单克隆抗体亲和层析纯化日本脑炎病毒V_3(E)糖蛋白的研究

作     者：马文煜 于碧云 于文彬 黄庆生 姜绍谆 汪美先 

作者机构：第四军医大学微生物学教研室 

出 版 物：《单克隆抗体通讯》 (Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：1989年第5卷第2期

页      面：1-4页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：中国科学院科学基金 

主　　题：糖蛋白 日本脑炎病毒 亲和层析纯化 单克隆抗体 SDS-PAGE Triton 去氧胆酸钠 超声粉碎 活性影响 McAb HI抗体 柱纯化 HA 裂解剂 病毒原 生物学 洗脱剂 二乙胺 亲和力 mC3 回收率 收获量 比活性 蓝染色 T抗体 分子量 

摘      要：本文探讨了用JEV-V_3(E)McAb制备亲和层析柱纯化mg量V_3糖蛋白的方法。结果表明,超声粉碎法裂解病毒囊膜不影响HA活性,而化学裂解剂(NP_(40)、去氧胆酸钠、Tritonx-100)处理病毒原始材料,则导致HA活性的丧失;pH11.5,0.05M二乙胺洗脱剂对V_3的生物学活性影响较少;而3M KSCN对V_3的HA活性有明显影响;用亲和力适中的McAb 2F_2和mC_3亲和层析柱纯化V_3糖蛋白,其HA活性的回收率分别为30～40％及30～60％,蛋白收获量分别为0.33～1.26及0.21～0.66mg,相对HA比活性分别提高3～8倍及8～12倍;经SDS-PAGE考马斯亮蓝染色,显示一条主带,分子量相当于V_3糖蛋白;纯化的V_3糖蛋白可诱导小鼠产生HI抗体及NT抗体。