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猪圆环病毒2型CAP蛋白新型表位抗原肽的设计、合成及免疫原性研究

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免疫学杂志 2014年第5期30卷 397-401页

作者：吴胜昔曾政蔡家利梁望旺蔺露董春霞熊仲良吴玉章重庆理工大学药学与生物工程学院 400054 重庆市动物疫病预防控制中心 401120 第三军医大学全军免疫学研究所重庆400038

目的设计合成PCV2 CAP的B细胞表位抗原肽并对其进行鉴定。方法采用DNAStar和BcePred分析软件并结合吴玉章氨基酸抗原指数计算方法预测PCV2 CAP的B细胞表位．以此合成4分支多重抗原肽结构．同时串联一个通用型n表位；采用Fmoc法合成4分支... 详细信息

目的设计合成PCV2 CAP的B细胞表位抗原肽并对其进行鉴定。方法采用DNAStar和BcePred分析软件并结合吴玉章氨基酸抗原指数计算方法预测PCV2 CAP的B细胞表位．以此合成4分支多重抗原肽结构．同时串联一个通用型n表位；采用Fmoc法合成4分支PCV2CAP多重抗原肽（MAP），通过高效反相液相色谱（RP-HPLC）、质谱（MS）分析对其进行初步鉴定。以合成的抗原肽免疫昆明系小鼠及兔，观察体液免疫反应。结果初步筛选出3种抗原指数较高的表位，即98～103aa（命名为B98），156～162aa（命名为B156），228～233aa（命名为B228）；合成的多重抗原肽经RP-HPLC层析后，纯度达到92.49％，MS鉴定其相对分子质量一致，误差小于0．1％。以合成的MAP疫苗免疫小鼠及兔后，可产生高滴度的特异性抗PCV2CAP抗体。结论PCV2CAP的B细胞新表位多重抗原肽有免疫原作用，将为PCV2CAP表位肽疫苗的研究奠定基础。

关键词： PCV2 CAP B细胞表位表位鉴定 ELISA

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牛支原体P33蛋白的原核表达及鉴定

黑龙江畜牧兽医 2019年第7期 81-84页

作者：李令臣吴胜昔梁望旺李俊萱曾政黄恒重庆理工大学药学与生物工程学院重庆400054 重庆市动物疫病预防控制中心重庆401120

为了实现牛支原体P33蛋白在大肠杆菌中的高效表达,试验在不改变P33蛋白氨基酸序列的情况下,根据GenBank发表的P33基因序列(登录号为AIA33909.1)设计并合成特异性引物,利用PCR法扩增P33基因,进行双酶切并将基因片段克隆到pET28a(+)载体中... 详细信息

为了实现牛支原体P33蛋白在大肠杆菌中的高效表达,试验在不改变P33蛋白氨基酸序列的情况下,根据GenBank发表的P33基因序列(登录号为AIA33909.1)设计并合成特异性引物,利用PCR法扩增P33基因,进行双酶切并将基因片段克隆到pET28a(+)载体中,构建重组质粒pET28a(+)/P33,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后进行原核表达,再利用His-tag镍柱纯化P33重组蛋白,并对纯化后的重组蛋白进行鉴定。结果表明:成功扩增得到牛支原体P33基因,其核苷酸序列长度为710 bp,重组菌株在温度为30℃、以0.5 mmol/L IPTG诱导12小时时,P33蛋白表达量最高;经His-tag镍柱纯化后P33蛋白在33 ku处有明显的蛋白印迹条带,与预期大小相符。说明成功实现了在大肠杆菌中表达牛支原体P33重组蛋白。

关键词：牛支原体 P33 蛋白载体构建原核表达重组菌株蛋白免疫印迹分析

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猪瘟病毒检测技术研究进展

安徽农业科学 2007年第16期35卷 4853-4854,4856页

作者：杨克礼徐涤平梁望旺刘泽文汪宏才段正赢湖北省农业科学院畜牧兽医研究所湖北武汉430064

综述了猪瘟病毒检测技术的研究现状,并对今后的研究趋势进行了展望。

关键词：猪瘟猪瘟病毒检测

猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株GP5基因的遗传变异与系统进化分析

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华中农业大学学报 2009年第5期28卷 595-599页

作者：梁望旺杨克礼伍锐熊忠良刘泽文段正赢徐涤平湖北省农科院畜牧兽医研究所武汉430064 动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室武汉430064

为进一步了解猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）在国内的分子遗传进化情况，对中国大陆1996-2008年问33株PRRSV分离毒株（29株来自GenBank）的GP5序列与国外部分代表毒株进行了分析比较。结果表明，所选PRRSV中国分离毒株中有32株属于北... 详细信息

为进一步了解猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）在国内的分子遗传进化情况，对中国大陆1996-2008年问33株PRRSV分离毒株（29株来自GenBank）的GP5序列与国外部分代表毒株进行了分析比较。结果表明，所选PRRSV中国分离毒株中有32株属于北美洲型（NA），并大致可分为2个基因亚群，1株属于欧洲型（EU）。其中，自2006年在我国暴发的高致病性蓝耳病病毒（H—PRRSV）属于亚群1，且与YA株亲缘关系较近；亚群2毒株则与Ingelvac的弱毒疫苗株及其亲本株VR-2332具有较高的同源性。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒进化分析 GP5 ORF5

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新城疫病毒F蛋白的原核表达及鉴定

黑龙江畜牧兽医 2018年第7期 116-119页

作者：王玲玲吴胜昔曾政梁望旺蒋棚俊顾盼周康森重庆理工大学药学与生物工程学院重庆400054 重庆市动物疫病预防控制中心重庆401120

为了实现新城疫病毒（NDV）-F蛋白在大肠杆菌中的高效表达,试验采用基因工程方法对NDV-F蛋白的原核表达进行研究,在不改变NDV-F蛋白氨基酸序列的情况下,以NDV-F全基因组为模板设计并合成引物,采用RT-PCR法扩增NDV-F基因,并将其克隆到原... 详细信息

为了实现新城疫病毒（NDV）-F蛋白在大肠杆菌中的高效表达,试验采用基因工程方法对NDV-F蛋白的原核表达进行研究,在不改变NDV-F蛋白氨基酸序列的情况下,以NDV-F全基因组为模板设计并合成引物,采用RT-PCR法扩增NDV-F基因,并将其克隆到原核表达载体p ET32a（＋）中,构建重组质粒pET32a（＋）/NDV-F,转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中进行诱导表达,利用His-tag镍柱纯化重组蛋白NDV-F,并对纯化后的重组蛋白进行鉴定。结果表明：重组菌株在16℃条件下,以0.1 mmol/L IPTG诱导20小时时,NDV-F重组蛋白表达量最高;经His-tag镍柱纯化后在78 ku处有明显的蛋白印迹条带,与预期大小相符。说明NDV-F重组蛋白在大肠杆菌中成功表达,且纯度较高,特异性较好。

关键词：新城疫病毒(NDV) F蛋白原核表达重组菌株蛋白免疫印迹分析

鸡传染性贫血病毒、传染性法氏囊病毒与大肠杆菌混合感染的诊治

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畜牧与兽医 2008年第2期40卷 70-72页

作者：杨克礼徐涤平熊忠良潘玲刘泽文梁望旺湖北省农科院畜牧兽医研究所湖北武汉430064 安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036

鸡传染性贫血与传染性法氏囊病是由病毒感染导致的鸡主要免疫抑制病,雏鸡同时或先后感染此2种病原,即会使二者相互促进,增强感染力和致病力,进一步继发细菌感染,造成严重损失。某个体养殖户鸡群发生以消瘦、贫血为主的鸡病。根据发病特... 详细信息

鸡传染性贫血与传染性法氏囊病是由病毒感染导致的鸡主要免疫抑制病,雏鸡同时或先后感染此2种病原,即会使二者相互促进,增强感染力和致病力,进一步继发细菌感染,造成严重损失。某个体养殖户鸡群发生以消瘦、贫血为主的鸡病。根据发病特点、临床症状、剖检、实验室检查确诊为鸡传染性贫血病毒、传染性法氏囊病毒与大肠杆菌混合感染。采取及时隔离、加强消毒及饲养管理、选用敏感药物、饲料饮水加药控制继发感染等综合防制措施,有效控制了该病。

关键词：鸡传染性贫血病毒鸡传染性法氏囊病病毒大肠杆菌混合感染

动物源耐氟喹诺酮类药物致病性大肠杆菌gyrA基因的突变研究

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畜牧与兽医 2009年第7期41卷 74-76页

作者：邓均华徐涤平伍锐梁望旺杨克礼熊忠良湖北省农科院畜牧兽医研究所湖北武汉430209

用微量稀释法测定盐酸环丙沙星等5种氟喹诺酮类抗菌药物对20株耐氟喹诺酮类药物的动物源致病性大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC),PCR扩增gyrA基因的喹诺酮耐药决定区(quinolone resistance determining regions,QRDR),扩增的片断长度为496 b... 详细信息

用微量稀释法测定盐酸环丙沙星等5种氟喹诺酮类抗菌药物对20株耐氟喹诺酮类药物的动物源致病性大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC),PCR扩增gyrA基因的喹诺酮耐药决定区(quinolone resistance determining regions,QRDR),扩增的片断长度为496 bp,PCR产物直接测序,用DNAStar软件分析氨基酸序列。结果显示,盐酸环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、甲磺酸培氟沙星和烟酸诺氟沙星的MIC范围分别为64～>512μg/mL、16～256μg/mL、16～128μg/mL、64～>512μg/mL和64～>512μg/mL。gyrA基因的突变位点均位于83和87位氨基酸位点,主要的变异方式为Ser83→Leu(15/20),其次是Asp87→Asn(13/20),其他的为Asp87→Tyr(6/20),Ser83→Trp(4/20),Ser83→Ala(1/20)和Asp87→Gly(1/20)。说明试验用菌株对氟喹诺酮类药物均表现为多重耐药,其gyrA基因QRDR的突变表现为多种形式。

关键词：致病性大肠杆菌氟喹诺酮 gyrA基因

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒湖北株的分离与鉴定

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畜牧与兽医 2009年第11期41卷 60-63页

作者：杨克礼梁望旺伍锐刘泽文熊忠良徐涤平湖北省农科院畜牧兽医研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室湖北武汉430064

为了探明猪高热综合征的原发病原，对采自湖北省患有明显呼吸道临床症状和高热死亡的仔猪组织病料进行病毒分离，结果分离到3株病毒。经电镜观察、免疫荧光试验、RT-PCR鉴定为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）。病毒基因序列分析... 详细信息

为了探明猪高热综合征的原发病原，对采自湖北省患有明显呼吸道临床症状和高热死亡的仔猪组织病料进行病毒分离，结果分离到3株病毒。经电镜观察、免疫荧光试验、RT-PCR鉴定为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）。病毒基因序列分析表明，其GP5及NSP2基因与高致病性PRRSV毒株有97％～99％的同源性。人工猪体感染发病试验表明，该分离株均可引起仔猪出现明显临床症状和死亡，证实湖北省已经出现临床高致病性PRRSV毒株。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征分离病原性

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猪传染性胸膜肺炎病原学研究进展

安徽农业科学 2008年第13期36卷 5455-5456,5460页

作者：梁望旺伍锐杨克礼熊忠良刘泽文徐涤平湖北省农业科学院畜牧兽医研究所湖北武汉430064

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起的,该病是一种呼吸道疾病,影响着全世界养猪业的发展。综述了猪传染性胸膜肺炎的病原学研究进展,为该病的诊断及研究高效的猪传染性胸膜肺炎疫苗提供理论依据。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌 APP 病原学