一种新的DyP-type过氧化物酶在大肠杆菌中的重组表达、纯化及鉴定

作     者：汪立群 Alan K.Chang 袁文杰 白凤武 

作者机构：大连理工大学生命科学与技术学院辽宁大连116024 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2013年第29卷第6期

页      面：772-784页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 081703[工学-生物化工] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 0836[工学-生物工程] 082203[工学-发酵工程] 0822[工学-轻工技术与工程] 

主　　题：DyP-type过氧化物酶 运动发酵单胞菌 亚铁血红素蛋白 表达纯化 

摘      要：染料脱色过氧化物酶(DyP-type过氧化物酶)是含有亚铁血红素,能降解各种有毒染料的一类蛋白。为了研究运动发酵单胞菌Zymomonas mobilis ZM4(ATCC 31821)中一种新的DyP-type过氧化物酶的特点和功能,以***基因组DNA为模板,通过PCR扩增目的基因,克隆到大肠杆菌表达载体pET-21b(+)中。通过ZmDyP与其他DyP-type过氧化物酶的比对,发现它们存在着共同保守氨基酸D149、R239、T254、F256和GXXDG结构基序,说明ZmDyP是Dyp-type过氧化物酶家族的一个新成员。经IPTG诱导大肠杆菌中pET21b(+)-ZmDyP表达,并将表达的酶进行金属螯合层析纯化。SDS-PAGE分析表明,纯酶分子量为36 kDa,而活性染色显示分子量为108 kDa,表明该酶在活性状态下可能是一个三聚体。光谱扫描显示ZmDyP有一个典型的亚铁血红素吸收峰,说明它是含有亚铁血红素的蛋白。对ZmDyP性质进行了研究,发现以2,2-二氨-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)ABTS为底物,ZmDyP表现出更高的转化效率。这些研究结果丰富了DyP-type过氧化物酶家族信息,并且为ZmDyP的结构功能和反应机制研究奠定了基础。