检索结果-南通市图书馆

重组rHSA-hFGF21融合蛋白在毕赤酵母中的表达纯化及活性分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2022年第9期38卷 3419-3432页

作者：黄甜甜齐剑英杨刚刚叶贤龙河南师范大学生命科学学院河南新乡453000 赣江中药创新中心江西南昌330000

人成纤维细胞生长因子21(human fibroblast growth factor 21,hFGF21)已成为改善血糖和脂质代谢的候选药物,但却存在半衰期短和易被体内代谢等缺点,导致靶组织利用率低,限制了其临床应用。本研究通过柔性连接肽(GGGGS)_(3)将hFGF21的N... 详细信息

人成纤维细胞生长因子21(human fibroblast growth factor 21,hFGF21)已成为改善血糖和脂质代谢的候选药物,但却存在半衰期短和易被体内代谢等缺点,导致靶组织利用率低,限制了其临床应用。本研究通过柔性连接肽(GGGGS)_(3)将hFGF21的N端连接至人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的C端,经过毕赤酵母密码子优化后,将重组基因片段rHSA-hFGF21连入pPIC9k和pPICZαA两种载体,并转化到X33、GS115和SMD1168三种不同酵母菌株中。通过加压筛选得到高表达的X33-pPIC9K-rHSA-hFGF21工程菌株,并优化摇瓶诱导条件如OD值、甲醇浓度和诱导时间进一步提高rHSA-hFGF21的表达效率。培养上清经中空纤维膜切向流技术粗分离、Blue亲和层析和Q离子交换层析纯化获得纯度约98.18%的rHSA-hFGF21蛋白。与hFGF21相比,rHSA-hFGF21具有更好的热稳定性和抗胰蛋白酶降解的能力,其血浆半衰期也延长了约27.6倍;中高浓度条件下rHSA-hFGF21刺激HepG2细胞摄取葡萄糖的能力优于hFGF21;在2型糖尿病动物中rHSA-hFGF21比hFGF21具有更好的长效降糖效果。本研究将为FGF21蛋白的大规模生产奠定基础。

关键词：成纤维细胞生长因子21(FGF21) 人血白蛋白(HSA) 融合蛋白毕赤酵母糖尿病

碳水化合物结合模块-嗜热子囊菌角质酶融合蛋白在PET降解中的应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2022年第1期38卷 217-225页

作者：张颖刘展志李光耀付雪妮张钰成王志远田亚平吴敬江南大学食品科学与技术国家重点实验室江苏无锡214122 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 江南大学教育部食品安全国际合作联合实验室江苏无锡214122

随着全球经济的发展,聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料的生产量大幅提高,其废弃总量也逐年递增。废弃PET处理方法主要包括填埋、焚烧及生物降解等。填埋和焚烧均会造成二次污染,而生物降解因其环境友好特性逐渐成为研究热点。相关研究表明... 详细信息

随着全球经济的发展,聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料的生产量大幅提高,其废弃总量也逐年递增。废弃PET处理方法主要包括填埋、焚烧及生物降解等。填埋和焚烧均会造成二次污染,而生物降解因其环境友好特性逐渐成为研究热点。相关研究表明,碳水化合物结合模块(carbohydrate binding module,CBM)可以有效增强PET降解酶对PET的吸附,从而增加降解速率。通过大引物PCR (megaprimer PCR of whole plasmids,MEGAWHOP)技术,将炭疽杆菌(Bacillus anthraci)来源的CBM与嗜热子囊菌(Thermobifida fusca)角质酶(Tfuc)构建融合蛋白Ba CBM2-Tfuc并表征其PET降解性能。在60℃条件下,Ba CBM2-Tfuc降解PET膜的效率是Tfuc的2.8倍。本研究可为构建高效降解PET的融合蛋白提供技术支持。

关键词：聚对苯二甲酸乙二醇酯生物降解角质酶碳水化合物结合模块融合蛋白

融合蛋白RGD-TRAIL在毕赤酵母中的表达及活性

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

药学学报 2015年第5期50卷 552-559页

作者：王晓飞陈淑珍中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050

本文分别利用大肠杆菌和毕赤酵母表达系统构建表达RGD-TRAIL蛋白,比较两种表达系统对该蛋白活性的影响,并对毕赤酵母表达的RGD-TRAIL进行活性分析。利用基因工程方法分别构建重组质粒p ET30-rgdtrail和p HBM-rgd-trail,于大肠杆菌和毕... 详细信息

本文分别利用大肠杆菌和毕赤酵母表达系统构建表达RGD-TRAIL蛋白,比较两种表达系统对该蛋白活性的影响,并对毕赤酵母表达的RGD-TRAIL进行活性分析。利用基因工程方法分别构建重组质粒p ET30-rgdtrail和p HBM-rgd-trail,于大肠杆菌和毕赤酵母中诱导表达。采用MTT法、ELISA法、划痕及Transwell小室和Hoechst 33342染色检测RGD-TRAIL对肿瘤细胞增殖抑制、亲和活性、迁移和凋亡的影响。Western blotting检测相关凋亡蛋白的表达。重组蛋白RGD-TRAIL于大肠杆菌中以包涵体形式表达,在毕赤酵母中分泌表达。MTT结果显示,毕赤酵母表达的RGD-TRAIL抑制肿瘤细胞增殖活性明显强于大肠杆菌表达的RGD-TRAIL。ELISA实验表明,酵母表达的RGD-TRAIL可与表达αv和DR4、DR5的肿瘤细胞发生特异性结合。划痕和Transwell实验证明,RGD-TRAIL能抑制肿瘤细胞A549和HT1080迁移。经过RGD-TRAIL作用后,荧光显微镜下可观察到肿瘤细胞明显发生凋亡,Western blotting检测PARP及caspase-3均出现剪接体。研究结果提示,毕赤酵母表达系统更适合于RGD-TRAIL蛋白的表达,且能够很好地发挥靶向作用及杀伤活性。

关键词： RGD 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体细胞凋亡融合蛋白

基于金纳米粒-白蛋白融合蛋白递送系统的非药物靶向溶栓策略

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

药学学报 2024年第2期59卷 455-463页

作者：鲁津津刘春孙思荣陈敬华高敏江南大学生命科学与健康工程学院江苏无锡214122

血栓是导致心肌梗塞、脑卒中等心血管疾病的主要因素之一。纤维蛋白溶酶类抗血栓药物虽然已被广泛应用于临床,但依然受到治疗窗口狭窄、半衰期短、易失活和因非靶向性造成的异常出血等不良反应的限制。因此,有效地将溶栓物质靶向输送到... 详细信息

血栓是导致心肌梗塞、脑卒中等心血管疾病的主要因素之一。纤维蛋白溶酶类抗血栓药物虽然已被广泛应用于临床,但依然受到治疗窗口狭窄、半衰期短、易失活和因非靶向性造成的异常出血等不良反应的限制。因此,有效地将溶栓物质靶向输送到血栓部位并将不良反应降至最低至关重要。基于人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)在血液中的长循环效果和优异的载药特性,本研究运用基因工程技术在HSA的N末端融合一段能靶向血栓部位的功能肽(P-selectin binding peptide,PBP),经毕赤酵母表达并纯化得到具有血栓靶向功能的白蛋白融合蛋白。该融合蛋白包载金纳米粒子(gold nanoparticles,Au NPs)后能够形成均一稳定的纳米粒(PBP-HSA@Au),粒径为17.7±1.0 nm,zeta电位为-11.3±0.2 mV。细胞毒性和溶血实验证明PBP-HSA@Au生物相容性好,血小板靶向实验表明PBP的引入赋予了PBP-HSA@Au血栓靶向能力,近红外光(near infrared ray,NIR)照射后,PBP-HSA@Au能将光能快速转化为热能进而破坏纤维蛋白,表现出优异的溶栓效果。本研究设计的白蛋白融合蛋白递送系统为血栓治疗提供了一种精准、快速、非药物的治疗策略,该体系设计简单、生物相容性高,具有较强的临床应用性。研究涉及的所有动物实验均按照江南大学动物实验伦理委员会批准的方案执行[JN.No20230915S0301015(423)]。

关键词：血栓光热治疗靶向溶栓融合蛋白人血清白蛋白金纳米粒

参附益心颗粒对心肌梗死后心力衰竭大鼠线粒体动力学的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国实验方剂学杂志 2024年第11期30卷 87-94页

作者：宋玉莹崔琳何玉凤祝慧颖刘卫红沈思河南中医药大学第一附属医院河南省中药安全评价与风险防控工程研究中心郑州450000 河南中医药大学郑州450046

目的:采用左冠状动脉前降支结扎术制备心肌梗死后心力衰竭大鼠模型,观察参附益心颗粒对心力衰竭大鼠线粒体动力学的影响。方法:50只SD雄性大鼠随机取10只为假手术组,其余为造模组,采用左冠状动脉前降支结扎术制备心肌梗死后心力衰竭大... 详细信息

目的:采用左冠状动脉前降支结扎术制备心肌梗死后心力衰竭大鼠模型,观察参附益心颗粒对心力衰竭大鼠线粒体动力学的影响。方法:50只SD雄性大鼠随机取10只为假手术组,其余为造模组,采用左冠状动脉前降支结扎术制备心肌梗死后心力衰竭大鼠模型。根据术后28 d左室射血分数(LVEF)将模型大鼠随机分为模型组、参附益心颗粒低、高剂量组(3.011、15.055 g·kg^(-1))、沙库巴曲缬沙坦钠组(20.83 mg·kg^(-1))。各给药组每日灌胃相应剂量药液,假手术组、模型组灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续给药28 d,每组6只。超声检测心功能参数,称量大鼠心脏质量、体质量,计算心脏质量指数,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清脑钠肽(BNP)和可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)含量,苏木素-伊红(HE)染色观察心肌病理形态,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测线粒体融合蛋白1/2(Mfn1/2)、视神经萎缩蛋白1(Opa1)、动力相关蛋白1(Drp1)、分裂蛋白1(Fis1)mRNA及蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组的LVEF、Mfn1、Mfn2、Opal mRNA及蛋白水平降低,BNP、sST2、心脏质量指数、Drp1、Fis1 mRNA及蛋白水平增加(P蛋白表达增高(P蛋白水平降低(P<0.05)。病理观察显示,与假手术组比较,模型组心肌细胞排列紊乱、炎性细胞浸润,心肌纤维化;与模型组比较,各给药组炎性细胞浸润、心肌或肌间质纤维化程度均有改善缓解。结论:参附益心颗粒能抗心力衰竭,降低心脏质量指数、减少BNP、sST2含量,改善心功能,其机制可能与调整线线粒体动力学相关。

关键词：参附益心颗粒心肌梗死心力衰竭线粒体动力学心功能参数融合蛋白聚合酶链式反应(PCR)

融合蛋白药物IFNα-ELP（V）在宫颈癌中的临床研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

融合蛋白药物IFNα-ELP（V）在宫颈癌中的临床研究

作者：李宜霖潍坊医学院

学位级别：硕士

目的:研究通过构建、表达和纯化融合蛋白IFNɑ-ELP(V),探讨IFNɑ-ELP(V)的理化性质以及对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:(1)融合蛋白药物IFNɑ-ELP(V)的表达纯化与理化特性验证:首先将构建好的IFNɑ-ELP(V)质粒转入大肠杆菌(E.coil... 详细信息

目的:研究通过构建、表达和纯化融合蛋白IFNɑ-ELP(V),探讨IFNɑ-ELP(V)的理化性质以及对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:(1)融合蛋白药物IFNɑ-ELP(V)的表达纯化与理化特性验证:首先将构建好的IFNɑ-ELP(V)质粒转入大肠杆菌(E.coil)进行蛋白表达;通过可逆相变循环(ITC)方法纯化蛋白并用凝胶电泳(SDS-PAGE)验证其分子量;通过水浴锅升降温验证其温度响应性特征;通过浊度法(350nm OD)测量可逆性相转变的性质。(2)IFNɑ-ELP(V)对宫颈癌细胞的体外研究:选用宫颈鳞状细胞癌Hela和宫颈腺癌Si Ha细胞系;将实验分为6组:PBS组、IFNɑ-ELP(V)组、顺铂组、IFNɑ组,IFNɑ+顺铂组以及IFNɑ-ELP(V)+顺铂组,采用CCK8和Annexin V-FITC/PI实验检测各治疗组对宫颈癌Hela细胞和Si Ha细胞的体外抗增殖活性和细胞凋亡的影响;通过FITC荧光标记蛋白IFNɑ和IFNɑ-ELP(V),并使用共聚焦显微镜和流式细胞仪检测宫颈癌细胞的摄取能力。(3)IFNɑ-ELP(V)抗肿瘤效应的动物实验研究:构建宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,将实验动物分为6组:PBS组、IFNɑ-ELP(V)组、顺铂组、IFNɑ组,IFNɑ+顺铂组以及IFNɑ-ELP(V)+顺铂组,待肿瘤体积生长至50mm,分别进行药物注射,评估肿瘤大小的变化并观察小鼠的存活率。结果:(1)通过蛋白表达和纯化成功获取IFNɑ-ELP(V)融合蛋白,SDS-PAGE结果表明成功表达和纯化IFNɑ(20KD)和IFNɑ-ELP(V)(57KD)蛋白,浊度法实验结果表明IFNɑ-ELP(V)的可逆相转变行为。(2)宫颈癌细胞水平实验结果:CCK8结果表明,IFNɑ-ELP(V)组随着药物浓度的增加(100ng/ml、500ng/ml和1000ng/ml),细胞相对活力逐渐降低(71.4%、43.2%、32.5%),表明其抗宫颈癌细胞增殖的作用;细胞凋亡结果表明,与对照PBS组(凋亡率:4.98%)相比,IFNɑ-ELP(V)组(凋亡率:7.83%)具有促进宫颈癌细胞凋亡的作用(P融合蛋白药物IFNɑ-ELP(V);IFNɑ-ELP(V)可原位形成药物储库,具有缓慢释放的功能。(2)IFNɑ-ELP(V)可以抑制宫颈癌细胞的增殖、促进宫颈癌细胞的凋亡,并与顺铂联用产生协同效应,显著延长小鼠的生存时间。

关键词：宫颈癌化疗融合蛋白干扰素类弹性蛋白多肽环境响应性

基因融合与癌症发生发展关系及其致病机制的研究进展

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

吉林大学学报（医学版） 2022年第2期48卷 527-532页

作者：阳雪兰曾雷吉林大学第一医院表观遗传医药研究所吉林长春130021

融合基因是由2个或者2个以上不同的基因融合形成的一种基因产物,在基因组中普遍存在。部分基因融合的产生与多种癌症的发生发展密切相关,其在白血病、胃癌、肺癌和前列腺癌等癌症中通过调控激酶活性及表观遗传修饰等多种方式异常调节相... 详细信息

融合基因是由2个或者2个以上不同的基因融合形成的一种基因产物,在基因组中普遍存在。部分基因融合的产生与多种癌症的发生发展密切相关,其在白血病、胃癌、肺癌和前列腺癌等癌症中通过调控激酶活性及表观遗传修饰等多种方式异常调节相关基因的表达,被广泛应用于癌症的诊断和预后分析,是癌症治疗的潜在靶点。现就染色体重排产生的融合基因与癌症发生发展的相关性及其具体致病机制的最新研究进展进行综述,为研究基因融合在恶性肿瘤中新的发生机制提供思路,为开展有效的临床治疗提供新的理论指导。

关键词：基因融合染色体重排肿瘤融合蛋白靶向治疗

全柱成像毛细管等电聚焦电泳分析重组蛋白质药物电荷异质性

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国现代应用药学 2023年第3期40卷 351-355页

作者：陈莹莹张瀚文李宛宸彭媛媛郭常闰通化东宝药业股份有限公司吉林通化134000

目的分析德谷胰岛素、苏金单抗、阿柏西普和重组人生长激素4种重组蛋白质药物的电荷异质性,为其质量检控提供可靠且快速的分析方法。方法利用iCE3全柱成像毛细管等电聚焦电泳(imaged capillary isoelectric focusing,iCIEF)分析仪对... 详细信息

目的分析德谷胰岛素、苏金单抗、阿柏西普和重组人生长激素4种重组蛋白质药物的电荷异质性,为其质量检控提供可靠且快速的分析方法。方法利用iCE3全柱成像毛细管等电聚焦电泳(imaged capillary isoelectric focusing,iCIEF)分析仪对待测重组蛋白质药物进行检测,将待测样品与载体两性电解质按一定比例混合,在1 500~3 000 V聚焦条件下进行检测。结果德谷胰岛素等电聚焦电泳图为单峰,等电点平均值为5.25。苏金单抗共检测到4个等电点,其中等电点8.66为主峰,占总峰面积的67.78%。阿柏西普共检测到12个等电点,有6个等电点的峰面积占总峰面积>10%,RSD均蛋白质药物的质量检控具有重要意义。

关键词：全柱成像毛细管等电聚焦电泳电荷异质性重组蛋白质药物单抗融合蛋白德谷胰岛素

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

长效化重组人粒细胞集落刺激因子的研究进展

药学学报 2022年第4期57卷 875-883页

作者：王旭东刘家辉陈康楠梅建凤易喻应国清浙江工业大学药学院浙江杭州310014

重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)在临床上主要用于辅助治疗癌症患者因放/化疗引起的中性粒细胞减少症,但存在体内稳定性差、半衰期短等问题,需要反复多次给药,容易使患者产生药物耐受性及免疫排斥等不良反应,因此有必要开发长效化rhG... 详细信息

重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)在临床上主要用于辅助治疗癌症患者因放/化疗引起的中性粒细胞减少症,但存在体内稳定性差、半衰期短等问题,需要反复多次给药,容易使患者产生药物耐受性及免疫排斥等不良反应,因此有必要开发长效化rhG-CSF来提高其临床药效。本文综述了近年来利用聚乙二醇(PEG)修饰、融合蛋白以及新剂型等技术开发长效化rhG-CSF的研究进展,展望了其未来发展趋势。

关键词：重组人粒细胞集落刺激因子长效化重组人粒细胞集落刺激因子聚乙二醇修饰融合蛋白新剂型