猪流行性腹泻病毒Nsp5基因的原核表达及生物信息学分析

作     者：刘正奎 吴瑗 陈琳 王磊 牟泓烨 祝徐航 王晓杜 LIU Zhengkui;WU Yuan;CHEN Lin;WANG Lei;MU Hongye;ZHU Xuhang;WANG Xiaodu

作者机构：浙江农林大学动物科技学院浙江杭州311300 金华职业技术学院农业生物工程学院浙江金华321007 

出 版 物：《浙江农业学报》 (Acta Agriculturae Zhejiangensis)

年 卷 期：2019年第31卷第4期

页      面：532-538页

核心收录：

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：浙江省科技重点研发计划(2018C02028) 浙江省自然科学基金(LY16C180001) 金华市重点研发计划(2016-2-013 2018-2-004) 

主　　题：猪流行性腹泻病毒 Nsp5 基因 原核表达 生物信息学分析 

摘      要：旨在对猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)Nsp5基因进行原核表达,利用生物信息学软件,预测其编码蛋白的结构和功能,为了解PEDV致病机理奠定基础。本研究克隆PEDV/LY/2014/04毒株的Nsp5基因,亚克隆进pET-28a(+)原核表达载体,PCR和酶切验证重组质粒的构建,重组质粒pET-28a(+)-Nsp5转入*** BL21(DE3)中,SDS-PAGE检测Nsp5的表达和His band Ni+纯化情况,Vector NTI Advance等软件对Nsp5蛋白氨基酸组成、抗原表位、二级和三级结构进行预测和分析。结果表明,成功克隆并构建了重组质粒pET-28a(+)-Nsp5,表达重组蛋白大小约22 ku,且主要以包涵体形式存在,His band Ni+纯化后获得高纯度重组蛋白。Nsp5蛋白是由196个氨基酸残基组成的多肽,其分子质量的理论值为21 820.07 u,理论等电点(pI)为8.734,略偏碱;二级结构骨架中α-螺旋(h)占55.61%,β-折叠(t)占7.65%,无规则卷曲(c)占20.92%,延伸链(e)占15.82%;Nsp5蛋白质的三级结构中,中间段以α-螺旋为主作为骨架,C端多个复杂二级结构构成该蛋白的酶活性中心;B细胞抗原表位的预测,表明有15个潜在的B细胞优势表位。本研究为猪流行性腹泻病毒Nsp5蛋白质的生物学功能相关研究提供数据支持。