检索结果-南通市图书馆

大口黑鲈糖稳态基因的克隆、分子特征及其营养调控的分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国水产科学 2023年第5期30卷 604-616页

作者：雷彩霞宋含茹付豪谢玉净李胜杰中国水产科学研究院珠江水产研究所湖州师范学院生命科学学院

为进一步研究大口黑鲈(Micropterussalmoides)糖稳态调控特性,本研究克隆了糖稳态调控基因gp1、gp2、pepck1、pepck2、hk、pfk和g6p,分别编码878、842、635、624、918、780和338个氨基酸序列,并进行了进化树、空间分布和禁食对其基因表... 详细信息

为进一步研究大口黑鲈(Micropterussalmoides)糖稳态调控特性,本研究克隆了糖稳态调控基因gp1、gp2、pepck1、pepck2、hk、pfk和g6p,分别编码878、842、635、624、918、780和338个氨基酸序列,并进行了进化树、空间分布和禁食对其基因表达影响的分析。多序列比对和进化树分析显示,这些基因与其他脊椎动物的同源序列具有较高相似性。组织表达分析结果显示这些基因主要集中分布于肝脏和肌肉,但呈现出组织表达差异性。其中,gp1在肌肉表达量最高,肝脏次之,在脾脏表达量最低。gp2在肌肉中的mRNA水平也最高,在心脏、肝脏表达也较为丰富。pepck1主要分布在肝脏和肠,在脑、脾脏、肾脏和脂肪中分布较少。pepck2在肝脏和脑中高表达,而在脾脏和鳃中表达量最低。对于hk,其在肝脏、肌肉和心脏的mRNA水平显著高于其余组织。肝脏中g6p的表达也显著高于其余组织。除此之外,其在肌肉、肠和脂肪中分布也较为丰富。pfk的mRNA水平在肝脏和心脏最高,其次是肠和鳃。对实验大口黑鲈禁食后发现,肝脏gp2、pepck2和g6p的表达从禁食第6小时开始上调并持续到24h。而gp1、hk和pfK的表达则随禁食延长先上升后下降,并在第6小时时达到峰值。然而,肝脏pepck1基因在整个禁食阶段均趋于稳定。肌肉组织中, gp1的转录随禁食延长而持续增强,至24 h达到最高值。gp2和g6p表达均在禁食第12小时出现明显升高,并在24 h达到峰值。pepck1在禁食第0小时的mRNA水平最低,在12和24 h时最高。禁食第24小时pepck2的表达显著最高。hk和pfk则随禁食延长呈现先升后降的模式,其最高和最低值分别出现在禁食第6和第0小时。综上,本研究获得了糖稳态调控关键基因的完整编码序列,并研究了其在应对饥饿状态时的不同分子应答,研究结果将为后期进一步研究大口黑鲈糖稳态调控提供重要基础资料。

关键词：大口黑鲈糖稳态基因克隆表达分析营养调控

十字花科植物芥酸合成基因FAE1-closest的克隆及功能分析

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

植物资源与环境学报 2023年第3期32卷 45-51页

作者：王月薛佳宇周广灿杭悦宇孙小芹江苏省中国科学院植物研究所(南京中山植物园) 江苏省植物资源研究与利用重点实验室江苏南京210014 南京农业大学江苏南京210095 菏泽学院山东菏泽274015

对十字花科(Brassicaceae)中具代表性的高、低芥酸植物的FAE1-closest基因进行扩增,并对其编码的氨基酸序列进行序列比对;基于FAE1-closest氨基酸序列构建遗传关系树;将具有代表性的FAE1-closest基因在酵母中进行转化,比较不同植物来源... 详细信息

对十字花科(Brassicaceae)中具代表性的高、低芥酸植物的FAE1-closest基因进行扩增,并对其编码的氨基酸序列进行序列比对;基于FAE1-closest氨基酸序列构建遗传关系树;将具有代表性的FAE1-closest基因在酵母中进行转化,比较不同植物来源的该基因调控芥酸合成能力的差异。结果显示:十字花科高、低芥酸植物FAE1-closest基因编码的氨基酸序列主要有A和B 2种类型,其对应的编码区全长分别约为1461和1389 bp,且B类型的氨基酸序列仅出现在高芥酸植物中;比较氨基酸序列的变异位点发现,高、低芥酸植物中共存在150个变异位点,高芥酸植物中第320位的氨基酸为赖氨酸(K),低芥酸植物中该位点为苏氨酸(T)。遗传关系树显示:12种芥酸植物可聚为Ⅰ和Ⅱ2个分支,大部分高芥酸植物的FAE1-closest氨基酸序列聚在分支Ⅰ;高芥酸植物银扇草(Lunaria annua Linn.)以及低芥酸植物涩荠〔Malcolmia africana(Linn.)R.Br.〕、鸟头荠〔Euclidium syriacum(Linn.)R.Br.〕和四齿芥〔Tetracme quadricornis(Stephan)Bunge〕的FAE1-closest氨基酸序列聚在分支Ⅱ。酵母转化实验结果显示:蔓菁(Brassica rapa Linn.)和洋基芥(Brassica tournefortii Gouan)的FAE1-closest基因转酵母产物中检测到了芥酸,涩荠、鸟头荠、四齿芥和银扇草的FAE1-closest基因转酵母产物中均未检测到芥酸,说明只有部分十字花科植物的FAE1-closest基因与芥酸合成相关。综上所述,低芥酸植物来源的FAE1-closest基因均不能合成芥酸,部分高芥酸植物来源的FAE1-closest基因能合成芥酸,不同十字花科植物中的FAE1-closest基因在芥酸合成过程中发挥作用的程度不同;FAE1-closest基因是否为芥酸合成过程中的主效基因,有待进一步验证。

关键词：十字花科芥酸 FAE1-closest基因克隆功能分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

南方水产科学 2023年第6期19卷 150-157页

作者：桂彬彬曲梦张蔚然李明玉江艳华姚琳王联珠中国水产科学研究院黄海水产研究所/农业农村部水产品质量安全检测与评价重点实验室山东青岛266071 大连工业大学食品学院辽宁大连116034 上海海洋大学食品学院上海201306 中国海洋大学食品科学与工程学院山东青岛266003

Lewis抗原被认为是诺如病毒特异性结合受体,作为诺如病毒传播载体,牡蛎中也存在着类Lewis抗原,但牡蛎合成这种碳水化合物的途径尚未阐明。为解析牡蛎中诺如病毒受体类Lewis抗原的合成路径,利用cDNA末端快速扩增(Rapid amplification of ... 详细信息

Lewis抗原被认为是诺如病毒特异性结合受体,作为诺如病毒传播载体,牡蛎中也存在着类Lewis抗原,但牡蛎合成这种碳水化合物的途径尚未阐明。为解析牡蛎中诺如病毒受体类Lewis抗原的合成路径,利用cDNA末端快速扩增(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆得到太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)的CgFUT5基因全序列并进行生物信息学分析,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)分析其在5种组织中的表达情况。构建原核表达质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli)实现异源表达,并通过免疫印迹法(Western blot)鉴定免疫原性。克隆得到了具有1173 bp开放阅读区的CgFUT5基因cDNA序列,系统发育树显示CgFUT5基因与多个物种具有合成Lewis抗原功能的岩藻糖基转移酶基因遗传学关系较近。重组CgFUT5蛋白可在大肠杆菌中过量表达,且表达的重组CgFUT5蛋白与抗人FUT5抗体及抗6×His标签抗体均能特异性结合。研究发现CgFUT5基因在牡蛎鳃组织中大量表达,CgFUT5蛋白与人FUT5蛋白具有相似的免疫原性,推测牡蛎中存在着类Lewis抗原的合成通路,并且调控牡蛎类Lewis抗原合成的基因还具有组织表达差异性。

关键词：太平洋牡蛎 CgFUT5基因克隆组织表达原核表达

高羊茅生物钟基因FaLHY的克隆及功能分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

植物生理学报 2023年第8期59卷 1596-1606页

作者：陈莹王茜陈锡王子苑杨春燕王小利贵州省农业科学院贵州省草业研究所贵阳550006

生物钟可以促进植物的生长和对环境的适应性,并为植物在黎明和黄昏进行光合作用做好准备。为研究生物钟基因LHY在高羊茅中的昼夜表达模式,采用cDNA末端快速扩增技术从高羊茅叶片中克隆LHY基因,命名为FaLHY。结果表明,FaLHY全长为2558 bp... 详细信息

生物钟可以促进植物的生长和对环境的适应性,并为植物在黎明和黄昏进行光合作用做好准备。为研究生物钟基因LHY在高羊茅中的昼夜表达模式,采用cDNA末端快速扩增技术从高羊茅叶片中克隆LHY基因,命名为FaLHY。结果表明,FaLHY全长为2558 bp,含2145 bp的开放阅读框,共编码714个氨基酸,分子量约为77.59 kDa,pI为6.04,定位于细胞质,经系统进化树分析,FaLHY蛋白与禾本科粳稻的LHY蛋白亲缘关系最近。荧光定量PCR表明,FaLHY在长日照与短日照均有明显的昼夜震荡节律,即使FaLHY基因在昼夜颠倒与连续光照/黑暗条件下,短期内还是能维持昼夜震荡节律。构建过表达载体P35S::FaLHY转入拟南芥,结果显示FaLHY基因过表达会导致拟南芥晚花,且在一定程度上影响着拟南芥生物钟基因CCA1与开花基因FT节律振幅的变化,对光周期基因CO表达节律影响不大。

关键词： FaLHY 克隆生物钟昼夜节律高羊茅

荒漠草地白刺粗角叶甲非典型气味受体基因克隆及组织表达谱

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

草业学报 2024年第5期33卷 204-215页

作者：席驳鑫崔晓宁尚素琴胡桂馨王彦李昌宁彭斌史薛强甘肃农业大学植物保护学院甘肃兰州730070 甘肃农业大学草业学院草业生态系统教育部重点实验室甘肃兰州730070

白刺粗角叶甲是我国西北荒漠草原危害防风固沙先锋植物白刺的重要害虫之一,开发和利用基于性信息素或寄主挥发物介导的昆虫化学通讯手段是防治该害虫的新途径。本研究以白刺粗角叶甲为对象,通过分子克隆技术获得白刺粗角叶甲成虫触角的... 详细信息

白刺粗角叶甲是我国西北荒漠草原危害防风固沙先锋植物白刺的重要害虫之一,开发和利用基于性信息素或寄主挥发物介导的昆虫化学通讯手段是防治该害虫的新途径。本研究以白刺粗角叶甲为对象,通过分子克隆技术获得白刺粗角叶甲成虫触角的非典型气味受体(atypical odorant receptor co-receptor,Orco)基因序列;利用同源建模方法预测蛋白三级结构,并构建系统发育树;借助荧光定量PCR技术检测DrybOrco基因在叶甲成虫各组织中的表达量差异。结果显示:克隆获得的白刺粗角叶甲非典型气味受体基因DrybOrco的cDNA全长为1918 bp,其中开放阅读框为1440 bp,编码479个氨基酸,蛋白分子量为53.94 kD,含有7个跨膜结构域,为疏水性膜蛋白。系统发育表明,Orco基因在6目68种昆虫间保守性较高(相似度大于68%),聚类分为3个分支,相同目的昆虫聚集到同一支。白刺粗角叶甲与其他鞘翅目昆虫聚为一支,其中与玉米根萤叶甲的Orco基因亲缘关系最近,核酸相似度高达92.28%。荧光定量表明,白刺粗角叶甲DrybOrco基因在成虫触角中特异性表达,且雄虫显著高于雌虫,表达量比值为2.27;此外,该基因在雄虫足和雌虫翅中少量表达,其他组织中几乎不表达。本研究明确了白刺粗角叶甲非典型气味受体基因DrybOrco的序列特征、蛋白结构和组织表达情况,这为阐明DrybOrco在该害虫化学通讯过程中的生理功能,以及探究白刺粗角叶甲寄主专化的嗅觉分子机制研究提供重要依据。

关键词：白刺粗角叶甲嗅觉非典型气味受体克隆组织表达

柑橘AOS1-2的克隆及其响应溃疡病菌侵染的表达分析

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

园艺学报 2023年第6期50卷 1355-1367页

作者：张乐欢邹昌玉王兆昊杨雯邹修平何永睿陈善春龙琴西南大学/中国农业科学院柑桔研究所国家柑桔工程技术研究中心重庆400712

对柑橘中茉莉酸(Jasmonic acid,JA)生物合成途径中的关键限速酶丙二烯氧化物合酶AOS家族基因进行注释,确定其受溃疡病菌Xanthomonas citri subsp. citri(Xcc)诱导的表达模式。从甜橙数据库中共注释出3个AOS家族成员,其中CsAOS1-2对溃疡... 详细信息

对柑橘中茉莉酸(Jasmonic acid,JA)生物合成途径中的关键限速酶丙二烯氧化物合酶AOS家族基因进行注释,确定其受溃疡病菌Xanthomonas citri subsp. citri(Xcc)诱导的表达模式。从甜橙数据库中共注释出3个AOS家族成员,其中CsAOS1-2对溃疡病菌响应最强烈;CsAOS1-2在‘晚锦橙’(甜橙,易感溃疡病)和‘金弹’(金柑,抗溃疡病)中均受病原菌诱导,但在‘晚锦橙’中表达量上调幅度远高于金弹;CsAOS1-2全长2 656 bp,开放阅读框1 599 bp,编码532个氨基酸,分子量为59 499.81,为非分泌性蛋白,其349~510 aa为典型的P450功能域;Cs AOS1-2的表达无组织特异性;‘晚锦橙’和‘金弹’的AOS1-2启动子均含有参与植物激素和逆境应答的顺式作用元件,但在数量和类型上存在差异;烟草瞬时转化亚细胞定位分析显示CsAOS1-2定位在叶绿体中。CsAOS1-2强烈响应柑橘溃疡病菌的侵染,推测其与柑橘溃疡病敏感性具有密切的关系。

关键词：柑橘溃疡病茉莉酸限速酶 AOS 克隆表达

温郁金萜类合成酶基因CwTPS05、CwTPS10的克隆与表达分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中草药 2022年第2期53卷 538-543页

作者：丁贤华张丽萍费璇赵琪任仙樱吴志刚姜程曦温州医科大学药学院浙江温州325035 安徽江南生物技术研究中心安徽池州247100 温州大学生命科学研究院浙江温州325035 温州莪金医药有限公司浙江乐清325600

目的克隆温郁金Curcuma wenyujin萜类合成酶基因(CwTPS05 CwTPS10)并进行生物信息学及表达分析,为今后利用代谢工程生产温郁金萜类成分提供依据。方法根据前期温郁金转录组测序数据,利用PCR技术从根茎cDNA文库中克隆CwTPS05和CwTPS10序... 详细信息

目的克隆温郁金Curcuma wenyujin萜类合成酶基因(CwTPS05 CwTPS10)并进行生物信息学及表达分析,为今后利用代谢工程生产温郁金萜类成分提供依据。方法根据前期温郁金转录组测序数据,利用PCR技术从根茎cDNA文库中克隆CwTPS05和CwTPS10序列;生物信息学分析其核苷酸和氨基酸序列特征;qRT-PCR检测基因在不同组织中的表达水平。结果克隆获得CwTPS05 (GenBank登入号:MT814867)基因,开放阅读框全长1446 bp,编码481个氨基酸,预测相对分子质量为55 990;CwTPS10 (GenBank登入号:MT814863)基因,开放阅读框全长1494 bp,编码497个氨基酸,预测相对分子质量为58 550。CwTPS05和CwTPS10均属于酸性、非跨膜、无转运肽的亲水性蛋白。同源进化树分析表明,CwTPS05和CwTPS10基因被归类为植物萜类合成酶TPSa亚家族。qRT-PCR分析表明,CwTPS05在根茎中特异性表达,CwTPS10在根茎和块根中特异性表达。结论成功克隆获得温郁金CwTPS05和CwTPS10基因并进行生物信息分析,为研究温郁金萜类成分的生物合成途径提供参考。

关键词：温郁金萜类合成酶克隆生物信息学分析表达分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

近缘新对虾PCNA基因的克隆及表达分析

南方水产科学 2023年第4期19卷 58-67页

作者：张艳罗志平李运东杨其彬姜松陈创华黄建华杨丽诗陈旭江世贵周发林中国水产科学研究院南海水产研究所/农业农村部南海渔业资源开发利用重点实验室广东广州510300 珠海市现代农业发展中心广东珠海519075

增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)作为DNA聚合酶δ的辅助蛋白,在DNA复制过程中发挥重要作用。近缘新对虾(Metapenaeus affinis)卵巢发育过程中存在细胞增殖活动旺盛的阶段,但目前关于其卵巢发育的分子机制研... 详细信息

增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)作为DNA聚合酶δ的辅助蛋白,在DNA复制过程中发挥重要作用。近缘新对虾(Metapenaeus affinis)卵巢发育过程中存在细胞增殖活动旺盛的阶段,但目前关于其卵巢发育的分子机制研究较少。利用RACE (Rapid amplification of cDNA ends)技术获得近缘新对虾PCNA (MaPCNA)基因的cDNA序列全长,并通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)对其进行卵巢发育相关的表达分析。MaPCNA全长为1 144 bp,包含140 bp的5’非编码区,221 bp的3’非编码区,开放阅读框(ORF)为783 bp,编码260个氨基酸。MaPCNA蛋白的相对分子质量为28.82 kD,理论等电点为4.5。多重比对分析表明,PCNA氨基酸序列在甲壳动物中较为保守。组织表达结果显示,MaPCNA基因在检测的组织中均有表达,其中在卵巢中的表达量最为显著(P<0.05)。在不同发育阶段的卵巢中,MaPCNA基因的表达出现变化(P<0.05),从Ⅰ期开始逐渐上升,到Ⅲ期表达量最高,之后显著降低并趋于平稳。MaPCNA基因在幼体发育不同时期的表达呈现出一定的规律性趋势,在受精卵时期的表达量最高,之后呈下降趋势,从无节幼体Ⅵ期开始表达平稳。研究结果提示PCNA基因可能在近缘新对虾的卵巢发育过程中发挥重要作用。

关键词：近缘新对虾 PCNA 克隆基因表达

三角褐指藻岩藻黄素合成关键酶PtHMGR基因的克隆与诱导表达调控研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国药学杂志 2023年第3期58卷 222-230页

作者：王博龚一富叶奔李荣辉舒明雨贾泽茗王何瑜宁波大学海洋学院浙江省海洋生物工程重点实验室浙江宁波315832 宁波大学食品与药学学院浙江宁波315832

目的研究茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)、硫酸铈铵(ammonium cerous sulfate,ACS)、花生四烯酸(arachidonic acid,AA)、光和促进剂(photosynthetic induction factor,PIF)、光合抑制剂[3-(3,4-dichlorophenyl)-1,1-dimethylurea,DCMU]和不同光质对三角褐指藻3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutarate monoacyl-CoA reductase,HMGR)基因PtHMGR表达的影响,研究不同外源因素处理下PtHMGR基因表达与岩藻黄素含量之间的关系。方法通过转录组测序获得PtHMGR基因cDNA序列,并对其进行生物信息学分析,有机溶剂提取法测定MeJA、ACS、AA、PIF、DCMU和不同光质处理下三角褐指藻岩藻黄素含量,荧光定量多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测PtHMGR基因表达。结果PtHMGR基因全长2161 bp,其ORF长1914 bp,编码637个氨基酸。PtHMGR蛋白分别含有2个烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADP)和3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A(3-hydroxy-3-methyl glutaryl coenzyme A reductase,HMG-CoA)结合基序,催化结构域包含L-domain、S-domain和N-domain,N端存在3个跨膜螺旋区。系统进化树分析结果表明,动物和植物HMGR明显分为2支,三角褐指藻与假微型海莲藻(Thalassiosira pseudonana)HMGR蛋白的亲缘关系最近,同处于水生植物一支。荧光定量PCR分析结果表明,12.5 mg·L^(-1)AA、0.4 mg·L^(-1)ACS、0.05μg·L^(-1)PIF、0.4 mg·L^(-1)DCMU和紫光处理下PtHMGR基因表达水平最高。相关性分析结果表明,ACS和不同光质处理下岩藻黄素含量与PtHMGR基因表达呈正相关。结论PtHMGR基因是参与ACS和不同光质调控三角褐指藻岩藻黄素合成的关键基因之一,PtHMGR与三角褐指藻岩藻黄素的合成与积累具有密切关系。

关键词：三角褐指藻岩藻黄素 3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶克隆诱导表达