MiR-384对HFFA诱导的Hepa1-6细胞sirt3/FOX01信号通路的影响

作     者：麦静愔 陈天阳 平键 成扬 陈建杰 Mai Jingyin;Chen Tianyang;Ping Jian

作者机构：浦东新区中医医院上海市201299 上海中医药大学附属曙光医院 

出 版 物：《实用肝脏病杂志》 (Journal of Practical Hepatology)

年 卷 期：2018年第21卷第6期

页      面：829-832页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：上海浦东新区卫生系统学科带头人培养计划项目(编号:PWRd2016-01) 上海市卫生和计划生育委员会科研项目(编号:201540181) 

主　　题：Hepa1-6细胞 miR-384 sirt3/FOXO1信号通路 活性氧 

摘      要：目的观察MiR-384对HFFA诱导的Hepa1-6细胞sirt3/FOX01信号通路的影响。方法取Hepa1-6细胞,加入OA和PA储存液,使两者终浓度分别为1 mmol/L和0.5 mmol/L,培养24 h,建立非酒精性脂肪性肝炎体外细胞模型。测定肝细胞内活性氧水平评估模型建立的情况。分别以miR-384模拟物、miR-ctrl、miR-384抑制剂、miR-384抑制剂-ctrl、沉默信息调节因子3(Sirt3)或si-ctrl转染细胞48 h。使用FCM测定各组细胞ROS水平,采用Western blot法检测各组细胞sirt3、FOX01及抗氧化蛋白锰超氧化物歧化酶(MnSOD)和抗氧化蛋白过氧化氢酶(CAT)表达,采用专用试剂盒检测SOD和CAT活性。结果与正常组(0.66±0.01)比,miR-384模拟物组和sisirt3组细胞内活性氧(ROS)水平显著升高[分别为(37.3±1.13)和(10.4±0.36),P0.01];与HFFA组(29.4±0.98)比,HFFA/miR-384抑制剂组细胞ROS水平显著降低[(12.8±0.41),P0.01];与正常组(0.75±0.04)Hepa1-6细胞sirt3蛋白表达水平比,HFFA组显著降低[(0.23±0.01),P0.01];与HFFA组比,HFFA/sirt3组显著增加[(0.83±0.03),P0.01];与HFFA/sirt3组比,HFFA/sirt3/miR-384组显著降低[(0.46±0.02),P0.01];与对照组比,miR-384模拟物组Hepa1-6细胞sirt3蛋白、Forkhead转录因子O亚家族(FOXO)成员FOX01蛋白表达显著减少[分别为(0.2±0.01)和(0.3±0.01),P0.01],而CAT和MnSOD表达显著增加[分别为(2.3±0.05)和(2.4±0.06),P0.01];与HFFA组比,HFFA/miR-384抑制剂组Hepa1-6细胞sirt3蛋白和FOX01蛋白表达显著增加[分别为(0.5±0.02)和(0.7±0.01),P0.01],MnSOD和CAT表达水平显著降低[分别为(1.6±0.04)和(2.0±0.03),P0.01];与NAFLD组SOD(327±3.45)和CAT(386±4.03)活性比,正常组SOD和CAT[分别为(425±5.49)和(512±6.04),P0.01]和miR-384抑制剂组SOD和CAT活性[分别为(406±4.79)和(447±5.38),P0.01]显著升高。结论 miR-384表达可导致HFFA诱导的Hepa1-6细胞氧化损伤加重,部分可能是通过抑制sirt3/FOX01途径实现的。