艰难梭菌二元毒素B的克隆及其免疫原性分析

作     者：黄颖凤 林雪霏 黄欢欢 邓颖珊 吴爱武 HUANG Ying-feng;LIN Xue-fei;HUANG Huan-huan;DENG Ying-shan;WU Ai-wu

作者机构：广州医科大学金域检验学院，广东 广州510182 

出 版 物：《热带医学杂志》 (Journal of Tropical Medicine)

年 卷 期：2019年第19卷第5期

页      面：568-572页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：广州市科技计划项目(201510010241) 

主　　题：艰难梭菌 二元毒素 克隆 免疫原性 

摘      要：目的将艰难梭菌二元毒素B(cdtB)克隆到pET-28b载体,探索重组His-CdtB蛋白可溶性表达的最佳条件并纯化相应蛋白,分析其免疫原性。方法为了分析艰难梭菌二元毒素B的免疫原性,先以艰难梭菌标准菌株ATCC BAA-1870为模板,PCR扩增cdtB全长基因序列,克隆到质粒pET-28b,转入*** BL21(DE3)感受态细胞以构建pET-28b-cdtB的原核表达载体,诱导***-pET-28b-cdtB大量表达可溶性重组His-CdtB蛋白并利用镍柱亲和层析法纯化,纯化后的His-CdtB蛋白免疫Balb/c小鼠,分析小鼠血清抗体抗CdtB滴度。结果成功构建了pET-28bcdtB原核表达载体,目的蛋白为可溶性表达的最近诱导条件是培养温度为25℃、IPTG浓度为1.5 mmol/L、160 r/min振荡增菌12 h,最佳纯化条件为20 mmol/L的咪唑洗脱杂蛋白后用200 mmol/L的咪唑洗脱目的蛋白,纯化后的HisCdtB蛋白经质谱鉴定成功,该蛋白免疫Balb/c小鼠后产生的抗CdtB抗体滴度达到1∶105。结论纯化后的HisCdtB重组蛋白免疫Balb/c小鼠后产生了高效价抗CdtB抗体,说明其具有免疫原性,为今后进一步进行二元毒素B的诊断及疫苗等研究奠定了实验基础。