C57BL/6J小鼠耳蜗内毛细胞传入神经突触的免疫学标记观察及其意义

作     者：施磊 赵宁 陈丽平 商秀丽 徐义策 王雪峰 柳柯 SHI Lei;ZHAO Ning;CHEN Li-ping;SHANG Xiu-li;XU Yi-ce;WANG Xue-feng;LIU Ke

作者机构：中国医科大学附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科沈阳110001 辽宁医学院附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科锦州121001 中国人民解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科中国人民解放军总医院耳鼻咽喉研究所北京100853 

出 版 物：《中华耳科学杂志》 (Chinese Journal of Otology)

年 卷 期：2010年第8卷第4期

页      面：456-460页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 071006[理学-神经生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然基金项目(31040038) 中国博士后科学基金(20100470103,201003779)资助项目 

主　　题：内毛细胞传入神经突触 RIBEYE/Ctbp2 免疫标记 激光共聚焦显微镜 

摘      要：目的探讨小鼠耳蜗内毛细胞传入神经突触的免疫学标记特点及其应用方法。方法在成年的C57BL/6J小鼠上剥取新鲜的耳蜗基底膜标本,灌洗及漂洗处理之后分别使用Ctbp2(C-terminal binding protein 2,C末端结合蛋白2;1∶200),GluR 2/3(glutamate receptor2/3,AMPA receptor subunit 2/3,谷氨酸受体亚单位2/3;1∶200)和Dapi(4 ,6-Diamidino-2-phenylindole,4 ,6-二脒基-2-苯基吲哚)染色剂对内毛细胞突触的前膜特异结构RIBEYE、突触后膜的谷氨酸受体以及细胞核进行单独、双重和三重免疫标记,并利用激光共聚焦显微镜能够连续扫描和叠加图像的特性,观察耳蜗内毛细胞带状突触的表达、空间分布情况以及与内、外毛细胞之间的位置关系。结果单独应用Ctbp2可以清晰显示内毛细胞突触前膜所标记的结构,结合使用抗体GluR2/3进行免疫双标则可以完整显示内毛细胞突触前后膜的相关蛋白,而结合应用Dapi细胞核染色的方法可以明确标记其存在的位置以及和内、外毛细胞之间的关系,如果在此基础上加上激光共聚焦显微镜下的平光图像,则会使标记结果更加清晰、客观和准确。结论本方法可以准确显示耳蜗内毛细胞带状突触的表达、空间分布情况以及与内外毛细胞之间的位置关系,如果在实验中合理应用多重免疫荧光标记方法,将会对不同生理和病理条件下深入研究耳蜗内毛细胞突触的可塑性及其在听力变化中的作用具有重要的价值。