乙肝表面抗原与促黄体激素释放激素的融合基因5'端改造及其在大肠杆菌中的表达

作     者：凌雯 龚晓明 杨震 杜念兴 

作者机构：南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室 

出 版 物：《南京农业大学学报》 (Journal of Nanjing Agricultural University)

年 卷 期：1998年第21卷第2期

页      面：92-99页

核心收录：

学科分类：090602[农学-预防兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主　　题：融合基因 聚合酶链反应 基因改造 原核表达 

摘      要：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对畜型和禽型两个融合基因ＨＢｓＡｇ／ＬＨＲＨ的５′端分别作了改造，切去了融合基因起始密码ＡＴＧ前一段非编码序列６１个碱基，将改造后的融合基因插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｅ１１ＫＳ＋质粒中。琼脂糖凝胶电泳以及序列分析均表明改造和克隆成功。将改造后的融合基因克隆到含Ｔ７Ｐｒｏｍｏｔｅｒ强启动子的表达载体ｐＥＴ１５ｂ中，经异丙基硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导，在Ｅ．ｃｏｌｉＤＥ３中表达，表达量占菌体总蛋白的１０％，以兔抗ＬＨＲＨ抗体进行Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测，出现阳性反应带。用抗ＨＢｓＡｇ抗体作ＥＬＩＳＡ检测，结果稀释１×１０－６时仍为阳性反应。