猪德尔塔冠状病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作     者：辛佳亮 汪伟 杜倩 韩知晓 闭璟珊 曹亮 孙文超 方志超 郑敏 XIN Jia-liang;WANG Wei;DU Qian;HAN Zhi-xiao;BI Jing-shan;CAO Liang;SUN Wen-chao;FANG Zhi-chao;ZHENG Min

作者机构：广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西壮族自治区动物疫病预防控制中心广西南宁530000 温州大学病毒学研究所浙江温州325035 军事科学院军事兽医研究所吉林长春130122 广西扬翔股份有限公司广西贵港537100 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2019年第49卷第7期

页      面：834-840页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：广西区自然科学基金项目(2012GXNSFAA053073) 浙江省自然科学基金青年基金项目(LQ19C180001) 

主　　题：猪德尔塔病毒 SYBRGreenⅠ 荧光定量PCR 

摘      要：为建立猪德尔塔病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)快速灵敏的诊断方法,采用RT-PCR方法扩增猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)M基因,将M基因克隆到载体pEASY-Blunt Cloning Kit,以构建出的重组质粒作为标准阳性质粒,并以此为模板建立PDCoVM基因的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,并对该方法进行敏感性、特异性和重复性等验证。结果,建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的Ct值与标准品模板在6.57×10^8~6.57×10^1copies/L范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-4.215;该方法特异性强,对PEDV和TGEV猪常见病原检测均无特异性扩增;可重复性良好,组内和组间变异系数均小于2%;灵敏度可达6.57×10^1copies/L;对临床样品的检测,本研究建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的阳性检出率为5.0%。上述结果表明,本研究成功建立了检测PDCoV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,可实现对PDCoV的快速灵敏诊断。