人干细胞生长因子Ca^(2+)依赖糖识别结构域缺失突变体的重组表达及生物学活性的初步探讨

作     者：原野 要晖宇 李秀森 郭子宽 吴英 江小霞 毛宁 YUAN Ye;YAO Hui-yu;LI Xiu-sen;GUO Zi-kuan;WU Ying;JIANG Xiao-xia;MAO Ning

作者机构：军事医学科学院基础医学研究所北京100850 

出 版 物：《生物技术通讯》 (Letters in Biotechnology)

年 卷 期：2005年第16卷第3期

页      面：235-238页

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 09[农学] 0901[农学-作物学] 

基　　金：国家高技术研究发展计划项目(2003AA205170) 

主　　题：细胞生长因子 缺失突变体 Ca^2+ 结构域 糖识别 生物学活性 重组表达 生物学功能 全长cDNA 融合表达载体 研究结果 CRD 种属特异性 氨基酸残基 造血细胞 小鼠骨髓 编码序列 GC含量 可溶蛋白 表达产物 融合蛋白 层析纯化 

摘      要：本文作者已有的研究结果证明,完整的人干细胞生长因子(hSCGF)没有种属特异性,即可以作用于小鼠骨髓造血细胞。这一点与在Ca2+依赖糖识别结构域(CRD)缺失了78个氨基酸残基的截短分子(hSCGFβ)有所不同。本研究从hSCGF全长cDNA中完全删除了CRD结构域编码序列,进一步探讨CRD结构域的生物学功能。由于该突变体序列GC含量较高,因此将该缺失突变体序列克隆在GST融合表达载体中进行融合表达。通过低温(28℃)诱导,表达产物主要以可溶蛋白的形式存在。利用亲和层析纯化CRD结构域完全缺失的hSCGF突变体融合蛋白,通过检测重组突变分子的协同刺激造血活性有无改变来初步探讨CRD结构域在hSCGF分子中的生物学功能。研究结果表明,去掉完整CRD结构域的突变分子仍然具有造血刺激活性。据此推断CRD结构域在hSCGF分子中可能对于受体配体结合起辅助作用。