沙培林在制备脐血树突状细胞瘤苗中的应用

作     者：陈玄 

作者单位：福建医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：倪秀雄

授予年度：2006年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：树突状细胞 脐血 脐血浆 沙培林(non MESH) 胃癌 瘤苗 

摘      要：目的 用脐血浆代替胎牛血清，减少体外诱导培养树突状细胞(Dendritic cells，DCs)所需的细胞因子，观察沙培林对脐血来源的DC功能的影响，探讨制备高效抗肿瘤DC疫苗的优化方案，为以后应用于临床抗肿瘤治疗打下基础。 方法 经FICOLL法贴壁分离脐血单个核细胞并在含10％同源脐血浆、GM-CSF和IL-4的培养体系中诱导培养，部分加入肿瘤冻融抗原和／或沙培林(OK432)冲击，光镜和电镜下观察细胞形态，流式细胞仪检测培养前后各组细胞表面抗原CD1a和CD83的表达情况，MTT法检测不同方法诱导下的DC体外刺激同种混合淋巴细胞增殖的免疫活性，LDH法检测DC诱导的CTL对不同靶细胞的细胞毒作用。 结果 收集第九天的各组DC，从其细胞形态、表型和诱导淋巴细胞杀伤肿瘤细胞作用等方面比较得到以下结果： 1 在GM-CSF和IL-4的诱导下，含丰富细胞因子的同源脐血浆的培养体系中脐带血来源的单个核细胞能分化成为表型、形态和功能正常的imDC。 2 imDC能吞噬胃癌细胞SCG-7901冻融抗原进而成熟，光镜和电镜下观察其具有典型的成熟DC的形态，表型发生相应变化，能呈递胃癌相关抗原给淋巴细胞刺激其增殖并诱导对胃癌细胞株特异的CTL毒性。 3 沙培林联合肿瘤冻融抗原冲击的方法是促进DC更为成熟的优选方案，其能进一步提高DC免疫活性，上调DC表面相关免疫辅助分子的表达并增强其抗原呈递功能，诱导更强的混合淋巴细胞增殖反应及针对胃癌细胞株的强烈的CTL杀伤效应。 结论 本实验提供了一个诱导脐带血来源的前体细胞分化为imDC的相对简便