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九种核酸提取裂解剂对PCR扩增效率影响研究

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中国食品卫生杂志 2023年第6期35卷 843-848页

作者：刘娜王亚萍王学硕崔生辉中国食品药品检定研究院北京100050

目的探究6种化学试剂型和3种酶型菌体裂解剂在聚合酶链式反应(PCR)扩增体系中的最大允许终浓度和不同浓度IGEPAL CA-630裂解不同种属菌株的差异。方法配制6种化学试剂型(IGEPAL CA-630、CTAB、SDS、EDTA、异硫氰酸胍和NaOH)和3种酶型(... 详细信息

目的探究6种化学试剂型和3种酶型菌体裂解剂在聚合酶链式反应(PCR)扩增体系中的最大允许终浓度和不同浓度IGEPAL CA-630裂解不同种属菌株的差异。方法配制6种化学试剂型(IGEPAL CA-630、CTAB、SDS、EDTA、异硫氰酸胍和NaOH)和3种酶型(溶菌酶、溶葡球菌酶和蛋白酶K)及多个不同稀释度的裂解液,添加于荧光定量PCR体系中,分析比较Ct值差异。用IGEPAL CA-630溶液(浓度为1%和0.1%,TE为溶剂)、TE和去离子水分别裂解嗜热链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌,经荧光定量PCR扩增,比较Ct值的差异。结果在PCR体系中,IGEPALCA-630、CTAB、SDS、EDTA异硫氰酸胍和NaOH的最大允许终浓度分别为0.800‰、0.256‰、0.012 8‰、0.8 mmol/L、0.012 8 mol/L和0.64 mmol/L,溶菌酶、溶葡球菌酶和蛋白酶K的最大允许浓度分别为0.512、1.28和0.512μg/mL。IGEPAL CA-630裂解嗜热链球菌和金黄色葡萄球菌实验中,TE溶液、0.1%和1%IGEPAL CA-630的Ct值依次减小,TE溶液和去离子水的Ct值没有明显差异;去离子水、TE溶液、0.1%和1%IGEPAL CA-630裂解大肠埃希菌的Ct值均没有明显差异。结论通过探究,明确了上述9种常见裂解剂不影响PCR扩增的最大浓度,且适当提高IGEPAL CA-630浓度可以增强提取革兰氏阳性菌DNA作用。

关键词：聚合酶链式反应裂解剂化学试剂型酶型种属

流感亚单位疫苗裂解剂残留量检测及安全性试验

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中国生物制品学杂志 2008年第4期21卷 302-303页

作者：张艳戚凤春张雪梅赵大鹏范洪学吉林大学公共卫生学院长春130021 长春生物制品研究所长春130062

目的检测流感亚单位疫苗的裂解剂残留量，并观察其安全性。方法制备3批流感亚单位疫苗，采用比色法检测其裂解剂Tween-80和CTAB的残留量，通过动物实验观察其安全性。结果制备的3批疫苗样品，Tween-80的残留量平均在68．3-72．μg／ml... 详细信息

目的检测流感亚单位疫苗的裂解剂残留量，并观察其安全性。方法制备3批流感亚单位疫苗，采用比色法检测其裂解剂Tween-80和CTAB的残留量，通过动物实验观察其安全性。结果制备的3批疫苗样品，Tween-80的残留量平均在68．3-72．μg／ml之间，CTAB残留量平均在36．3-38．7μg／ml之间。在安全性试验中，豚鼠未出现过敏反应，小鼠和豚鼠未出现异常毒性反应。结论制备的流感亚单位疫苗的裂解剂残留量符合拟定规程要求，安全性良好。

关键词：流感病毒亚单位疫苗裂解剂安全性

晚期糖基化终末产物裂解剂对糖尿病大鼠心血管系统的保护作用

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中国老年学杂志 2012年第16期32卷 3477-3478页

作者：刘雪琴济源职业技术学院河南济源459000

目的分析晚期糖基化终末产物(AGEs)裂解剂C36对糖尿病(DM)大鼠心血管系统的保护作用。方法雄性Wistar大鼠60只,分为正常组、模型组和C36各剂量组(C1组、C2组、C3组和C4组)6组,对大鼠心功能指标进行比较。结果 C4组舒张压明显低于正常组... 详细信息

目的分析晚期糖基化终末产物(AGEs)裂解剂C36对糖尿病(DM)大鼠心血管系统的保护作用。方法雄性Wistar大鼠60只,分为正常组、模型组和C36各剂量组(C1组、C2组、C3组和C4组)6组,对大鼠心功能指标进行比较。结果 C4组舒张压明显低于正常组和模型组(P剂量组心率、心输出量明显低正常组(P剂量组总外周阻力指数明显低模型组(P剂量组系统动脉顺应性高于模型组(P剂量组心室、左心室及两侧肾脏脏体系数明显高于正常组(P裂解剂对DM大鼠心血管系统有良好的保护作用。

关键词：晚期糖基化终末化产物(AGEs) 裂解剂糖尿病

AGEs裂解剂对DM大鼠心血管系统保护作用研究

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AGEs裂解剂对DM大鼠心血管系统保护作用研究

作者：张冰中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

老龄人口的迅速增加以及糖尿病发病率的迅速攀升使老龄及糖尿病并发症的防治成为亟待解决问题。心血管系统功能紊乱是老龄人与糖尿病患者最为突出的并发症,是导致老龄人口死亡、糖尿病患者生存质量下降的最主要原因。因此发展具有针对... 详细信息

老龄人口的迅速增加以及糖尿病发病率的迅速攀升使老龄及糖尿病并发症的防治成为亟待解决问题。心血管系统功能紊乱是老龄人与糖尿病患者最为突出的并发症,是导致老龄人口死亡、糖尿病患者生存质量下降的最主要原因。因此发展具有针对性的治疗措施具有重要意义。晚期糖基化终产物(Advanced glycation endproducts, AGEs)是由葡萄糖及其它还原糖与蛋白质经过一系列非酶促反应形成的巨型交联物。AGEs交联结构在心血管组织的长命蛋白上的形成与积聚与老年和糖尿病患者心血管系统硬化,心血管组织对生物活性分子与外源性调节分子的敏感性下降密切相关。裂解AGEs交联结构是一种新型的、基于逆转心血管硬化的治疗策略。临床前和临床研究表明,AGEs裂解剂明确改善老年和糖尿病的心血管系统功能紊乱。然而,作为一种发展中的具有完全创新性思路和全新机制的药物,AGEs裂解剂的新作用、作用机制以及新型AGEs裂解药物还有待进一步研究。本研究的目的有两个,其一,对自主研发的新型AGEs裂解剂C36体内水解主要产物C36D2进行逆转糖尿病大鼠心血管系统硬化的作用及机制进行研究,确证C36D2是C36的体内活性形式,为C36体内的有效性提供实验依据。其二,探讨AGEs裂解剂通过改善心血管系统功能是否能够改善降压药物的敏感性以及可能的机制。第一部分工作主要以C36为对照,用经典AGEs裂解剂的评价方法对C36D2进行了实验研究。首先通过体外制备牛血清白蛋白(BSA)-AGEs-胶原的交联结构,结合酶联免疫吸附测定(ELISA)方法以及裂解糖尿病大鼠红细胞表面IgG(RBC-IgG)交联实验,对C36D2进行了体外裂解体内、外形成的AGEs的评价;其后,给予STZ诱导3个月病程的糖尿病大鼠3个剂量(9、18、36 mg/kg)的C36D2 4周,采用超声多普勒结合血流动力学检测技术,对大鼠收缩压、舒张压、心率、左室内压峰值及左室舒张末期压进行了测定,并计算心输出量、总外周阻力、系统顺应性及左室内压最大变化速率;同时,采用荧光检测法测定了主动脉、左心室心肌以及肾脏组织上AGEs含量,采用酸性条件下限制性胃蛋白酶消化实验测定尾胶原、左心室心肌胶原溶解性。结果表明,C36D2能够在体外裂解体内、外形成的AGEs交联结构,在体内显著提高糖尿病大鼠系统顺应性(7.92±1.11 vs. 5.55±0.94 10-3ml/mmHg),降低总外周阻力(77.0±19.6 vs. 109.87±19.0 ***/cm5),增加心输出量(84.9±13.6 vs. 60.3±7.9 ml/min);显著增加糖尿病大鼠左心室内压峰值( 170.65±8.94 vs. 153.49±20.05mmHg )和左室内压最大变化速率(12201.2±1872.2 vs. 9410.2±1294.2mmHg/s)(7762.8±1320.2 vs. 6684.2±1400.7 mmHg/s),降低左室舒张末期压(5.73±1.44 vs. 8.16±3.05mmHg),改善左室功能;并增加糖尿病大鼠尾胶原、左心室心肌胶原溶解性;显著减少糖尿病大鼠主动脉、左心室心肌以及肾脏的AGEs荧光含量。其药效强度均与阳性药ALT-711和C36相当,且作用机制与ALT-711和C36相同。因此,C36D2能够改善糖尿病大鼠心血管功能紊乱,其机制与裂解体内过度形成的AGEs交联结构相关;C36D2是新型AGEs裂解剂C36在体内的主要要的活性形式,也是一个新型的AGEs裂解剂。第二部分工作,首先采用慢性给予STZ诱导糖尿病大鼠1%NaCl饮水的方法,复制和建立了一种新型的糖尿病-高血压大鼠模型;在此模型建立的基础上,预灌胃给予AGEs裂解剂4周,采用乌氯合剂麻醉大鼠,颈总动脉插管监测血压,股静脉插管,从低至高浓度梯度给予硝苯地平,观察AGEs裂解剂对作用在血管平滑肌上的降压药的降压作用的影响。同时,对循环血液及肾组织中与高血压相关的一些生物活性因子的含量及基因表达进行了测定,并采用免疫组织化学的方法对肾脏中ET-1的表达进行了分析;此外,采用离体动脉环试验对AGEs裂解剂对血管及内皮细胞功能的影响进行评价。实验结果表明,给予AGEs裂解剂治疗的糖尿病-高血压大鼠对硝苯地平的降压反应明显强于对照组的糖尿病-高血压大鼠(ALT-711最大升高降压幅度达108%,C36D2达83.74%),并且其血浆NO含量明显升高(8.45±1.85,7.72±1.61 vs. 3.53±1.32μmol/L);主动脉前内皮素原基因的表达和肾脏血管紧张素原的基因表达显著降低,肾脏ET-1蛋白表达显著降低,但血浆中的AngⅡ、ET-1未表现出明显变化。此外,给予AGEs裂解剂的糖尿病大鼠胸主动脉

关键词：晚期糖基化产物裂解剂糖尿病高血压降压增敏作用

流感疫苗中裂解剂TritonN-101残余量的快速检测方法

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中国生物制品学杂志 2007年第9期20卷 691-692,696页

作者：张艳潘晓男任静天士力金纳技术天津有限公司天津300011

目的快速、准确地检测流感病毒裂解疫苗和亚单位疫苗中裂解剂Triton N-101的残余量。方法采用紫外吸收与Lowry蛋白测定相结合的方法。首先绘制裂解剂和蛋白标准曲线,将Lowry法测得的样品蛋白质含量代入蛋白标准曲线的回归方程中,得出样... 详细信息

目的快速、准确地检测流感病毒裂解疫苗和亚单位疫苗中裂解剂Triton N-101的残余量。方法采用紫外吸收与Lowry蛋白测定相结合的方法。首先绘制裂解剂和蛋白标准曲线,将Lowry法测得的样品蛋白质含量代入蛋白标准曲线的回归方程中,得出样品中蛋白对应的紫外吸收值,再用蛋白样品测得紫外吸收值减去蛋白吸收值的差,代入裂解剂标准曲线,得出裂解剂浓度,并对该法进行精密度和准确度验证。结果经精密度和准确度的验证,该法符合实验要求。结论所采用的方法快速、简便,适用于疫苗生产过程中裂解剂Triton N-101残余量的检测。

关键词：流感疫苗裂解剂 Triton N-101 残余量

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流感病毒裂解疫苗裂解剂去除方法的研究

微生物学免疫学进展 2007年第4期35卷 10-13页

作者：吴红荣魏邦孝李佳林齐娟王正宇兰州生物制品研究所兰州730046

裂解剂的残余含量是流感病毒裂解疫苗的主要质控指标之一。实验中采用膜超滤法和透析法做了裂解剂去除的比较研究。结果表明,膜超滤法效果优于透析法。其血凝素抗原纯化收率达到90%,裂解剂去除达98%以上;疫苗生产无菌操作和细菌内毒素... 详细信息

裂解剂的残余含量是流感病毒裂解疫苗的主要质控指标之一。实验中采用膜超滤法和透析法做了裂解剂去除的比较研究。结果表明,膜超滤法效果优于透析法。其血凝素抗原纯化收率达到90%,裂解剂去除达98%以上;疫苗生产无菌操作和细菌内毒素易于控制,成本低,易于大规模生产。

关键词：流感病毒裂解疫苗裂解剂超滤透析

流感病毒裂解疫苗裂解剂去除工艺改进及稳定性研究

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微生物学免疫学进展 2013年第6期41卷 12-16页

作者：姚伟蒋正东李振辉刘家胜诺华疫苗(中国) 杭州311100

目的改进流感病毒裂解疫苗裂解剂去除工艺，降低残余卵清蛋白和裂解剂含量，提高疫苗质量，降低成本。方法分别将A1、A3和B型流感病毒纯化液用磷酸缓冲液（PB）沉淀法去除裂解剂，经超滤、除菌制备原液，配制6批半成品，其中3批不含硫... 详细信息

目的改进流感病毒裂解疫苗裂解剂去除工艺，降低残余卵清蛋白和裂解剂含量，提高疫苗质量，降低成本。方法分别将A1、A3和B型流感病毒纯化液用磷酸缓冲液（PB）沉淀法去除裂解剂，经超滤、除菌制备原液，配制6批半成品，其中3批不含硫柳汞，3批含硫柳汞，经全面检定，并观察放置37℃、25℃和2～8℃不同时间的稳定性。结果该疫苗各项指标均符合《中国药典》（2010年版）三部要求，其中卵清蛋白平均为3．83ng／mL，裂解剂平均为57μg／mL，比改进前分别降低97．9％和69％。37℃放置4周、25℃3个月及2-8℃12个月后检定全部合格。结论该工艺步骤简单，去除卵清蛋白和裂解剂效果明显，是进一步提高疫苗质量和降低成本的有效工艺。

关键词：流感病毒裂解疫苗裂解剂稳定性磷酸缓冲液(PB)

特异性清除衰老细胞的双药纳米递送系统用于治疗肾衰竭

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Science China Materials 2024年第8期67卷 2486-2495页

作者：金世奇李文黄千笑曾旋张先正 Key Laboratory of Biomedical Polymers of Ministry of Education&Department of Chemistry Wuhan UniversityWuhan 430072China Cancer Precision Diagnosis and Treatment and Translational Medicine Hubei Engineering Research Center Zhongnan Hospital of Wuhan UniversityWuhan 430071China

清除衰老细胞是延缓衰老或治疗衰老相关疾病的一种有前途的方法.目前,达沙替尼和槲皮素的组合是研究最为广泛的衰老细胞裂解剂.然而,这两种药物的药代动力学和组织分布不同,迫切需要一种靶向递送策略使其能够同步到达组织或器官.本文设... 详细信息

清除衰老细胞是延缓衰老或治疗衰老相关疾病的一种有前途的方法.目前,达沙替尼和槲皮素的组合是研究最为广泛的衰老细胞裂解剂.然而,这两种药物的药代动力学和组织分布不同,迫切需要一种靶向递送策略使其能够同步到达组织或器官.本文设计了一种双药纳米递送系统(L-DQ),以达沙替尼和槲皮素纳米粒子(DQ)为核心,通过将纳米粒子与靶向蛋白相结合,使其具有靶向特定器官的能力.将DQ与溶菌酶结合得到能够靶向肾脏并清除肾脏衰老细胞的L-DQ.L-DQ能够特异性清除衰老细胞而不损害非衰老细胞,有效降低了受损肾脏的衰老细胞比例,促进了肾功能的恢复.这种双药纳米递送系统有助于靶向递送衰老细胞裂解剂至特定器官,为防治衰老相关疾病提供了一种潜在的策略.

关键词：达沙替尼递送系统裂解剂衰老细胞肾衰竭药代动力学肾功能槲皮素

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复合工艺橡胶沥青混合料的性能

江苏大学学报（自然科学版） 2017年第4期38卷 491-496页

作者：李微韩森吴生海孙培牛冬瑜长安大学特殊地区公路工程教育部重点实验室陕西西安710064 南通市通州区组织部江苏南通226300 长安大学材料科学与工程学院陕西西安710064

为了对复合工艺的橡胶沥青技术指标及其混合料路用性能进行研究,在制备橡胶改性沥青时掺入适量裂解剂,确定合理的制备温度和时间;对4种复合工艺橡胶沥青混合料的水稳定性能、低温弯曲性能及疲劳性能进行耐久性试验.结果表明:裂解剂质量... 详细信息

为了对复合工艺的橡胶沥青技术指标及其混合料路用性能进行研究,在制备橡胶改性沥青时掺入适量裂解剂,确定合理的制备温度和时间;对4种复合工艺橡胶沥青混合料的水稳定性能、低温弯曲性能及疲劳性能进行耐久性试验.结果表明:裂解剂质量分数为0.4%的橡胶沥青,以制备温度190℃,制备时间2 h为宜;掺加裂解剂的橡胶沥青混合料具有优异的高温、低温以及抗水损害性能,其动稳定度甚至是基质沥青混合料的3倍左右;复合工艺的橡胶沥青混合料具有优异的抗水损害、抗疲劳破坏性能以及抗低温弯曲性能,其弯拉破坏应变甚至高于橡胶颗粒SBS改性沥青混合料.

关键词：橡胶改性沥青沥青混合料复合工艺裂解剂路用性能