检索结果-南通市图书馆

中国生物工程杂志 2007年第3期27卷 100-104页

作者：李昌金宁一刘玉生于芳金洪涛李臻佟敬山胡宁宁军事医学科学院军事兽医研究所基因工程实验室

目的:构建重组抗病毒融合蛋白CVn-LP1原核表达载体,并进行表达和鉴定。方法:将已经构建好的pET-CVn和pET-LP1重组质粒,EcoRI和HindⅢ同时进行双酶切,保留LP1片段前端的linker序列。将所得的CVn片段连入pET-LP1载体上,构建pET-CVn-LP1融... 详细信息

目的:构建重组抗病毒融合蛋白CVn-LP1原核表达载体,并进行表达和鉴定。方法:将已经构建好的pET-CVn和pET-LP1重组质粒,EcoRI和HindⅢ同时进行双酶切,保留LP1片段前端的linker序列。将所得的CVn片段连入pET-LP1载体上,构建pET-CVn-LP1融合表达载体,转化入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。SDS-PAGE、Western-blot鉴定表达产物。结果:重组载体pET-28a(+)-CVn-LP1经PCR及XhoI/EcoRI和EcoRI/HindIII双酶切鉴定,证实构建成功。将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物相对分子量约为20kDa,与理论大小一致。凝胶成像分析表明最高表达量可占菌体总蛋白的49.58%。SDS-PAGE、Western-blot分析表明目的蛋白得到了很好的表达。结论:构建了pET-CVn-LP1原核表达载体,并得到了目的融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了坚实的基础。

关键词：核糖体失活蛋白原核表达cyanovirin-n LuffinP1

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