重组hGM-CSF乳酸链球菌的构建及初步验证

作     者：马高峰 陈学清 杨晓强 武金宝 张振书 MA Gao-feng;CHEN Xue-qing;YANG Xiao-qiang;WU Jin-bao;ZHANG Zhen-shu

作者机构：南方医科大学南方医院消化内科广东广州510515 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2008年第28卷第4期

页      面：576-578页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(30570839) 广东省自然科学基金(05004735) 

主　　题：粒-巨噬细胞集落刺激因子 乳酸链球菌 基因克隆 重组质粒 蛋白表达 

摘      要：目的运用基因克隆技术将自行合成的人粒-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)转化于乳酸链球菌,并筛选获得高表达重组hGM-CSF的乳酸链球菌稳定株。方法将经过优化适合在乳链菌表达的hGM-CSF基因克隆于含有P59启动子、USP45蛋白信号肽、终止密码子的pNBC1000载体,得到重组质粒pNCSF,然后将pNCSF进一步克隆于穿梭载体pTR1001c,获得乳链菌表达载体pTRCSF,通过电穿孔转化于乳链菌,并通过聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳验证hGM-CSF的表达。结果获得了重组质粒pNCSF并经酶切鉴定和测序证实,酶切鉴定显示构建乳链菌表达载体pTRCSF及重组hGM-CSF乳链菌成功,蛋白电泳初步验证获得了高表达重组hGM-CSF的乳链菌株LL-CSF。结论运用基因克隆技术成功构建了重组乳酸链球菌LL-CSF,为进一步研究重组hGM-CSF的生物学特性及评价其潜在临床应用价值打下了基础。