啶

早期激素性股骨头缺血性坏死模型的建立及半胱天冬酶3活性测定

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第20期14卷 3701-3704页

作者：胡峰赵劲民李晓峰梁晓南陆荣斌广西医科大学第一附属医院创伤手外科广西壮族自治区南宁市530021

背景:有研究表明骨细胞凋亡与激素性股骨头缺血性坏死的发病机制密切相关,而活化的半胱天冬酶3可作用于其他半胱天冬酶家族成员,使蛋白酶级联反应放大,最终导致细胞凋亡。但半胱天冬酶3参与的骨细胞凋亡与早期激素性股骨头缺血性坏死的... 详细信息

背景:有研究表明骨细胞凋亡与激素性股骨头缺血性坏死的发病机制密切相关,而活化的半胱天冬酶3可作用于其他半胱天冬酶家族成员,使蛋白酶级联反应放大,最终导致细胞凋亡。但半胱天冬酶3参与的骨细胞凋亡与早期激素性股骨头缺血性坏死的相关研究则罕见报道。目的:采用大剂量激素联合强迫兔直立负重的方法建立早期激素性股骨头缺血性坏死模型并测定骨细胞半胱天冬酶3活性。方法:将4月龄新西兰大白兔随机分成模型组和对照组。模型组每周3次臀肌注射地塞米松,每日强迫兔直立1h,对照组注射等量生理盐水。分别于3,6,9和12周处死动物,取其双侧股骨头,光镜及电镜下观察组织病理学改变,应用对-硝基酰苯胺比色法测定骨细胞半胱天冬酶3活性。结果与结论:给药3周后,模型组光镜下可见脂肪细胞肥大和增多,骨髓间充质干细胞及造血干细胞数量相对减少;给药6周后,模型组空骨陷凹率均大于对照组(P半胱天冬酶3活性高于对照组(P半胱天冬酶3参与的骨细胞凋亡可能与早期激素性股骨头缺血性坏死发病过程有关。

关键词：激素性股骨头坏死骨细胞凋亡半胱天冬酶3 骨组织工程

氧合血红蛋白诱导脑微血管内皮细胞凋亡中半胱天冬酶3和细胞色素C的变化

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军事医学科学院院刊 2009年第1期33卷 37-40页

作者：李德生许百男邱海霞段炼军事医学科学院附属医院神经外科北京100071 解放军总医院神经外科北京100853 解放军总医院激光医学科北京100853

目的:探讨氧合血红蛋白(oxyhemoglobin,OxyHb)诱导体外培养的大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvas-cular endothelial cells,BMvECs)凋亡的可能机制。方法:将原代培养的大鼠BMvECs分别与10μmol/L和100μmol/L的OxyHb共孵育,在孵育后6、12和24h分别以流式细胞术、荧光分光光度计法和Western印迹检测线粒体跨膜电位(mitochondrial transmembrane potentials,ΔΨm)、半胱天冬酶3(caspase-3)和细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)的表达水平。结果:经10μmol/L和100μmol/LOxyHb刺激6～24h后,与对照组相比,OxyHb能显著降低血管内皮细胞ΔΨm,而增强Cyt-C和caspase-3的表达,并呈刺激时间和刺激浓度依赖性。与10μmol/LOxyHb分别孵育6、12和24h,caspase-3的活性分别为0.103±0.010,0.126±0.010和0.234±0.031,而在OxyHb100μmol/L组,其6、12和24h caspase-3的活性分别为0.154±0.012,0.205±0.020和0.302±0.015。结论:ΔΨm的下降、caspase-3的激活以及Cyt-C的释放可能是OxyHb诱导BMvECs凋亡的重要机制。

关键词：蛛网膜下腔出血脑血管痉挛细胞凋亡半胱天冬酶3 细胞色素C类

3种中药对脓毒症大鼠脾脏半胱天冬酶3表达影响的对比研究

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中华医院感染学杂志 2007年第12期17卷 1495-1497页

作者：孙成栋张淑文李真文艳阴赪宏王宝恩北京大学第四临床医学院积水潭医院北京100035 首都医科大学附属北京友谊医院北京100050

目的研究脓毒症大鼠脾脏半胱天冬酶(caspase)3表达变化以及3种中药对脓毒症大鼠脾脏caspase 3表达影响的对比。方法采用盲肠结扎穿孔(CLP)的方法造成脓毒症模型,造模成功后分成5组,造模后3、24、72 h腹腔静脉取血;采用免疫组化的方法检... 详细信息

目的研究脓毒症大鼠脾脏半胱天冬酶(caspase)3表达变化以及3种中药对脓毒症大鼠脾脏caspase 3表达影响的对比。方法采用盲肠结扎穿孔(CLP)的方法造成脓毒症模型,造模成功后分成5组,造模后3、24、72 h腹腔静脉取血;采用免疫组化的方法检测脾脏淋巴细胞caspase 3阳性细胞的表达。结果脓毒症大鼠的脾淋巴细胞caspase 3表达是明显升高的,代表脾脏淋巴细胞凋亡增加,3种中药均能明显降低脾淋巴细胞caspase3表达。结论3种中药能减低脓毒症淋巴细胞凋亡,调节机体免疫。

关键词：脓毒症复方清热颗粒芪参活血颗粒通腑颗粒半胱天冬酶3

苦瓜蛋白对柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠半胱天冬酶3活性及凋亡的抑制作用

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中国动脉硬化杂志 2003年第2期11卷 107-110页

作者：王佐李双杰杨永宗中南大学湘雅医学院病理生理学系湖南省长沙市410078 南华大学附属第一医院儿科南华大学医学院心血管病研究所湖南省衡阳市421001

为研究苦瓜蛋白对凋亡的关键酶半胱天冬酶 3及凋亡的调节作用 ,用已经建立起来的方法从苦瓜果肉中提取苦瓜蛋白。将BALB/C小鼠分为 4组 :病毒对照组、正常对照组、药物对照组和药物治疗组 ,分别在第 0天、第 3天、第 7天和第 14天各处... 详细信息

为研究苦瓜蛋白对凋亡的关键酶半胱天冬酶 3及凋亡的调节作用 ,用已经建立起来的方法从苦瓜果肉中提取苦瓜蛋白。将BALB/C小鼠分为 4组 :病毒对照组、正常对照组、药物对照组和药物治疗组 ,分别在第 0天、第 3天、第 7天和第 14天各处死 5只小鼠 ,第 2 1天全部处死动物 ,心肌组织半胱天冬酶 3活性测定按照CAL BIOCHEM公司的试剂说明书进行 ,并稍加改正 ,凋亡鉴定按照Oncogene公司的TdT DNA裂解片断末端原位标记试剂说明书进行。结果发现 ,①病毒对照组第 7天开始出现半胱天冬酶 3活性 (0 .6 3± 0 .2 1pmol/min ,n =5 ) ,第 14天的活性 (10 .9± 1.5pmol/min ,n =5 )显著高于第 7天 ,第 2 1天的活性 (12 .6± 1.3pmol/min ,n =5 )又高于第 14天。②药物治疗组 ,只有一个第 2 1天的标本有半胱天冬酶 3活性 (0 .4 1pmol/min) ,其它两组均未检测到此酶的活性。③DNA裂解片断末端原位标记法发现 ,病毒对照组在第 7天心肌中有少数细胞凋亡 ,第 14天、第 2 1天凋亡细胞明显增多 ,在非病变区域可发现单个凋亡的心肌细胞。治疗组未发现凋亡细胞 ,其它两组也未发现凋亡细胞。结果提示 ,CVB3病毒性心肌炎中发现有明显的凋亡现象 ,凋亡和半胱天冬酶 3发现于第 7天 ,且随着时间增加而逐渐加重(增强 ) ;苦瓜蛋白可显?

关键词：病理生理学苦瓜蛋白对柯萨奇3型病毒性心肌炎的治疗作用机制 DNA片断原位末端标记法半胱天冬酶3 心肌细胞凋亡柯萨奇3型病毒病毒性心肌炎小鼠模型苦瓜蛋白

槲皮素激活焦亡途径抑制胃癌细胞增殖和迁移的机制研究

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中国肿瘤临床 2023年第20期50卷 1033-1039页

作者：荣耀刘松华唐明政蔡辉甘肃中医药大学第一临床医学院兰州市730000 甘肃省外科肿瘤分子诊断与精准治疗重点实验室甘肃省人民医院普外临床中心

目的:探讨槲皮素介导焦亡途径来发挥抗胃癌作用的机制。方法:将胃癌细胞分为实验组和经槲皮素干预的对照组。CCK-8实验检测槲皮素对AGS胃癌细胞增殖的影响;细胞划痕实验检测槲皮素对胃癌细胞迁移能力的影响。蛋白印记检测(Western blot... 详细信息

目的:探讨槲皮素介导焦亡途径来发挥抗胃癌作用的机制。方法:将胃癌细胞分为实验组和经槲皮素干预的对照组。CCK-8实验检测槲皮素对AGS胃癌细胞增殖的影响;细胞划痕实验检测槲皮素对胃癌细胞迁移能力的影响。蛋白印记检测(Western blot)检测槲皮素干预后AGS细胞内裂解的半胱天冬酶1(cleaved caspase-1,CASP1)、加斯德明D(gasdermin D,GSDMD)等蛋白表达差异;构建敲减半胱天冬酶3(caspase-3,CASP3)基因的AGS稳转细胞株,并检测转染效率。Western blot检测AGS与AGS(shCASP3)中GSDMD、GSDME等蛋白表达差异。经槲皮素干预后,Western blot再次检测AGS(shCASP3)内GSDMD和加斯德明E(GSDME)等蛋白表达变化。结果:体外实验表明,槲皮素对AGS细胞的增殖和迁移能力有显著抑制作用,并能上调CASP1、GSDMD等蛋白的表达。与正常AGS细胞相比,AGS(shCASP3)细胞内GSDME表达上调,经各浓度槲皮素干预培养后,AGS(shCASP3)细胞内GSDME表达趋势逆转。结论:槲皮素能够抑制胃癌细胞增殖和迁移能力,这可能与槲皮素激活CASP1/GSDMD、CASP3/GSDME信号通路进而触发焦亡途径有关。

关键词：槲皮素胃癌焦亡加斯德明D 半胱天冬酶3

异土木香内酯诱导慢性粒细胞白血病细胞BCR-ABL融合蛋白降解

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上海交通大学学报（医学版） 2021年第7期41卷 891-897页

作者：陈晨高丰厚上海交通大学医学院附属第九人民医院肿瘤科上海201999

目的·探索异土木香内酯(isoalantolactone,Iso)对伊马替尼敏感和耐药的慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞的效应,以及下调BCR-ABL融合蛋白的分子机制。方法·采用不同浓度的Iso分别处理K562和K562R细胞0、24、36、4... 详细信息

目的·探索异土木香内酯(isoalantolactone,Iso)对伊马替尼敏感和耐药的慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞的效应,以及下调BCR-ABL融合蛋白的分子机制。方法·采用不同浓度的Iso分别处理K562和K562R细胞0、24、36、48 h后,用CCK-8法测定Iso对CML细胞的抑制效应。用流式细胞术检测Iso诱导K562和K562R细胞24 h的凋亡效应。蛋白质印迹法(Western blotting)检测不同浓度、不同作用时间下Iso对CML细胞中BCR-ABL融合蛋白水平的影响。采用反转录及实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测Iso对CML细胞中BCR-ABL mRNA水平的影响。分别用蛋白酶体抑制剂MG132、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤和溶酶体抑制剂氯喹联合Iso处理K562细胞,用半胱天冬酶抑制剂Z-VAD-FMK联合Iso处理K562与K562R细胞,并采用Western blotting检测BCR-ABL融合蛋白水平的改变。在K562R细胞中敲减半胱天冬酶3(caspase 3,CASP3)、半胱天冬酶7(caspase 7,CASP7),检测其对由Iso诱导BCR-ABL融合蛋白下调的影响。结果·Iso抑制CML细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性。流式细胞术结果显示Iso可增加K562与K562R细胞凋亡的发生(均P<0.05)。Western blotting结果显示Iso能诱导BCR-ABL融合蛋白水平降低,而qPCR结果显示BCR-ABL mRNA水平无显著变化。MG132、3-甲基腺嘌呤以及氯喹不能逆转由Iso诱导的BCR-ABL融合蛋白的下调,而Z-VAD-FMK可部分逆转该下调。敲减CASP3后能部分逆转由Iso诱导的BCR-ABL蛋白的降解,而CASP7敲减后则无影响。结论·Iso可靶向降解BCR-ABL融合蛋白。该结果为克服CML细胞的耐药提供了实验基础。

关键词：异土木香内酯 BCR-ABL融合蛋白慢性粒细胞白血病蛋白降解半胱天冬酶3

电针预处理对心肌缺血/再灌注损伤大鼠线粒体活性氧介导的细胞凋亡的影响

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针刺研究 2020年第12期45卷 961-967页

作者：张小蕾黄伟杨琪琪向丽莉薛艺璇林依梦姜功道湖北中医药大学针灸骨伤学院/针灸治未病湖北省协同创新中心武汉430061 湖北省中医院针灸科武汉430061

目的:探讨电针预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠的保护作用及其对线粒体活性氧(ROS)的作用机制。方法:将80只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、再灌注组和电针组,每组20只。正常组、假手术组、再灌注组均给予捆绑,电... 详细信息

目的:探讨电针预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠的保护作用及其对线粒体活性氧(ROS)的作用机制。方法:将80只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、再灌注组和电针组,每组20只。正常组、假手术组、再灌注组均给予捆绑,电针组给予电针预处理,均20 min/次,1次/d,共7 d。第8天正常组麻醉50 min后、假手术组开胸暴露心脏50 min后、再灌注组及电针组开胸缺血20 min再灌注30 min后取材。根据心电图STⅡ段变化,判断MIRI模型是否成功;采用室性心律失常(VA)评分评价心律失常情况;采用ELISA法检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量;采用DHE染色法检测心肌组织中ROS含量;采用实时荧光定量PCR法检测心肌组织中细胞色素C(Cyt-C)、半胱天冬酶9(Caspase-9)、半胱天冬酶3(Caspase-3)基因表达水平。结果:正常组与假手术组在各项指标上差异均无统计学意义(P>0.05);与假手术组比较,再灌注组的VA评分、血清CK-MB含量、心肌ROS含量及Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达均明显升高(P<0.01);与再灌注组比较,电针组VA评分、血清CK-MB含量、心肌ROS含量及Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达均明显下降(P<0.01)。结论:电针预处理对MIRI大鼠的保护作用可能是基于调控ROS介导的凋亡通路产生的。

关键词：心肌缺血再灌注损伤电针预处理肌酸激酶同工酶活性氧细胞色素C 半胱天冬酶9 半胱天冬酶3

铁包金通过APE1调节凋亡相关蛋白防治慢加急性肝衰竭大鼠的作用

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中药新药与临床药理 2016年第6期27卷 794-799页

作者：刁建新马文校戴凤翔李铭链张婷婷陆梓雯杨运高南方医科大学中医药学院广东广州510515

目的观察铁包金对慢加急性肝衰竭的作用及其对无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶1(APE1)、caspase3、bax、bcl-2的影响。方法取SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只,分别为正常对照组、模型组、铁包金组(8 g·kg^(-1)·d^(-1))和安宫牛黄丸组(0.27 g... 详细信息

目的观察铁包金对慢加急性肝衰竭的作用及其对无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶1(APE1)、caspase3、bax、bcl-2的影响。方法取SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只,分别为正常对照组、模型组、铁包金组(8 g·kg^(-1)·d^(-1))和安宫牛黄丸组(0.27 g·kg^(-1)·d^(-1))。采用四氯化碳(CCL4)联合D-氨基半乳糖(D-Gal N)和脂多糖(LPS)复制慢加急性肝衰竭模型。观察大鼠48 h内的病死率。全自动生化仪检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)、血清总胆红素(TBIL)的水平。HE染色观察肝脏病理变化。Tunel染色观察肝细胞凋亡指数(AI)。免疫印迹检测APE1、caspase3、bax和bcl-2蛋白的表达。共聚焦显微镜观察APE1的原位表达。结果正常对照组、模型组、铁包金组和安宫牛黄丸组48 h病死率分别为0%、50%、20%和20%。与模型组比较,铁包金组显著降低ALT、AST、TBIL、AI、caspase3和bax的水平,差异有统计学意义(P0.05)。结论铁包金对慢加急性肝衰竭具有一定的防治作用,可能是铁包金通过APE1/Ref^(-1)调控凋亡相关蛋白防治慢加急性肝衰竭。

关键词：铁包金慢加急性肝衰竭无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶1 半胱天冬酶3 bax bcl-2