幽门螺杆菌尿素酶B基因的克隆表达及活性测定

作     者：蔡靓 李克生 杜惠芬 付宝权 李文卉 曲自刚 谢志宙 CAI Liang1,2,3,LI Ke-sheng2,DU Hui-fen2,FU Bao-quan3,LI Wen-hui3,QU Zi-gang3,XIE Zhi-zhou3 (1.College of Veterinary Medicine,Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China;2.Center for Medical Biology, Academy of Medical Sciences in Gansu Province,Lanzhou 730050,China;3.State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology/Key Laboratory of Veterinary Public Health of the Ministry of Agriculture/Key Laboratory of Veterinary Parasitology of Gansu Province/Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730046,China)

作者机构：甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃省医学科学研究院医学生物中心甘肃兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2013年第43卷第3期

页      面：283-288页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主　　题：幽门螺杆菌 尿素酶B亚单位 原核表达 免疫原性 

摘      要：为研究幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B(UreB)的免疫学活性,采用PCR方法扩增Hp UreB基因,经双酶切构建表达载体pET28a-UreB,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经过IPTG诱导进行表达,用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA检测血清抗体效价,并使用感染患者血清进行Western-blot鉴定。结果显示,扩增的Hp UreB基因序列与GenBank中的26 695标准株序列相比较核苷酸序列同源性达到96.73%,氨基酸序列同源性高达99.30%,SDS-PAGE分析发现表达的重组蛋白分子质量约为66ku,以可溶性形式存在。Western-blot结果显示重组UreB能被Hp感染患者血清特异性识别,同时,用纯化后的UreB蛋白免疫小鼠能诱导产生特异性体液免疫应答,表明UreB具有很好的免疫原性。试验证明表达出具有生物活性的UreB蛋白,为Hp快速检测方法的研究奠定了基础。