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西藏白菜型油菜油体特征与营养品质及油体提取物的SDS-PAGE分析

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2018年第10期46卷 68-78页

作者：侯维海王建林旦巴胡单西藏农牧学院高原作物分子育种实验室植物科学学院西藏林芝860000

【目的】探索白菜型油菜种子油体、油体蛋白表型与含油量和蛋白质、脂肪酸含量之间的关系,分析油体提取物蛋白亚基的多态性,为西藏白菜型油菜高油新品种的选育奠定基础。【方法】测定36份来自西藏不同地区的白菜型油菜农家种、野生近缘... 详细信息

【目的】探索白菜型油菜种子油体、油体蛋白表型与含油量和蛋白质、脂肪酸含量之间的关系,分析油体提取物蛋白亚基的多态性,为西藏白菜型油菜高油新品种的选育奠定基础。【方法】测定36份来自西藏不同地区的白菜型油菜农家种、野生近缘种种子的含油量和蛋白质、脂肪酸含量;利用Leica DM5000生物显微镜观察所提取油体的大小及油体蛋白的表型特征;利用SDS-PAGE对供试材料油体提取物进行凝胶电泳,分析供试材料的遗传多态性和进化关系。【结果】36份供试材料芥酸、油酸、亚油酸和烯酸含量分别为27.39~132.33,3.22~143.22,31.22~53.62和14.27~111.48mg/g,其他脂肪酸含量相对较低;36份材料的含油量为57.20~151.37mg/g,蛋白质含量为38.68~73.87mg/g。相关分析显示,含油量与蛋白质含量、棕榈酸、烯酸含量呈极显著负相关。根据含油量将供试材料划分为高油组(含油量≥138mg/g,HO)、中油组(110mg/g≤含油量SDS-PAGE电泳共分离出迁移率不同的蛋白谱带32条,出现频率为5.6%~100%;蛋白谱带的分子质量为25.5~128.7ku,且分布较集中区域在87.8~27.4ku;蛋白谱带N-J聚类分析表明,供试材料遗传相似系数为0.610~0.980,在遗传相似系数0.835处可将36份材料聚为9个类群。【结论】西藏白菜型油菜遗传变异丰富,在西藏高油白菜型油菜品种选育时可将油体粒径大且数量多、油体蛋白少且粒径大作为筛选亲本的条件。

关键词：白菜型油菜油体 SDS-PAGE 遗传多样性

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基于SDS-PAGE对蜂蜜中蛋白质的研究

食品科技 2018年第3期43卷 288-293页

作者：李静媛赵方圆青岛农业大学食品科学与工程学院青岛266109

采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对蜂蜜中的蛋白进行分离,通过单一变量试验得出较优的电泳参数为:蛋白提取方法采用硫酸-钨酸钠法、上样量为20μg、分离胶浓度为12%。通过优化后的电泳条件对7种不同蜜源的天然蜂蜜和... 详细信息

采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对蜂蜜中的蛋白进行分离,通过单一变量试验得出较优的电泳参数为:蛋白提取方法采用硫酸-钨酸钠法、上样量为20μg、分离胶浓度为12%。通过优化后的电泳条件对7种不同蜜源的天然蜂蜜和市售蜂蜜进行分离。结果分析得到天然蜂蜜中的蛋白质分子质量主要集中在(20~80)ku范围内,蛋白条带在(6~12)条之间,且不同蜜源蜂蜜中的蛋白条带具有很大的相似性;而市售蜂蜜的条带数仅为(4~6)条,蛋白含量与同蜜源天然蜂蜜相比明显减少。最后,将天然蜂蜜中的主要蛋白条带利用基质辅助激光解吸电离飞行时间二级质谱(MALDI-TOF/TOF MS)进行了鉴定,结果显示大部分蛋白为来源于意大利蜜蜂分泌的MRJPs(Majoy Royal Jelly Proteins)家族蛋白。

关键词：蜂蜜蛋白 SDS-PAGE 质谱

一种基于蓝银法的快速、低毒染色法在SDS-PAGE中的应用研究

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食品科技 2020年第4期45卷 302-307页

作者：陈鑫周琬琰段蕊王工程江苏海洋大学江苏连云港222005 江苏悠然生物科技有限公司江苏连云港222005

目的:目前聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对蛋白质的染脱色过程耗时长,且染脱色试剂具有一定的毒性。方法:以蓝银(Blue silver)染色法为基础,对染色液的配方组分、固定时间、脱色时间、染液重复利用率等方面进行了优化。结果:优化后的蓝... 详细信息

目的:目前聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对蛋白质的染脱色过程耗时长,且染脱色试剂具有一定的毒性。方法:以蓝银(Blue silver)染色法为基础,对染色液的配方组分、固定时间、脱色时间、染液重复利用率等方面进行了优化。结果:优化后的蓝银法,其染色速度及灵敏度均得到了显著提高。将染色液中的甲醇替换为乙醇,在保证染色效果不变的同时,降低了染色液的毒性;电泳完成后固定30 min,即可获得较好的条带效果;凝胶仅用蒸馏水处理即可实现脱色的目的,且条带可在蒸馏水中保存6个月以上不褪色。结论:该方法在实验教学及大部分科学研究工作中均可满足操作者使用需要,达到缩短实验时间、降低成本、减少有害试剂使用的目的。

关键词： SDS-PAGE 染色方法低毒

3种早春植物叶片蛋白质SDS-PAGE分析

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山西农业大学学报（自然科学版） 2018年第6期38卷 29-34页

作者：陈虹李涛白晋华郭红彦山西农业大学林学院山西太谷030801

[目的]通过对4种蛋白质提取方法对比分析,筛选出适于早春植物叶片蛋白质的提取方法。对3种蔷薇科植物不同时期叶片中蛋白质含量及组分进行测定分析,揭示叶片中蛋白质含量和组分的变化规律,为后期开展相应的蛋白组学研究提供理论基础。[... 详细信息

[目的]通过对4种蛋白质提取方法对比分析,筛选出适于早春植物叶片蛋白质的提取方法。对3种蔷薇科植物不同时期叶片中蛋白质含量及组分进行测定分析,揭示叶片中蛋白质含量和组分的变化规律,为后期开展相应的蛋白组学研究提供理论基础。[方法]4种蛋白质提取方法:酚提取法,改良酚提取法,改良Tris-HCl法和TCA-丙酮法。通过考马斯亮蓝(G-250)染色法和SDS-PAGE法对3种早春植物叶片的蛋白质含量和组分进行测定。[结果]与其他3种蛋白质提取方法相比,利用TCA-丙酮法提取叶片中蛋白质,后期所得蛋白图谱效果最好,蛋白质条带多且清晰。4月初至6月初5个时期叶片中蛋白质含量整体呈"先增长后下降"的变化趋势,不同生长时期华北珍珠梅叶片蛋白质含量均明显低于日本晚樱和西府海棠。SDS-PAGE电泳表明:3种早春植物叶片蛋白质组分丰富,变化多样。花期为4-5月的日本晚樱和西府海棠叶片蛋白质表达的种类相对较多,条带也较清晰;花期为6-7月的华北珍珠梅叶片蛋白质条带和发生明显变化的蛋白质种类都比较少。[结论]TCA-丙酮法是针对3种蔷薇科植物最优蛋白质提取方法。早春蔷薇科植物花期与叶片蛋白质含量相关,开花前蛋白质含量持续增长,在花期达到最高;且花期较早的日本晚樱和西府海棠比花期晚的华北珍珠梅叶片蛋白质含量和蛋白组分高。

关键词：日本晚樱西府海棠华北珍珠梅蛋白质 SDS-PAGE

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褐飞虱可溶性蛋白SDS-PAGE电泳分析

中山大学学报（自然科学版） 2015年第6期54卷 27-30页

作者：梁梓强梁士可张梅王方海中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室∥昆虫学研究所广东广州510275

采用SDS-PAGE电泳分析褐飞虱成虫和各龄期若虫的可溶性蛋白,结果表明,成虫各类样品中,条带数量基本相同,只发现一条雌性成虫所特有的蛋白条带,而多数条带在不同翅型或性别样品中存在着含量差异。如有4条条带在长翅型中的含量明显高于短... 详细信息

采用SDS-PAGE电泳分析褐飞虱成虫和各龄期若虫的可溶性蛋白,结果表明,成虫各类样品中,条带数量基本相同,只发现一条雌性成虫所特有的蛋白条带,而多数条带在不同翅型或性别样品中存在着含量差异。如有4条条带在长翅型中的含量明显高于短翅型中的含量;在雌、雄成虫样品的比较中则发现2条条带在雄虫中含量高于雌虫,而另有3条条带在雌虫中含量高于雄虫。若虫样品随着龄期升高,条带逐渐增多,发现有4条条带在各个龄期中均有表达,1条条带只在5龄若虫样品中出现,另有1条条带从4龄期开始出现。此外,还发现有2条条带在长翅芽若虫样品中的含量(9.029,9.563 ng/μL)明显高于短翅芽若虫样品中的含量(5.133,3.111 ng/μL)。并讨论了这些差异条带与翅型或性别分化方面的关系。

关键词： SDS-PAGE 褐飞虱可溶性蛋白翅二型性

重组铜绿假单胞菌外毒素A含量SDS-PAGE检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2016年第6期29卷 632-636页

作者：范锋锋李燕婷金鑫冯宜扬夏莲坤刘月萍朱衍志赵志强谢贵林谭小梅兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心甘肃兰州730046

目的建立测定重组铜绿假单胞菌外毒素A（recombinant exotoxin of Pseudomonas aeruginosa,r EPA）含量的sdspage法,并进行验证。方法采用SDS-PAGE,经考马斯亮蓝R-250染色后,利用Image Lab软件分析获得目标蛋白条带光密度值,计算目标蛋... 详细信息

目的建立测定重组铜绿假单胞菌外毒素A（recombinant exotoxin of Pseudomonas aeruginosa,r EPA）含量的sdspage法,并进行验证。方法采用SDS-PAGE,经考马斯亮蓝R-250染色后,利用Image Lab软件分析获得目标蛋白条带光密度值,计算目标蛋白在待测样品中的含量。对建立的方法进行专属性、准确性和重复性验证,确定检测范围,并用建立的方法检测r EPA宿主湿菌体中r EPA发酵产量及r EPA宿主菌休克液柱层析纯化样品中r EPA含量。结果 r EPA含量在100~600μg/ml范围内与其对应条带的光密度值具有良好的相关性,决定系数在0.97以上。大肠埃希菌固有组分及纯化过程中常用的添加物对r EPA含量检测均未产生明显影响,专属性较好;用建立的方法检测500、300、150μg/ml r EPA样品10次的回收率分别为（102.32±4.18）%、（102.77±4.94）%和（95.04±16.41）%,CV值分别为4.08%、4.81%和17.27%。各批r EPA发酵产量为250~500 mg/L,三步柱层析纯化后,r EPA总回收率约为50%。结论建立了测定r EPA含量的SDS-PAGE法,该方法专属性、准确性和重复性良好,为r EPA生产工艺的优化奠定了基础。

关键词：重组铜绿假单胞菌外毒素A SDS-PAGE 收率

毒害艾美耳球虫卵囊壁蛋白的SDS-PAGE及Western blot分析

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中国兽医学报 2017年第5期37卷 854-858页

作者：杜彩娟查夕馨黄晓星刘丹丹许金俊陶建平扬州大学兽医学院江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

利用聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳技术,分析了毒害艾美耳球虫未孢子化卵囊壁可溶性蛋白。用鼠抗毒害艾美耳球虫重组配子体蛋白rEnGAM56和rEnGAM59多克隆抗体,对卵囊壁可溶性蛋白进行了Western blot分析。结果显示,至少有24条较清晰的... 详细信息

利用聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳技术,分析了毒害艾美耳球虫未孢子化卵囊壁可溶性蛋白。用鼠抗毒害艾美耳球虫重组配子体蛋白rEnGAM56和rEnGAM59多克隆抗体,对卵囊壁可溶性蛋白进行了Western blot分析。结果显示,至少有24条较清晰的电泳条带,其中6条为相对明显的主带,其相对分子质量分别为37 000,35 000,34 000,20 000,14 000和12 000。Western blot分析显示,鼠抗rEnGAM59和rEnGAM56多抗均能识别1条条带,前者的相对分子质量约14 000,后者约30 000。推测30 000和14 000卵囊壁蛋白分别来自毒害艾美耳球虫配子体蛋白EnGAM56和EnGAM59。

关键词：毒害艾美耳球虫卵囊壁蛋白 SDS-PAGE Western blot

基于SDS-PAGE与荧光标记检测技术的黄淮麦区小麦品种(系)HMW-GS组成分析

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河南农业科学 2019年第11期48卷 18-26页

作者：贾琳琳王永霞靳晓杰河南省农业科学院作物设计中心

利用SDS-PAGE和荧光标记检测技术同时对91份黄淮麦区小麦品种(系)的高分子质量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)组成进行分析,以期为黄淮麦区小麦品质改良提供理论依据。SDS-PAGE检测结果表明,在Glu-1位点共出现14种亚基类型和28种亚基组合。Glu-A ... 详细信息

利用SDS-PAGE和荧光标记检测技术同时对91份黄淮麦区小麦品种(系)的高分子质量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)组成进行分析,以期为黄淮麦区小麦品质改良提供理论依据。SDS-PAGE检测结果表明,在Glu-1位点共出现14种亚基类型和28种亚基组合。Glu-A 1位点有3种亚基类型,分别是1(59.34%)、Null(37.36%)、2^*(3.30%);Glu-B1位点有5种亚基类型,分别是7+8(52.75%)、7+9(25.27%)、7(12.09%)、13+16(7.69%)、14+15(2.20%);Glu-D1位点有6种亚基类型,2+12(46.15%)、3+12(13.19%)、4+12(8.79%)、5+10(29.67%)、10(1.10%)和12(1.10%)。主要亚基组合类型为1/7+8/5+10(14.29%)、1/7+8/2+12(12.09%)、Null/7+8/2+12(12.09%)。荧光标记检测结果表明,供试材料中含有Ax 2^*、Dx2、Dx5、Dy10、Dy12的材料分别为3、42、27、28、63份,与SDS-PAGE检测结果相吻合。供试材料品质评分介于5.5~11.0分,平均评分为7.78分,亚基组合Null/13+16/5+10和1/13+16/2+12评分较高,均在10.0分及以上。聚类分析结果表明,供试材料可分为4类,其中第Ⅲ类集中了大部分强筋小麦材料。

关键词：高分子质量麦谷蛋白亚基(HMW-GS) 小麦黄淮麦区 SDS-PAGE 荧光标记

芽孢皮层裂解酶的提取与SDS-PAGE分析

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食品研究与开发 2018年第4期39卷 14-19页

作者：孙静贺晓光张津瑜杜文斌章中宁夏大学农学院宁夏银川750021

使用2,6-吡啶二羧酸(DPA)、L-丙氨酸、肌苷等诱导芽孢萌发,从萌发液中提取芽孢皮层裂解酶。提取的芽孢皮层裂解酶经超滤浓缩后进行SDS-PAGE垂直板电泳分析。研究发现:DPA、L-丙氨酸、肌苷以及L-丙氨酸结合肌苷对枯草芽孢杆菌芽孢均有诱... 详细信息

使用2,6-吡啶二羧酸(DPA)、L-丙氨酸、肌苷等诱导芽孢萌发,从萌发液中提取芽孢皮层裂解酶。提取的芽孢皮层裂解酶经超滤浓缩后进行SDS-PAGE垂直板电泳分析。研究发现:DPA、L-丙氨酸、肌苷以及L-丙氨酸结合肌苷对枯草芽孢杆菌芽孢均有诱导萌发的作用,且DPA诱导枯草芽孢杆菌芽孢萌发效果最好。进行SDS-PAGE电泳时,进样量为15μL,分离胶浓度为10%的凝胶板跑出的蛋白条带分离的较好,凝胶板上有4条蛋白条带,通过蛋白质分子量标准曲线可得出,目标蛋白分子量大约分别为:61.10、48.64、43.25、31.28 k Da。本研究初步提取纯化了皮层裂解酶,为后继进一步提纯皮层裂解酶、研究HPTS对该酶活性和结构的影响提供试验材料,有助于阐明高压热处理下芽孢死亡的机理,推动HPTS技术在食品工业中的应用。

关键词：枯草芽孢杆菌芽孢皮层裂解酶提取 SDS-PAGE