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抗AIDS新型导向毒素CVN-LP1融合基因的构建及原核表达

Construction and Prokaryotic Expression of a New Anti-HIV Targeted Toxin

作     者:李昌 金宁一 刘玉生 于芳 金洪涛 李臻 佟敬山 胡宁宁 LIU Yu-sheng;JIN Ning-yi;LI Chang;YU Fang;JIN Hong-tao;LI Zhen;Tong Jing-shan;Hu Ning-ning

作者机构:军事医学科学院军事兽医研究所基因工程实验室 

出 版 物:《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期:2007年第27卷第3期

页      面:100-104页

核心收录:

学科分类:0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基  金:吉林省应用基础项目(20060570) 

主  题:核糖体失活蛋白 原核表达Cyanovirin-N LuffinP1 

摘      要:目的:构建重组抗病毒融合蛋白CVN-LP1原核表达载体,并进行表达和鉴定。方法:将已经构建好的pET-CVN和pET-LP1重组质粒,EcoRI和HindⅢ同时进行双酶切,保留LP1片段前端的linker序列。将所得的CVN片段连入pET-LP1载体上,构建pET-CVN-LP1融合表达载体,转化入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。SDS-PAGE、Western-blot鉴定表达产物。结果:重组载体pET-28a(+)-CVN-LP1经PCR及XhoI/EcoRI和EcoRI/HindIII双酶切鉴定,证实构建成功。将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物相对分子量约为20kDa,与理论大小一致。凝胶成像分析表明最高表达量可占菌体总蛋白的49.58%。SDS-PAGE、Western-blot分析表明目的蛋白得到了很好的表达。结论:构建了pET-CVN-LP1原核表达载体,并得到了目的融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了坚实的基础。

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