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递呈单纯疱疹病毒糖蛋白C模拟短肽的噬菌体免疫效果的初步研究

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中国人兽共患病杂志 2001年第4期17卷 10-12页

作者：杨乔欣马文煜余颖第四军医大学微生物学教研室西安710032

目的　鉴定含单纯疱疹病毒 (Herpessimplexvirus ,HSV)糖蛋白C(gC)模拟表位 (Mimotope)的短肽的免疫原性 ,确定其作为新型短肽疫苗组分的可能性。方法　将淘筛噬菌体随机肽库获得的递呈全部或部分 gC模拟肽的噬菌体分为 7组免疫动物 ,EL... 详细信息

目的　鉴定含单纯疱疹病毒 (Herpessimplexvirus ,HSV)糖蛋白C(gC)模拟表位 (Mimotope)的短肽的免疫原性 ,确定其作为新型短肽疫苗组分的可能性。方法　将淘筛噬菌体随机肽库获得的递呈全部或部分 gC模拟肽的噬菌体分为 7组免疫动物 ,ELISA法检测噬菌体免疫效果及天然抗原免疫鼠阳性血清与噬菌体的反应性 ,观察诱生抗体持续时间。结果　递呈 gC模拟肽的噬菌体可诱导小鼠产生抗gC的抗体 ,抗体持续时间超过 4个月 ,用HSV天然抗原免疫小鼠获得的血清抗体也能与各组噬菌体结合。结论　噬菌体递呈肽能够模拟天然HSVgC抗原的部分免疫活性且具有一定的免疫原性 ,可用作HSV亚单位疫苗或表位疫苗的研究。

关键词：单纯疱疹病毒噬菌体表面呈现免疫效果

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单纯疱疹病毒糖蛋白模拟位的研究

免疫学杂志 2002年第2期18卷 146-148,152页

作者：杨乔欣马文煜余颖第四军医大学微生物学教研室陕西西安710032

目的为了充分认识单纯疱疹病毒(HSV)糖蛋白的抗原表位，寻找HSV多组分疫苗和新型基因工程疫苗更有效的小片段短肽作为该病毒疫苗的备选免疫原。方法利用有动物保护活性的抗HSV糖蛋白C（gC）单克隆抗体（McAb）1A12淘筛噬菌体随机12肽库... 详细信息

目的为了充分认识单纯疱疹病毒(HSV)糖蛋白的抗原表位，寻找HSV多组分疫苗和新型基因工程疫苗更有效的小片段短肽作为该病毒疫苗的备选免疫原。方法利用有动物保护活性的抗HSV糖蛋白C（gC）单克隆抗体（McAb）1A12淘筛噬菌体随机12肽库，经4轮筛选后进行ELISA检测，随机挑取14个阳性克隆进行序列测定,序列比较后得到保守序列，做ELISA阻断实验进一步鉴定筛选结果并与相关天然蛋白HSV gC进行序列比较。结果获得保守序列-SG(L)RHII-和其侧翼辅助序列-AK-、-VW-，其与天然相关蛋白HSV gC 114～116位氨基酸十分相似。携有此短肽的噬菌体可以与McAb特异结合，并可部分阻断抗体与HSV囊膜抗原的反应。结论所筛选到的保守序列可模拟McAb针对的抗原表位，可能是HSV的替代抗原。这一研究方法有望使短肽替代庞大的糖蛋白全长氨基酸序列，为研制更有效及更广谱的基因工程疫苗提供依据，也使研制基于抗原表位水平的特异诊断试剂成为可能。

关键词：单纯疱疹病毒糖蛋白噬菌体随机肽库模拟位抗原表位 ELISA 疫苗

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鼠源性JEV—McAb的实验和临床治疗

解放军医学情报 1990年第5期4卷 257-259页

作者：马文煜姜绍谆第四军医大学

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乙型脑炎的流行病学与临床

中国人兽共患病杂志 2003年第3期19卷 111-112,43页

作者：吴玉水宋建华马文煜第四军医大学微生物学教研室西安710032

流行性乙型脑炎(简称乙脑)为最常见的病毒性脑炎,由日本脑炎病毒(JEV)引起.乙型脑炎的命名最初是用于区别昏睡性脑炎,即甲型脑炎(后者现已非常少见).

关键词：乙型脑炎流行病学临床地理分布诊断治疗

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沙眼衣原体重组口服活疫苗的体液免疫学特性

细胞与分子免疫学杂志 2001年第2期17卷 120-122页

作者：白光春李元薛莹李别虎范雄林马文煜第四军医大学微生物学教研室陕西西安710032

目的检测所构建的沙眼衣原体Ct重组疫苗株口服免疫小鼠后,产生的体液免疫应答。方法将所构建的重组菌以5×108菌落形成单位CFU/只的剂量,口服免疫雌性Balb/c小鼠,随机分为7组,每组3只。于免疫后第2,7,14,21,28,35和42d各取1组,采集血清... 详细信息

目的检测所构建的沙眼衣原体Ct重组疫苗株口服免疫小鼠后,产生的体液免疫应答。方法将所构建的重组菌以5×108菌落形成单位CFU/只的剂量,口服免疫雌性Balb/c小鼠,随机分为7组,每组3只。于免疫后第2,7,14,21,28,35和42d各取1组,采集血清、小肠肠腔冲洗液和阴道冲洗液标本。分别以D型Ct和鼠伤寒杆菌临床分离株为抗原,检测各组血清、小肠冲洗液和阴道冲洗液标本中特异性IgG,IgA和IgM。取抗D型Ct血清IgG阳性标本和阴道冲洗液IgA阳性标本,分别用于检测与C型Ct的交叉反应。结果在血清标本中,有抗D型Ct和抗鼠伤寒杆菌特异性IgG和IgM,在小肠冲洗液和阴道冲洗液标本中有抗上述两种抗原特异性IgG和IgA。抗D型CtIgG阳性血清标本和IgA阳性阴道冲洗液标本与C型Ct均有交叉反应。结论所构建的疫苗株免疫小鼠后,能够诱导Ct特异性IgG及IgA产生。

关键词：沙眼衣原体鼠伤寒杆菌重组疫苗体液免疫学

hIL2-preS融合基因免疫小鼠诱导体液免疫应答

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第四军医大学学报 2001年第20期22卷 1842-1845页

作者：汤丽霞马文煜李元第四军医大学基础部微生物学教研室陕西西安710033

目的　探讨 HBV pre S基因免疫和 h IL - 2与 pre S融合基因免疫诱导 BAL B/ c小鼠体液免疫反应的规律 .方法　将 pre S基因及 h IL 2 - pre S融合基因分别克隆入真核表达载体p CMV4,转染 COS- 7细胞 ,明确有目的基因表达后 ,将重组质... 详细信息

目的　探讨 HBV pre S基因免疫和 h IL - 2与 pre S融合基因免疫诱导 BAL B/ c小鼠体液免疫反应的规律 .方法　将 pre S基因及 h IL 2 - pre S融合基因分别克隆入真核表达载体p CMV4,转染 COS- 7细胞 ,明确有目的基因表达后 ,将重组质粒注射 BAL B/ c小鼠臀部肌肉 ,EL ISA方法检测小鼠血清抗体 .结果　 p CMV4- pre S接种组 ,3/ 7小鼠产生抗 pre S2抗体 .p CMV4- h IL2 - pre S接种组有 3/ 7小鼠产生抗 h IL- 2抗体 ,而未检测到抗 pre S2抗体 .结论　 p CMV 4- pre S可有效诱导小鼠产生抗体反应 .h IL2 - pre S融合基因接种 BAL B/ c小鼠时 ,可诱导产生抗 h IL-

关键词： DNA 免疫学白细胞介质2 hIL2-preS融合基因乙型肝炎病毒体液免疫应答

抗变形链球菌SAⅠ/Ⅱ单抗重链可变区基因克隆及序列分析

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华西口腔医学杂志 1999年第1期17卷 14-16,I002页

作者：文立亚闫岩尹文吴兴安姜绍淳马文煜北京市海淀区黑山沪总后309医院口腔科西安市第四军医大学微生物学教研室

目的：从抗变形链球菌ＳＡⅠ／Ⅱ单抗杂交瘤细胞系２Ｂ１２Ｆ６中扩增克隆重链可变区基因。方法：采用ＰＣＲ技术和基因工程技术，扩增杂交瘤细胞系２Ｂ１２Ｆ６的重链可变区基因并克隆入载体ｐＵＣ１８，Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链末端终止... 详细信息

目的：从抗变形链球菌ＳＡⅠ／Ⅱ单抗杂交瘤细胞系２Ｂ１２Ｆ６中扩增克隆重链可变区基因。方法：采用ＰＣＲ技术和基因工程技术，扩增杂交瘤细胞系２Ｂ１２Ｆ６的重链可变区基因并克隆入载体ｐＵＣ１８，Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链末端终止法测定核苷酸序列。结果：重链可变区基因全长３６０ｂｐ，编码１１８个氨基酸，其框架区与发表的小鼠重链可变区基因序列有７０％的同源性，符合鼠重链可变区基因的结构特征。结论：抗变形链球菌ＳＡⅠ／Ⅱ单抗杂交瘤细胞系２Ｂ１２Ｆ６重链可变区基因的获得是构建抗变形链球菌ＳＡⅠ／Ⅱ基因工程抗体的基础。

关键词：变形链球菌单克隆抗体可变区基因龋齿

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单纯疱疹病毒囊膜糖蛋白模拟短肽的筛选

细胞与分子免疫学杂志 2000年第6期16卷 464-466页

作者：杨乔欣马文煜等第四军医大学微生物学教研室，陕西西安710032

目的获得可替代单纯疱疹病毒（HSV）囊膜糖蛋白行为该病毒亚单位疫苗免疫原的小片段短肽。方法将1株具有强动物保护活性的抗HSV糖蛋白C型共同性单克隆抗体（mAb)1A12生物素化后，淘筛噬菌体随机12肽库，经4轮筛选后进行ELISA检测。... 详细信息

目的获得可替代单纯疱疹病毒（HSV）囊膜糖蛋白行为该病毒亚单位疫苗免疫原的小片段短肽。方法将1株具有强动物保护活性的抗HSV糖蛋白C型共同性单克隆抗体（mAb)1A12生物素化后，淘筛噬菌体随机12肽库，经4轮筛选后进行ELISA检测。随机挑取14个克隆DNA测序，得到保守序列（Motif)为－SG（L）RHII－,并进行了ELISA阻断实验。结果携有此短肽的噬菌体可与mAb1A12特异结合，并可部分阻断抗体与HSV囊膜抗原的反应。结论所筛选到的保守序列可模拟mAb1A12针对的抗原表位，可能是HSV的替代抗原。这一研究方法有望使短肽替代庞大的糖蛋白长氨基酸序列，为研制更有效及更广谱的基因工程疫苗提供依据，也使研制基于抗原表位水平的特异诊断试剂成为可能。

关键词：单纯疱疹病毒糖蛋白噬菌体展示随机肽库

利用噬菌体肽库筛选汉滩病毒受体结合表位的研究

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细胞与分子免疫学杂志 2002年第1期18卷 73-75页

作者：吕欣薛小平杨乔欣马文煜尹文第四军医大学微生物学教研室陕西西安710032

目的确定汉滩病毒（ＨＴＮＶ）上可与宿主细胞受体结合的一段配基表位。方法型特异性ｍＡｂ３Ｇ１，与ＨＴＮＶ糖蛋白ＧＺ及核蛋白（ＮＰ）具有双结合活性，且中和效价很高。以纯化的ｍＡｂ３Ｇ１作为配基，淘筛噬菌体随机１２... 详细信息

目的确定汉滩病毒（ＨＴＮＶ）上可与宿主细胞受体结合的一段配基表位。方法型特异性ｍＡｂ３Ｇ１，与ＨＴＮＶ糖蛋白ＧＺ及核蛋白（ＮＰ）具有双结合活性，且中和效价很高。以纯化的ｍＡｂ３Ｇ１作为配基，淘筛噬菌体随机１２肽库，经ＥＬＩＳＡ法鉴定后，对阳性克隆进行测序并与天然病毒蛋白Ｇ２及ＮＰ的序列进行同源性比较分析。结果经３轮筛选，噬菌体显示有良好的富集效果。从第３轮筛选产物中，随机挑取２１个克隆进行ＥＬＩＳＡ结合实验。结果显示，９个克隆与ｍＡｂ３Ｇ１有较强的特异结合活性；ＤＮＡ测序结果表明，具有保守性序列模式ＰＸ＿（１－２）ＨＸ＿（０－２）。该基序分别与Ｇ２～（９６）ＹＰＷＨＴＫＣＨＹ～（１０５）及ＮＰ～（８１）ＰＹＧＶＥＰＧＤＨＬＫＥＲＳ～（９４）相似。结论从噬菌体随机肽库中，筛选到能与ｍＡｂ３Ｇ１特异性结合的一段短肽基序ＰＸ＿（１－２）ＨＸ（０－２），其与ＨＴＮＶＧ２部分氨基酸的同源性较高，可能是与宿主细胞受体结合的表位，为进一步证实和研究ＨＴＮＶ的受体奠定了基础。

关键词：噬菌体表面呈现筛选汉坦病毒 mAb 表位