携带人类表皮生长因子受体-2抗原表位的乙肝核心病毒样颗粒的制备及表征

作     者：李霞 李玉林 王晓军 张应福 石盼盼 曹镡雨 石晓卫 王云龙 

作者机构：河南大学淮河医院 河南省生物工程技术研究中心 河南省职工医院 郑州职业技术学院 新乡医学院三全学院 

出 版 物：《微生物学免疫学进展》 (Progress in Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2025年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

主　　题：人表皮生长因子受体-2 乙肝核心病毒样颗粒 可溶性表达 重组蛋白 纳米载体 B细胞表位 表达纯化 免疫 

摘      要：目的 制备HER-2-HBc VLPs 重组蛋白，对其性能进行评价。方法 以HBc VLPs作为载体，将人类表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor-2， HER-2）中的B细胞表位597VARCPSGVKPDLSYMPIWKFPDEEGACQPL626插入HBc Ag的主要免疫显性区域，克隆至pET-28a（+）载体，转化至大肠埃希菌BL21（DE3）中，通过降低HBc VLPs-HER-2的培养温度延长其活化时间，实现蛋白可溶性表达。采用SDS-PAGE分析测定其相对分子质量；使用Sephacryl S-1000和DEAE阴离子树脂对其进行纯化；激光粒度仪分析其粒径大小、均一性；高效液相色谱法（high pressure chromatography， HPLC）对其纯度进行检测；透射电镜对其形态进行分析；western blot鉴定特异性；将小鼠随机分为3组（PBS组、HER-2-Fe组和HER-2-HBc VLPs组），每组5只，分别用PBS、HER-2-Fe和重组蛋白HER-2-HBc VLPs以皮下注射方式对小鼠进行免疫，每2周免疫1次，每只50 μg；ELISA检测免疫效果。结果 工程菌26 ℃低温培养15 h加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside， IPTG）(终浓度为0.2 mmol/L)诱导4 h，目的蛋白呈可溶性表达；经Sephacryl S-1000分子筛和DEAE阴离子树脂层析纯化得到了目的蛋白，相对分子质量约为26 000；马尔文激光粒度仪检测粒径约为30 nm，聚合物分散性指数（polymer dispersity index， PDI）0.1，均一性良好；HPLC检测重组蛋白纯度90%；透射电镜显示重组蛋白呈单一圆形结构；Western blot鉴定，HER-2-HBc VLPs重组蛋白具有特异性；3次免疫后7 d（35 d）的小鼠ELISA血清抗体水平可达1∶31 000。结论 通过原核表达制备出纯度较高的HER-2-HBc VLPs重组蛋白，对其纯度、形态进行分析后符合纳米颗粒制备要求；小鼠3次免疫后7 d（35 d）血清效价测定产生了针对HER-2的抗体，可为基于HER-2靶点的癌症疫苗的研究提供技术支持。