表达丙肝病毒核心蛋白基因的人肝细胞模型的建立
Establishment of human hepatocyte model expressing HCV-C gene作者机构:中山大学实验动物中心广州510080 华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科
出 版 物:《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)
年 卷 期:2003年第20卷第11期
页 面:1043-1045页
核心收录:
学科分类:10[医学]
主 题:人肝细胞模型 丙型肝炎病毒核心蛋白基因 聚合酶链反应 丙型肝炎病毒感染 C蛋白
摘 要:目的 构建表达丙型肝炎病毒核心蛋白 (HCV C)基因的人肝细胞模型。方法 用聚合酶链反应 (PCR)方法从 pHCV MA质粒中钩出HCV C基因 ,酶切纯化后克隆于质粒 pTRE中 ,建立重组质粒 pTRE C。pTRE C经酶切、纯化后目的片段与质粒PcDNA3连接 ,通过限制性内切酶酶切分析及PCR鉴定筛选出正确重组质粒PcDNA3 tRe C ,由脂质体介导转染Chang liver人肝细胞 ,建立表达HCV C基因的人肝细胞模型 ,PCR方法鉴定Chang liver人肝细胞内HCV C基因 ,反转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测HCV C基因在Chang liver人肝细胞内的表达 ,抗生物素蛋白 生物素 过氧化物酶复合体法 (ABC法 )方法分析HCV核心蛋白在人肝细胞内的表达及定位。结果 构建了表达HCV C基因的重组真核表达载体 ,并在Chang liver人肝细胞中表达出HCV C蛋白。结论 成功地建立了表达HCV C基因的人肝细胞模型 ,该模型为进一步研究HCV C的生物学特性及HCV感染所致肝硬化、肝癌的致病机制提供基础材料。