检索结果-南通市图书馆

水稻核糖体失活蛋白RIPs基因家族的生物信息学分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

分子植物育种 2024年

作者：徐娅黄佑岗李树杏贵州省农业科学院水稻研究所

核糖体失活蛋白(RIPs)可通过破坏核糖体结构来抑制蛋白质生物合成，对各类生物和非生物胁迫均能产生抗性，对水稻RIPs家族成员进行生物信息学分析，可为进一步探究RIPs家族在水稻生长发育与胁迫响应中的生物学功能提供方向。本研究通过... 详细信息

核糖体失活蛋白(RIPs)可通过破坏核糖体结构来抑制蛋白质生物合成，对各类生物和非生物胁迫均能产生抗性，对水稻RIPs家族成员进行生物信息学分析，可为进一步探究RIPs家族在水稻生长发育与胁迫响应中的生物学功能提供方向。本研究通过水稻全基因组数据库，鉴定水稻RIPs家族成员，利用生物信息学工具对其进行理化性质、保守基序、表达模式、胁迫响应及顺式作用元件分析。生物信息学分析结果表明，水稻全基因组共有37个OsRIPs基因，在水稻基因组除4-6号染色体外均有分布，有1组大片段复制基因和6组串联基因簇；表达聚类分析表明OsRIPs基因在大部分组织器官都有表达，在幼穗和胚乳中的表达信号较为集中；有3个OsRIPs基因对非生物胁迫有响应且表达均显著上升；对OsRIPs基因进行顺式作用元件分析显示该家族参与植物生长发育、生物与非生物胁迫的元件和激素响应。水稻OsRIPs基因在植物生长发育、生物与非生物胁迫的元件和激素响应等生理活动中发挥了重要作用，全基因组生物信息学分析结果为后续RIPs基因的功能研究提供参考。

关键词：水稻核糖体失活蛋白生物信息学分析

重组靶向核糖体失活蛋白luffin-α-NGR的制备及抗肿瘤活性评价

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2022年第3期38卷 1138-1148页

作者：周哲越蒋欣怡张宏瑞黄志广邹瑞楼秋雯王玉朱振洪浙江中医药大学生命科学学院浙江杭州310053

将丝瓜籽核糖体失活蛋白luffin-α与肿瘤靶向肽NGR融合,制备luffin-α-NGR重组蛋白,并检测其对肿瘤细胞与血管生成的抑制活性。通过引物设计及PCR扩增获得luffin-α-NGR融合基因,与pGEX-6p-1载体连接后获得pGEX-6p-1/luffin-α-NGR重组... 详细信息

将丝瓜籽核糖体失活蛋白luffin-α与肿瘤靶向肽NGR融合,制备luffin-α-NGR重组蛋白,并检测其对肿瘤细胞与血管生成的抑制活性。通过引物设计及PCR扩增获得luffin-α-NGR融合基因,与pGEX-6p-1载体连接后获得pGEX-6p-1/luffin-α-NGR重组质粒,质粒转入大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21中表达,以GST亲和层析法分离纯化目的蛋白。MTT比色法、Transwell迁移实验以及鸡胚尿囊膜实验(CAM)检测其活性。结果表明,成功获得全长为849bp的luffin-α-NGR融合基因,目标蛋白在16℃、0.5mmol/LIPTG诱导16h后获得最佳表达,经SDS-PAGE和Western blotting分析,GST融合蛋白分子量为56.6 kDa,与预期一致。重组蛋白经GST亲和层析、蛋白酶精准酶切去除标签后,利用MTT法验证其对HepG2和MDA-MB-231细胞的抑制效果显著优于luffin-α。Transwell迁移实验和CAM实验证实重组蛋白luffin-α-NGR对肿瘤细胞迁移和血管生成具有明显的抑制作用。本研究成功地制备了重组蛋白luffin-α-NGR,并证实该重组蛋白对肿瘤细胞具有良好的抑制活性,为后续重组靶向蛋白药物的开发奠定基础。

关键词：丝瓜核糖体失活蛋白 luffin-α 抗肿瘤靶向肽

麻疯树核糖体失活蛋白CURCIN2在机械损伤下的诱导表达机制

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

应用与环境生物学报 2023年第1期29卷 52-56页

作者：张懿肖思凝何玮西北大学生命科学学院西部资源与现代生物技术省部共建教育部重点实验室西安710069 美国特拉华大学健康科学学院纽瓦克DE 19716

核糖体失活蛋白(ribosome inactivating proteins,RIPs)广泛存在于植物中,其中许多是对病原及菌昆虫起强有力防御作用的毒蛋白.麻疯树(Jatropha curcas L.)是典型的油料作物,植株中含有名为CURCIN的RIPs家族,并且CURCIN家族不同成员在... 详细信息

核糖体失活蛋白(ribosome inactivating proteins,RIPs)广泛存在于植物中,其中许多是对病原及菌昆虫起强有力防御作用的毒蛋白.麻疯树(Jatropha curcas L.)是典型的油料作物,植株中含有名为CURCIN的RIPs家族,并且CURCIN家族不同成员在种子及叶片中均存在表达.麻疯树叶片中CURCIN2受多种非生物胁迫条件诱导,但是否受到机械损伤诱导、如何受到植物激素调控尚不清楚.机械损伤可模拟植食性动物对植物的采食,为了解植物中RIPs在该胁迫条件下的表达及受调控模式,通过转录组测序、实时定量PCR和LC-MS测定,研究机械损伤处理条件下麻疯树CURCIN2的表达情况、茉莉酸及其衍生物的含量、合成的关键基因表达情况,探究茉莉酸的调控作用.结果显示,CURCIN2在直接损伤叶片中上调表达最高近300倍,在未受损伤远端叶片中上调表达最高约15倍.茉莉酸合成关键基因LOX2、OPR3和AOS的表达量受到约1.5至6倍的上调表达,茉莉酸合成前体OPDA、茉莉酸及两种衍生物茉莉酸甲酯(MeJA)和茉莉酸-L-异亮氨酸(JA-ILE)的含量在直接损伤叶片和未受损伤远端叶片中均显著增加1.5-40倍.外源喷洒MeJA处理促进叶片中CURCIN2的表达水平升高1.5-4.5倍.本研究表明CURCIN2被机械损伤诱导表达,并受到茉莉酸的调控,同时CURCIN2可能参与麻疯树的系统防御.(图4表2参27)

关键词：机械损伤麻疯树核糖体失活蛋白 CURCIN2 茉莉酸

核糖体失活蛋白及其在黄瓜中的表达分析（英文）

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物化学与生物物理进展 2017年第10期44卷 929-941页

作者：党刘毅 Pierre Rougé Els JM Van Damme Laboratory of Biochemistry and Glycobiology Department of Molecular Biotechnology Ghent University Ghent Belgium UMR 152 PHARMA-DEV Universitd de Toulouse Toulouse France

核糖体失活蛋白是一类具有高度特异性r RNA N-糖苷酶活性的蛋白,它们能够使原核或真核细胞的核糖体失活因而具有细胞毒性.由于其独特的生物学性质,核糖体失活蛋白被认为在农业和医学中都有着巨大的应用潜力.我们之前的研究表明,黄瓜的... 详细信息

核糖体失活蛋白是一类具有高度特异性r RNA N-糖苷酶活性的蛋白,它们能够使原核或真核细胞的核糖体失活因而具有细胞毒性.由于其独特的生物学性质,核糖体失活蛋白被认为在农业和医学中都有着巨大的应用潜力.我们之前的研究表明,黄瓜的基因组中共包含2个2类核糖体失活蛋白基因,分别命名为Cumsa AB1和Cumsa AB2.以蓖麻毒蛋白Ricin为代表,2类核糖体失活蛋白通常由2条二硫键连接的肽链组成:具有N-糖苷酶活性的A链与具有凝集素活性的B链.本文研究了黄瓜中核糖体失活蛋白的表达情况.亚细胞定位研究表明Cumsa AB1经过蛋白分泌通路表达于细胞外,这与蛋白质序列分析显示的Cumsa AB1包含一个信号肽而不含转膜区域相一致.对黄瓜的不同生长阶段的不同组织中的转录水平分析表明,Cumsa AB1在大部分组织中以极低的水平表达,而Cumsa AB2表达水平则明显更高,尤其在第一片真叶阶段和刚开花的植物中.最后,我们使用分子模拟对黄瓜中核糖体失活蛋白的结构及糖结合位点进行了分析.本研究对黄瓜中核糖体失活蛋白的亚细胞定位、表达水平和可能的蛋白质结构进行了研究,为其进一步的生物学功能研究提供了重要信息.

关键词：凝集素核糖体失活蛋白亚细胞定位表达分析

麻疯树核糖体失活蛋白Curcin和Curcin C与腺苷及腺嘌呤的互作方式分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

四川大学学报（自然科学版） 2022年第4期59卷 181-186页

作者：邓聿杉徐莺四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室成都610065

麻疯树核糖体失活蛋白Curcin和Curcin C均具N-糖苷酶活性,然而两者的体外翻译抑制能力却具有明显差异,这暗示着两者的N-糖苷酶活性也存在差异.为了探究造成这一差异的结构基础,本研究使用trRosetta对两种蛋白进行了三级结构的预测,通过P... 详细信息

麻疯树核糖体失活蛋白Curcin和Curcin C均具N-糖苷酶活性,然而两者的体外翻译抑制能力却具有明显差异,这暗示着两者的N-糖苷酶活性也存在差异.为了探究造成这一差异的结构基础,本研究使用trRosetta对两种蛋白进行了三级结构的预测,通过PROCHECK和Qmean对预测得到的三级结构模型进行了质量评估,利用Chem3D对小分子配体腺嘌呤和腺苷进行了结构优化,借助UCSF Chimera对Curcin及Curcin C活性位点的氨基酸组成进行了预测.最终使用分子对接软件AutoDock将预测得到的模型与小分子腺嘌呤及腺苷进行分子对接.对接结果显示,两种蛋白与腺嘌呤的相互作用模式具有较高的相似性,但Curcin的关键氨基酸Arg并未参与到与配体的相互作用.此外Curcin C与腺嘌呤和腺苷之间的结合能都低于Curcin,且其和腺苷与腺嘌呤之间结合能的差值也要高于Curcin.这一结果暗示着Curcin和Curcin C之间的活性差异与其活性位点处的结构特征有关,Curcin C中的关键氨基酸Arg与腺嘌呤及腺苷的结合位点更为靠近,从而导致Curcin C与底物之间的结合能更低,更有利于催化反应的进行.

关键词：麻疯树核糖体失活蛋白结构预测分子对接腺苷腺嘌呤

核糖体失活蛋白(α-MC)亚细胞定位及对TMV的抑制作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国农业科学 2017年第5期50卷 840-848页

作者：魏周玲彭浩然潘琪张永至蒲运丹吴根土青玲孙现超西南大学植物保护学院

【目的】克隆获得苦瓜α-MC、商陆PAP,在烟草中异源表达观察两个蛋白在细胞中的定位情况。研究α-MC对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的抑制作用及其引起的抗性防御反应。【方法】根据已报道的商陆抗病毒蛋白PAP基因全序列和... 详细信息

【目的】克隆获得苦瓜α-MC、商陆PAP,在烟草中异源表达观察两个蛋白在细胞中的定位情况。研究α-MC对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的抑制作用及其引起的抗性防御反应。【方法】根据已报道的商陆抗病毒蛋白PAP基因全序列和苦瓜素基因全序列,设计并合成扩增PAP和α-MC基因全长引物,通过RT-PCR及基因克隆方法,从苦瓜和商陆春叶克隆得到苦瓜α-MC、商陆PAP;用Wolf PSORT预测蛋白定位,将苦瓜α-MC、商陆PAP分别融合在GFP和Ds Red2的N端,构建融合蛋白表达载体,采用GFP和Ds Red2标记进行亚细胞定位,验证预测结果;通过农杆菌介导在本氏烟中瞬时表达α-MC,再接种烟草花叶病毒,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分别检测病毒在接种叶片的蛋白积累量和RNA表达量,分析瞬时表达α-MC的抗病毒效果。利用q RT-PCR分析植物防卫相关基因NPR1、PR1、PR2的表达,探究其抗病毒机理。【结果】克隆得到基因α-MC和PAP全长,分别为861和939 bp。Wolf PSORT预测显示α-MC和PAP主要定位于细胞质膜上。共聚焦荧光显微镜下观察发现,分别用GFP和Ds Red2标记的α-MC和PAP均定位在本氏烟叶片表皮细胞质膜上,与Wolf PSORT预测的α-MC和PAP定位结果相一致。异源表达的PAP对植物细胞毒性作用强,导致表达部位细胞坏死,异源表达α-MC的植物细胞无明显毒性,表达部位细胞完整。在本氏烟中异源表达α-MC后,再接种TMV-GFP,在紫外灯下观察发现α-MC处理后的本氏烟在接种TMV-GFP 48 h后没有出现绿色荧光,而对照组出现荧光。72 h后处理组出现零星荧光,但对照组的绿色荧光开始扩散,连续观察,处理组几乎没有变化,接种TMV-GFP 6 d后,发现处理组的绿色荧光几乎没有扩大的趋势,而对照组的绿色荧光已扩散至心叶;ELISA检测表明,在接种TMV-GFP 6 d后的叶片中,对照组与健康植物的OD492比值几乎已达到处理组的10倍以上;q RT-PCR检测TMV RNA的含量,结果显示对照组TMV RNA表达量是处理组的149倍左右,表明α-MC对TMV复制和移动均有明显抑制;q RT-PCR结果分析显示,NPR1在只注射TMV、单独表达α-MC以及表达α-MC后注射TMV的本氏烟中均被诱导表达,但后者的表达量是前两个处理的约2.5倍左右,在只接种α-MC和表达α-MC后注射TMV的本氏烟中均检测到PR1、PR2,但后者的表达量显著高出前者5—7倍,表明异源表达α-MC可诱导植物中防卫相关基因NPR1、PR1、PR2的表达,从而引起更强的防御反应。【结论】异源表达α-MC显著抑制TMV,能够激活植物防卫反应,且对植物细胞无明显毒性。研究结果为利用异源表达α-MC方法开发控制植物病毒新产品提供了参考依据。

关键词：核糖体失活蛋白 α-MC 烟草花叶病毒异源表达亚细胞定位防卫相关基因

苦瓜核糖体失活蛋白MAP30抗肝癌作用机制初探

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

苦瓜核糖体失活蛋白MAP30抗肝癌作用机制初探

作者：周怡萍成都医学院

学位级别：硕士

研究背景与目的:肝癌作为全球最致命的疾病之一,在中国尤其突出。传统抗癌药物如阿霉素、顺铂等,随着用药时间的延长,其抗癌作用效果越不明显,很难达到预期治疗效果。因此,寻找针对肝癌的替代抗癌药物需求显得十分紧迫。苦瓜抗艾滋蛋白(... 详细信息

研究背景与目的:肝癌作为全球最致命的疾病之一,在中国尤其突出。传统抗癌药物如阿霉素、顺铂等,随着用药时间的延长,其抗癌作用效果越不明显,很难达到预期治疗效果。因此,寻找针对肝癌的替代抗癌药物需求显得十分紧迫。苦瓜抗艾滋蛋白(MAP30,Momordica anti-HIV-1 Protein of 30 k Da)是从新鲜苦瓜籽仁中提取出的一种核糖体失活蛋白(Ribosome Inactivating Proteins,RIPs),具有抗肿瘤、抗病毒、抗细菌等多种生物学功能。在20世纪90年代由美国科学家Sylvia Lee-Huang et al.首次发现并报道其具有N-糖苷酶活性,并抑制蛋白质的生物合成。以往的研究主要集中在MAP30的结构分析和抗病毒活性方面,对其抗肿瘤作用效果的研究相对较少。本文作者在先前研究工作基础上,将几种纯化方法和层析技术有机结合,成功地从苦瓜籽中获得了符合实验要求的抗肿瘤蛋白MAP30,同时对该蛋白引起的细胞凋亡及相关凋亡信号通路和抗肝癌作用效果进行了初步探讨。所取得一些研究结果可为该蛋白作为潜在的抗肿瘤药物奠定了一定的理论和实验基础。材料与方法:一、MAP30的制备和鉴定以新鲜成熟的苦瓜籽为原料,根据MAP30的理化特征及相关文献报道资料,我们主要分别采用p H选择性变性沉淀、硫酸铵分级分离、离子交换层析、分子筛层析和疏水相互作用层析或SP-Sepharose离子交换层析与透析、超滤等方法有机结合来分离和纯化目标蛋白MAP30。通过酸性PAGE、SDS-PAGE、IEF、RP-HPLC、蛋白质氨基酸测序和MALDI-TOF/MS等方法对MAP30进行了鉴定。二、体外抗肝癌活性(1)不同浓度的MAP30(0.012,0.06,0.3,1.5 mg/mL)针对五种肝癌细胞株(Hep G2,MHCC-97H,MHCC-97L,HCC-LM3,SK-Hep-1),分别处理不同的时间(24 h,48 h,72 h),采用CCK-8试剂和细胞克隆形成实验评估肝癌细胞的增长抑制情况。(2)MAP30处理的细胞,经PI染料染色检测肝癌细胞周期。(3)MAP30处理的细胞通过倒置显微镜观察细胞生长状况、生长密度、细胞间隙等;细胞切片通过电镜观察用药后细胞器的变化情况。(4)流式细胞检测凋亡率,同时应用蛋白免疫印迹技术检测细胞内凋亡标志蛋白的激活情况。三、MAP30诱导肝癌细胞SK-Hep-1发生涉及线粒体的凋亡(1)DCFH-DA探针法检测MAP30处理后的细胞内ROS水平变化情况;(2)MAP30处理的细胞后线粒体膜电位的变化用JC-1染料检测;(3)蛋白免疫印迹检测细胞内线粒体凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,细胞色素C(Cytochrome c)表达情况。结果:1.通过粗提,酸化,硫酸铵分级沉淀,离子交换层析和分子筛层析等工序,从100g苦瓜籽中提取到63 mg MAP30,该纯化的MAP30在还原或非还原条件下,SDS-PAGE显示单一蛋白着色带,对应的分子大小约为30k Da,经MALDI-TOF/MS和N-末端氨基酸测序确定其为MAP30蛋白。2.体外实验研究表明,MAP30具有抗肝癌活性。用不同浓度的MAP30(0.012,0.06,0.3,1.5 mg/mL)处理不同肝癌细胞株(Hep G2,MHCC-97H,MHCC-97L,HCC-LM3,SK-Hep-1),均表现出显著抑制细胞生长的作用,尤其是HCC-LM3与SK-Hep-1细胞株,呈现明显的时间-剂量依赖性。细胞周期检测发现MAP30可以将Hep G2,MHCC-97H,HCC-LM3,SK-Hep-1阻滞在G0/G1期。3.通过电镜发现,MAP30可以使得HCC-LM3细胞发生凋亡。Annexin VFITC/PI双染色法和蛋白免疫印迹检测发现MAP30可以诱导SK-Hep-1和HCCLM3细胞发生凋亡,且随着用药剂量越大其凋亡率也越高,表现为凋亡蛋白Caspase-3,PARP1激活及Cleaved-Caspase-9明显上调。4.肝癌细胞株SK-Hep-1经MAP30处理细胞后,用DCFH-DA探针检测到细胞内ROS水平的增高,线粒体膜电位的降低(JC-1染料法),以及细胞内Bcl-2蛋白表达的下调。所有这些结果证明MAP30可以诱导肝癌细胞SK-Hep-1线粒体的凋亡。结论:改良后的MAP30分离纯化步骤得到简化,节约时间的同时也保证了MAP30的纯度。体外抗肿瘤实验表明其可以抑制Hep G2,MHCC-97H,MHCC-97L,HCCLM3,SK-Hep-1肝癌细胞株的增殖、诱导Hep G2,MHCC-97H,HCC-LM3,SKHep-1细胞G0/G1周期阻滞、增加细胞内ROS水平并促进涉及线粒体的细胞凋亡。所有结果表明,这种

关键词：核糖体失活蛋白 MAP30 抗肿瘤活性肝癌凋亡

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

核糖体失活蛋白研究进展

植物学通报 2005年第4期22卷 456-462页

作者：李洪艳王关林李建国李红陈陆琴辽宁师范大学生命科学学院大连116029 大连高新技术产业园区大连116021

核糖体失活蛋白是一类毒蛋白,主要存在于植物当中,在真菌和细菌中也有发现。其共同特点是具有N-糖苷酶活性,能水解生物核糖体大亚基rRNA颈环结构上特定位点的腺嘌呤,使核糖体失活,从而抑制了蛋白质合成。本文对核糖体失活蛋白的主要性... 详细信息

核糖体失活蛋白是一类毒蛋白,主要存在于植物当中,在真菌和细菌中也有发现。其共同特点是具有N-糖苷酶活性,能水解生物核糖体大亚基rRNA颈环结构上特定位点的腺嘌呤,使核糖体失活,从而抑制了蛋白质合成。本文对核糖体失活蛋白的主要性质、应用以及国内外有关这类蛋白的研究进展加以概述。

关键词：核糖体失活蛋白 N-糖苷酶蛋白合成研究进展蛋白质合成 rRNA 毒蛋白腺嘌呤定位点环结构

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

核糖体失活蛋白抗HIV-1作用的研究进展

Zoological Research 2006年第5期27卷 541-548页

作者：王建华欧阳东云王媛媛郑永唐中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室分子免疫药理学实验室

核糖体失活蛋白(RIPs)抗HIV-1活性研究已有十几年的历史。RIPs类化合物代表了抗HIV/AIDS天然产物或先导化合物发展的一个重要方向。本文从介绍RIPs的酶活性及其抗HIV-1活性入手,对RIPs抗HIV-1的可能机制,从与RIPs酶活性的关系、诱导HIV-... 详细信息

核糖体失活蛋白(RIPs)抗HIV-1活性研究已有十几年的历史。RIPs类化合物代表了抗HIV/AIDS天然产物或先导化合物发展的一个重要方向。本文从介绍RIPs的酶活性及其抗HIV-1活性入手,对RIPs抗HIV-1的可能机制,从与RIPs酶活性的关系、诱导HIV-1感染细胞的凋亡及相应的信号转导、诱发活性氧的产生,以及对HIV-1整合酶的抑制作用等几个方面做了较详尽的阐述,并对RIPs的结构修饰和抗HIV-1构效关系进行了综述。对RIPs类化合物在抗病毒领域进行深入而系统地研究,能拓宽其在抗HIV/AIDS临床上的进一步应用。

关键词：核糖体失活蛋白天花粉蛋白 RNA—N糖苷酶抗病毒机制 HIV-1