小鼠睾丸生精新基因SRG4原核表达与纯化

作     者：邢晓为 袁洪 王维 XING Xiao-wei;YUAN Hong;WANG Wei

作者机构：中南大学湘雅三医院细胞移植与基因治疗中心湖南长沙410013 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2007年第23卷第8期

页      面：701-703页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1002[医学-临床医学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30600681) 湖南省自然科学基金资助项目(05JJ40044) 

主　　题：SRG4 克隆 原核表达 融合蛋白 精子发生 

摘      要：目的：原核表达小鼠睾丸生精新基因SRG4, 并对重组蛋白进行纯化, 为研究SRG4的生物学功能奠定基础.方法：应用RT-PCR从小鼠睾丸中扩增SRG4 C端包含一个Sad1_UNC like domain的587 bp片段, 将PCR产物克隆至pUCm-T载体.随后, cDNA片段亚克隆至带有6个组氨酸标签的原核表达载体PQE-30中, 测序鉴定.将重组质粒PQE-30-SRG4转化大肠杆菌M15, IPTG诱导, 表达产物以Western blot进行鉴定, 并进一步通过Ni-NTA Agarose亲合层析纯化.结果：成功地构建了原核表达质粒PQE-30-SRG4.IPTG诱导4 ～5 h, SRG4融合蛋白表达量达最高.Western blot分析证实, IPTG诱导表达的蛋白是SRG4融合蛋白.Ni-NTA Agarose纯化后得到较纯的SRG4融合蛋白.结论：重组质粒PQE-30-SRG4能在大肠杆菌M15中表达, 包含Sad1_UNC like domain的纯化SRG4融合蛋白可用于研究SRG4在精子发生中的生物学功能.