融合蛋白RGD-TRAIL在毕赤酵母中的表达及活性

作     者：王晓飞 陈淑珍 WANG Xiao-fei;CHEN Shu-zhen

作者机构：中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 

出 版 物：《药学学报》 (Acta Pharmaceutica Sinica)

年 卷 期：2015年第50卷第5期

页      面：552-559页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81373437) 国家科技重大专项资助项目(2012ZX09301002-001-022-01) 

主　　题：RGD 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 细胞凋亡 融合蛋白 

摘      要：本文分别利用大肠杆菌和毕赤酵母表达系统构建表达RGD-TRAIL蛋白,比较两种表达系统对该蛋白活性的影响,并对毕赤酵母表达的RGD-TRAIL进行活性分析。利用基因工程方法分别构建重组质粒p ET30-rgdtrail和p HBM-rgd-trail,于大肠杆菌和毕赤酵母中诱导表达。采用MTT法、ELISA法、划痕及Transwell小室和Hoechst 33342染色检测RGD-TRAIL对肿瘤细胞增殖抑制、亲和活性、迁移和凋亡的影响。Western blotting检测相关凋亡蛋白的表达。重组蛋白RGD-TRAIL于大肠杆菌中以包涵体形式表达,在毕赤酵母中分泌表达。MTT结果显示,毕赤酵母表达的RGD-TRAIL抑制肿瘤细胞增殖活性明显强于大肠杆菌表达的RGD-TRAIL。ELISA实验表明,酵母表达的RGD-TRAIL可与表达αv和DR4、DR5的肿瘤细胞发生特异性结合。划痕和Transwell实验证明,RGD-TRAIL能抑制肿瘤细胞A549和HT1080迁移。经过RGD-TRAIL作用后,荧光显微镜下可观察到肿瘤细胞明显发生凋亡,Western blotting检测PARP及caspase-3均出现剪接体。研究结果提示,毕赤酵母表达系统更适合于RGD-TRAIL蛋白的表达,且能够很好地发挥靶向作用及杀伤活性。