CRISPR/Cas9系统敲除TET2基因对HepG2细胞增殖和凋亡的影响

作     者：于声 杨玲凤 兰可 谢汶志 岑海燕 姜伯劲 段斯亮 Yu Sheng;Yang Lingfeng;Lan Ke;Xie Wenzhi;Cen Haiyan;Jiang Bojin;Duan Siliang

作者机构：广西科技大学医学院 

出 版 物：《基因组学与应用生物学》 (Genomics and Applied Biology)

年 卷 期：2018年第37卷第6期

页      面：2633-2639页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：2017年度广西高校中青年教师基础能力提升项目(2017KY0366) 2016年地方高校国家级大学生创新创业训练计划项目(201610594051) 2016年自治区级大学生创新创业训练计划立项项目(20161059 4051) 广西科技大学校级项目(校科医1307206)共同资助 

主　　题：TET2基因 CRISPR-CAS9质粒系统 基因敲除 增殖 凋亡 

摘      要：为了进一步探讨TET2蛋白在肝癌的发生发展过程中发挥的生物学功能,本研究使用CRISPR在线设计工具（http：//***/）,针对TET2的外显子设计g RNA,构建靶向TET2基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒,转染HepG2细胞。T7E1酶切检测TET2基因的编辑效率,Western blotting检测TET2蛋白表达水平;MTT法、Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒分别检测HepG2细胞的增殖活性及凋亡水平的改变。T7EI酶切分析显示敲除效率为31.4%;TET2基因表达量的降低抑制了HepG2细胞的增殖,促进了细胞的凋亡。CRISPR/Cas9质粒系统能够在细胞水平对TET2基因进行编辑,靶向TET2基因的CRISPR/Cas9质粒系统降低了TET2的表达、抑制HepG2细胞的增殖、促进HepG2细胞的凋亡。本研究表明CRISPR/Cas9技术为研究TET2的功能和作用机制提供了有效工具,为研究TET2蛋白在肝癌的发生发展过程中发挥的生物学功能提供实验依据。