猪γ干扰素的表达及抗病毒活性研究

作     者：梁望旺 周丹娜 杨克礼 刘泽文 段正赢 邓均华 郭锐 袁芳艳 徐涤平 田永祥 LIANG Wang-wang;ZHOU Dan-na;YANG Ke-li;LIU Ze-wen;DUAN Zheng-ying;DENG Jun-hua;GUO Rui;YUAN Fang-yan;XU Di-ping;TIAN Yong-xiang

作者机构：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所武汉430064 动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室武汉430064 

出 版 物：《湖北农业科学》 (Hubei Agricultural Sciences)

年 卷 期：2011年第50卷第11期

页      面：2283-2286页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家科技支撑计划项目(2006BAD06A18) 湖北省农业科技创新中心资助项目(2007-620-001-03) 动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室开放课题(2010ZD151) 

主　　题：猪γ干扰素 克隆 原核表达 

摘      要：利用RT-PCR技术从有丝分裂原刀豆素(ConA)诱导的长白猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增出猪γ干扰素的成熟肽基因(mPoIFN-γ),并将其亚克隆到原核表达载体pET-28a中,构建重组表达载体pET-mPoIFN-γ。经PCR、酶切及测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blot检测,表明猪γ干扰素获得了高效表达,并具有免疫活性,表达产物约为20.5 kDa,主要以包涵体形式存在,产物经纯化、复性得到具有生物学活性的蛋白。利用细胞病变抑制法对其在H-PRRSV/Marc-145系统上进行抗病毒活性测定,结果表明其抗H-PRRSV活性为7.68×103 U/mg。为进一步研究猪γ干扰素功能奠定了基础和理论依据。