检索结果-南通市图书馆

幽门螺杆菌尿素酶b亚单位H-2~d限制性T_H表位的预测与鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华微生物学和免疫学杂志 2006年第6期26卷 531-534页

作者：石云吴超邹全明第三军医大学临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药技术中心重庆400038

目的鉴定幽门螺杆菌(Hp)尿素酶b亚单位(Ureb)的H-2d限制性TH表位,为研究Hp表位疫苗奠定实验基础。方法用RANKPEP软件预测尿素酶b亚单位可能的H-2d限制性TH细胞表位,合成表位肽,采用淋巴细胞增殖试验、流式细胞分析及CD4+T淋巴细胞增殖... 详细信息

目的鉴定幽门螺杆菌(Hp)尿素酶b亚单位(Ureb)的H-2d限制性TH表位,为研究Hp表位疫苗奠定实验基础。方法用RANKPEP软件预测尿素酶b亚单位可能的H-2d限制性TH细胞表位,合成表位肽,采用淋巴细胞增殖试验、流式细胞分析及CD4+T淋巴细胞增殖试验进行表位鉴定。结果经软件预测获得7条可能的H-2d限制性TH细胞表位,多肽合成经分析各表位肽纯度均>85％,其中3条表位肽U546-561、U229-244、U237-251能够刺激rUreb致敏的bALb／c(H-2d)小鼠的CD4+ T淋巴细胞增殖(SI>2)。结论U546-561、U229-244、U237-251是Ureb的H-2d限制性TH细胞表位,可进一步用于Hp表位疫苗的研究。

关键词：幽门螺杆菌尿素酶b亚单位 TH表位 bALb/c(H-2^d)小鼠

过氧化氢酶和尿素酶b亚单位二价疫苗预防小鼠幽门螺杆菌感染

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

南方医科大学学报 2008年第3期28卷 436-437,443页

作者：林焕建杨勤李菁刘颖王启仪广东省人民医院消化科广东广州510080 湖北省当阳市人民医院湖北当阳444100 南方医科大学南方医院消化科广东广州510515

目的利用人类幽门螺杆菌(***)感染的小鼠模型研究过氧化氢酶和尿素酶b亚单位二价疫苗预防***感染的作用。方法把实验动物无特定致病菌C57bL/6小鼠分成7组,分别通过灌胃方法给予过氧化氢酶和尿素酶b亚单位(各100μg)加霍乱毒素(CT)(2μg... 详细信息

目的利用人类幽门螺杆菌(***)感染的小鼠模型研究过氧化氢酶和尿素酶b亚单位二价疫苗预防***感染的作用。方法把实验动物无特定致病菌C57bL/6小鼠分成7组,分别通过灌胃方法给予过氧化氢酶和尿素酶b亚单位(各100μg)加霍乱毒素(CT)(2μg)、过氧化氢酶(100μg)加CT(2μg)、尿素酶b亚单位(100μg)加CT(2μg)、PbS、单纯过氧化氢酶(100μg)、单纯尿素酶b亚单位(100μg)、单纯CT(2μg),共4次。2周后再用活***灌胃,再4周后处死动物,取胃粘膜行半定量细菌培养检查***情况。结果实验各组***完全保护率分别为:过氧化氢酶和尿素酶b亚单位加CT组83.3%(20/24)、过氧化氢酶加CT组41.7%(10/24)、尿素酶b亚单位加CT组54.2%(13/24);生理盐水组、单纯过氧化氢酶、单纯尿素酶b亚单位、单纯CT组根除率均为0%。未完全保护的小鼠,疫苗组***的定植密度明显低于其它4组(P酶和尿素酶b亚单位加免疫佐剂组成的二价口服疫苗较单价口服疫苗有更好的免疫预防效果。

关键词：幽门螺杆菌过氧化氢酶尿素酶b亚单位疫苗

幽门螺杆菌尿素酶b亚单位基因的克隆及其高效表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物制品学杂志 2008年第9期21卷 771-773页

作者：朱卫华李生迪宣俊文陈翠萍兰州生物制品研究所第一研究室兰州730046 中国药品生物制品检定所诊断室北京100050

目的克隆幽门螺杆菌尿素酶b亚单位(Ureb)基因,构建原核表达载体,并进行高效表达。方法以幽门螺杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增Ureb基因,双酶切后,与质粒pET-22b(+)连接,构建表达载体pET-22b(+)/Ureb,分别转化***21(DE3)、Origam(iDE3)和Ro... 详细信息

目的克隆幽门螺杆菌尿素酶b亚单位(Ureb)基因,构建原核表达载体,并进行高效表达。方法以幽门螺杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增Ureb基因,双酶切后,与质粒pET-22b(+)连接,构建表达载体pET-22b(+)/Ureb,分别转化***21(DE3)、Origam(iDE3)和Rossetta(DE3),经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果经酶切及测序,证明幽门螺杆菌Ureb基因的原核表达载体构建正确。3种重组菌的诱导表达产物经SDS-PAGE分析,均可见相对分子质量为64000的目的蛋白条带,Rossetta(DE3)重组菌目的蛋白表达量最高,约占菌体蛋白的35%。Western blot结果表明,表达的目的蛋白具有良好的反应原性。结论已成功克隆了幽门螺杆菌Ureb基因,并在大肠杆菌Rossetta(DE3)中获得了高效表达。

关键词：幽门螺杆菌尿素酶b亚单位克隆原核表达

幽门螺杆菌尿素酶b亚单位优势Th表位的系统筛选与鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

第三军医大学学报 2013年第3期35卷 212-215页

作者：李滨陈立杨武晨李海波胡健何亚非章金勇赵卓吴超第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038 第三军医大学新桥医院消化内科重庆400037

目的筛选幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶b亚单位(Ureb)中CD4+细胞优势应答表位,并确定其MHC限制性。方法以重组Ureb蛋白(rUreb)与弗氏佐剂联合皮下多点注射免疫bALb/c小鼠,从小鼠脾脏中体外扩增Ureb特异性T淋巴细胞,采用步... 详细信息

目的筛选幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶b亚单位(Ureb)中CD4+细胞优势应答表位,并确定其MHC限制性。方法以重组Ureb蛋白(rUreb)与弗氏佐剂联合皮下多点注射免疫bALb/c小鼠,从小鼠脾脏中体外扩增Ureb特异性T淋巴细胞,采用步移重叠合成肽法筛选CD4+T细胞优势应答表位,分析其MHC分子限制性。结果 18mer短肽筛选发现Ureb403-420和Ureb409-426可显著刺激Ureb特异性CD4+T细胞产生IFN-γ。13mer短肽鉴定实验结果显示,Ureb409-421可刺激产生与18mer短肽Ureb403-420和Ureb409-426等同的应答强度。同时抗体阻断实验表明,抗H-2d(I-A)单克隆抗体能有效阻断该表位的应答。结论 Ureb403-420和Ureb409-426为Ureb抗原中的优势Th表位,其刺激免疫反应的核心位置为Ureb409-421,且存在H-2d(I-A)限制性。

关键词：幽门螺杆菌尿素酶b亚单位 Th表位

幽门螺杆菌尿素酶b亚单位表位融合肽在大肠杆菌中的表达与纯化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

药物生物技术 2007年第4期14卷 235-240页

作者：赵文锋徐旭东吴梧桐中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009

构建霍乱毒素b亚单位(CTb)与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)尿素酶b亚单位(Ure b)表位的融合肽表达载体pET-CtUbE,在***21(DE3)中表达融合肽CtUbE。以霍乱弧菌基因组DNA为模板,PCR扩增CTb编码序列,克隆到表达载体pET-28a,获得新质粒pE... 详细信息

构建霍乱毒素b亚单位(CTb)与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)尿素酶b亚单位(Ure b)表位的融合肽表达载体pET-CtUbE,在***21(DE3)中表达融合肽CtUbE。以霍乱弧菌基因组DNA为模板,PCR扩增CTb编码序列,克隆到表达载体pET-28a,获得新质粒pET-CTb;化学合成Ure b表位编码序列,克隆到pET-CTb获得CtUbE表达载体pET-CtUbE,并转化***21(DE3),1 mmol/L IPTG诱导融合肽表达,阴离子交换色谱柱纯化融合肽CtUbE,ELISA分析CtUbE复性结果。结果获得了表达融合肽CtUbE的工程菌,诱导后融合肽表达量占菌体总蛋白34.7%,CtUbE纯化后纯度为95.6%,复性后融合肽可与GM1神经节苷脂和抗Ure b血清结合。实验成功构建了表达Ure b表位融合肽的工程菌,融合肽CtUbE保持了CTb生物活性和反应原性,纯度符合疫苗抗原要求,可以用于抗HP感染的疫苗研制。

关键词：幽门螺杆菌尿素酶b亚单位 CTb 融合表位肽

幽门螺旋杆菌尿素酶b亚单位的重组表达及在临床诊断中的应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

药物生物技术 2022年第3期29卷 239-244页

作者：刘文亮李玉萍吴洪波何先萍朱小林林骏深圳市药品检验研究院深圳市医疗器械检测中心广东深圳518057

自幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,***)被科学家发现以来,已经明确其与多种上消化道疾病密切相关,准确地检测***是对疾病进行规范化治疗的前提。血清抗体检测法可以反映一段时间内***感染状况,是唯一不受近期用药和胃内局部病变影响... 详细信息

自幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,***)被科学家发现以来,已经明确其与多种上消化道疾病密切相关,准确地检测***是对疾病进行规范化治疗的前提。血清抗体检测法可以反映一段时间内***感染状况,是唯一不受近期用药和胃内局部病变影响的检测方法。本研究制备了高纯度、具有生物活性的尿素酶b亚单位(Urease b,Ureb)蛋白,并对该蛋白进行分析鉴定,建立一种间接ELISA法,用于检测患者由于感染幽门螺旋杆菌而产生的Ureb抗体。利用PCR方法扩增出***-Ureb基因,然后进行双酶切、连接构建重组表达载体Ureb-pTrcHis2C,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导表达,利用金属离子螯合磁珠结合离子交换层析进行纯化,纯化后的蛋白通过Western blot进行抗原反应性鉴定。将验证后的蛋白包被于酶标板中,建立间接ELISA法,用于检测患者血清中的Ureb抗体。该蛋白在25℃条件下,以1 mmol/L IPTG,诱导4 h蛋白表达量最高,蛋白相对分子质量为69000,纯化后蛋白纯度为97.3%,Western blot结果显示,该蛋白与***阳性血清可以发生特异性结合。通过棋盘滴定法确定了Ureb蛋白的包被浓度和血清的稀释倍数,建立了间接ELISA法,并利用该方法对43例待测血清进行检测,间接ELISA结果与临床检测结果比较,准确度为88.4%,灵敏度为100%,特异性为82%。试验成功表达并纯化出高纯度的重组Ureb蛋白,并利用该蛋白建立了一种检测患者血清中Ureb抗体的间接ELISA法。

关键词：幽门螺旋杆菌尿素酶b亚单位原核表达蛋白纯化血清学检测间接ELISA

中国人幽门螺杆菌尿素酶b亚单位的基因克隆及序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

免疫学杂志 2000年第5期16卷 328-330页

作者：吴超邹全明张卫军郭学青第三军医大学临床微生物学教研室重庆400038

目的克隆人幽门螺杆菌 (helicobacter pylori,Hp)尿素酶 b基因 (ure b) ,并分析其核苷酸序列的特性。方法用PCR技术从临床分离的 Hp菌株基因组中扩增出 ure b基因 ,将其克隆至 p HP质粒上进行序列分析。结果克隆得到的 ure b基因长度为 ... 详细信息

目的克隆人幽门螺杆菌 (helicobacter pylori,Hp)尿素酶 b基因 (ure b) ,并分析其核苷酸序列的特性。方法用PCR技术从临床分离的 Hp菌株基因组中扩增出 ure b基因 ,将其克隆至 p HP质粒上进行序列分析。结果克隆得到的 ure b基因长度为 1713bp,其核苷酸序列与 Gen bank公布的序列有 6 1个碱基存在差异 ,同源为 96 .44 % ,推定的氨基酸序列同源性为99.6 5 %。结论我们所克隆的 ure b基因可用于 Hp保护性抗原 Ure

关键词：幽门螺杆菌尿素酶b亚单位基因克隆序列分析

幽门螺杆菌尿素酶b亚单位的分段表达及免疫学性质分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

免疫学杂志 2010年第3期26卷 260-263页

作者：赵卓陈立罗萍余抒吴超邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物学教研室重庆400038

目的分段表达幽门螺杆菌(HP)尿素酶b亚单位(Ureb),并对其进行免疫学性质分析,为精确定位其保护性表位奠定基础。方法用生物信息学软件分析Ureb全长基因,选择分段点,PCR分别扩增其5个片段,构建于pET-11c(+)原核表达载体,并转化大肠杆菌bL... 详细信息

目的分段表达幽门螺杆菌(HP)尿素酶b亚单位(Ureb),并对其进行免疫学性质分析,为精确定位其保护性表位奠定基础。方法用生物信息学软件分析Ureb全长基因,选择分段点,PCR分别扩增其5个片段,构建于pET-11c(+)原核表达载体,并转化大肠杆菌bL21(DE3),用IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白表达情况,ELISA及Western blot分别鉴定其免疫原性及抗原性。结果成功克隆了Ureb的5个基因片段,基因测序结果与Genbank公布的序列一致.经SDS-PAGE分析,5个蛋白表达相对分子质量大小都与预期相符,在大肠杆菌中实现了表达。ELISA和Western blot分析显示,表达的5个蛋白表现出良好的抗原性和免疫原性。结论 Ureb的分段表达为进一步研究Ureb保护性表位及HP疫苗鉴定奠定了新的基础。

关键词：幽门螺杆菌尿素酶b亚单位

重组人幽门螺杆菌尿素酶b亚单位及其生物学性质

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

第一军医大学学报 2003年第6期23卷 549-552页

作者：鲁东水毛旭虎邹全明吴超杨珺张卫军王缚鲲解庆华罗萍第三军医大学医学检验系临床微生物学与免疫学教研室重庆400038

目的基因重组人幽门螺杆菌(Hp)尿素酶b亚单位(Ureb)并分析重组蛋白的生物学性质。方法采用PCR从我国临床分离的Hp菌株中克隆Ureb基因,并通过DNA重组技术构建非融合表达Ureb的重组质粒pET-11C-Ureb,转化至大肠杆菌bL21(DE3),经IPTG诱导... 详细信息

目的基因重组人幽门螺杆菌(Hp)尿素酶b亚单位(Ureb)并分析重组蛋白的生物学性质。方法采用PCR从我国临床分离的Hp菌株中克隆Ureb基因,并通过DNA重组技术构建非融合表达Ureb的重组质粒pET-11C-Ureb,转化至大肠杆菌bL21(DE3),经IPTG诱导表达。结果重组Ureb在大肠杆菌中表达,相对分子质量约62 000,表达率26%,N端15个氨基酸序列为MKKISRKEYVSMYGP,肽图及氨基酸组成成分分析结果与理论预测值吻合。以重组Ureb免疫balb/c小鼠,能产生抗Ureb抗体。ELISA及Western blotting分析显示,重组Ureb具有良好的免疫原性和反应性,表现出与天然Hp Ureb相似的生物学功能。结论为重组Ureb作为Hp亚单位疫苗成分奠定了免疫学基础。

关键词：幽门螺杆菌尿素酶b亚单位生物学性质大肠杆菌