PTD-NPY融合基因的克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达

作     者：孙玉成 周凤秋 万家余 高宏伟 Yucheng Sun;Fengqiu Zhou;Jiayu Wan;Hongwei Gao

作者机构：军事医学科学院军事兽医研究所长春130062 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2008年第24卷第9期

页      面：1620-1624页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主　　题：蛋白转导 神经肽Y(NPY) 融合基因 克隆 分泌表达 

摘      要：应用重叠延伸PCR方法扩增HIV-1TAT蛋白转导结构域(PTD)与鼠源神经肽Y(NPY)的融合基因,克隆目的片段并插入酵母表达载体pPICZαA,构建成重组表达质粒pPICZα-PTD-NPY。PCR和酶切鉴定及测序正确后,经限制性内切酶SacI线性化重组表达质粒并通过电转化整合到巴斯德毕赤酵母菌GS115的染色体基因组中。阳性重组酵母菌用含1%甲醇的培养基诱导其分泌表达。经过120h的诱导,取上清浓缩除盐后进行SDS-PAGE电泳,表明该系统成功表达了PTD-NPY融合蛋白,Western blotting实验证实表达产物具有特异性。获得真核表达的PTD-NPY融合蛋白,为下一步的应用研究提供了物质基础。