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中国医学文摘（耳鼻咽喉科学） 2014年第5期29卷 291-293页

作者：柳柯杨仕明中国人民解放军耳鼻咽喉研究所北京100853 中国人民解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科北京100853

近年来的研究表明,耳蜗内毛细胞传入神经突触(cochlear ribbon synapse)在听觉系统中发挥着十分关键的作用。本文介绍了OTOF,SLC17A8,Diaphanous homolog 3(DIAPH3)和SMAD4等目前研究比较深入的几个基因缺陷所导致的遗传性听功能障碍得... 详细信息

近年来的研究表明,耳蜗内毛细胞传入神经突触(cochlear ribbon synapse)在听觉系统中发挥着十分关键的作用。本文介绍了OTOF,SLC17A8,Diaphanous homolog 3(DIAPH3)和SMAD4等目前研究比较深入的几个基因缺陷所导致的遗传性听功能障碍得分子病理机制。上述基因缺陷导致耳聋的一个共同机制是基因缺陷首先破坏了耳蜗内毛细胞传入神经突触的结构和功能。在表型上,这些基因缺陷动物共同表型出了听神经病的临床特征:脑干诱发电位(auditory brainstem respons,ABR)不能引出,畸变产物耳声发射(distortion product acoustic emission,DPOAE)和耳蜗电位(cochlear microphonics,CM)正常或基本正常。形态学研究证明了功能检测的结构及动物耳蜗毛细胞和突触后听神经的形态结构都是正常或基本正常的。对这些基因缺陷致聋机制的研究具有重要的临床价值,特别是对今后开展针对上述基因缺陷耳聋儿童的人工耳蜗植入治疗具有指导意义。

关键词：耳蜗听力丧失基因人工耳蜗植入内毛细胞传入神经突触听神经病

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耳蜗内毛细胞传入神经突触对氨基糖苷类抗生素毒性刺激的反应

耳蜗内毛细胞传入神经突触对氨基糖苷类抗生素毒性刺激的反应

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作者：徐义策辽宁医学院

学位级别：硕士

目的观察腹腔注射氨基糖苷类抗生素（硫酸庆大霉素）后C57BL/6J小鼠内毛细胞传入神经突触的形态和功能变化，并进一步研究这种变化和听力改变的关系。方法选择出生后5周大小的C57BL/6J小鼠，雌雄不限，每组由6只小鼠组成，每天每只... 详细信息

目的观察腹腔注射氨基糖苷类抗生素（硫酸庆大霉素）后C57BL/6J小鼠内毛细胞传入神经突触的形态和功能变化，并进一步研究这种变化和听力改变的关系。方法选择出生后5周大小的C57BL/6J小鼠，雌雄不限，每组由6只小鼠组成，每天每只小鼠腹腔注射硫酸庆大霉素，药物浓度为100mg/kg，连续给药14d,然后停药后饲养至第28d.分别选取第4d、第7d、第10d、第14d和第28d的小鼠进行ABR（Click&Tone burst）和DPOAE检测,未进行腹腔注射给药的小鼠（0d）作为对照组，对照组动物每天给予相同剂量的生理盐水。动物处死后耳蜗取材，然后分别对实验组和对照组小鼠进行基底膜铺片染色和蛋白检测，以观察耳蜗内毛细胞传入神经突触前特异性蛋白RIBEYE／CtBP2和突触后神经递质GluR2/3受体的表达情况。结果应用庆大霉素以后，实验组小鼠从第4d开始出现听力损失，在第7d时听力损失似乎达到最明显的水平，而第10d,14d,28d听力阈值较第7d时有所降低，但并无显著性差异（P＞0.05），而实验组小鼠在第10d,14d,28d的听力阈值仍显著高于对照组（P＜0.05），在应用庆大霉素后的第4d,7d,10d,14d和28d, RIBEYE／CtBP2和GluR2/3在基底膜上的表达水平和部位均出现了明显的变化，而且这种变化和小鼠听阈的改变存在一定的对应关系。结论一定剂量的庆大霉素所造成的听力损害可能和内毛细胞传入神经突触的形态及功能改变有关，而且该突触形态上的恢复可能有助于小鼠听力的改善。

关键词：硫酸庆大霉素耳蜗内毛细胞传入神经突触 RIBEYE／CtBP2 GluR2&3

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C57BL/6J小鼠耳蜗内毛细胞传入神经突触的免疫学标记观察及其意义

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中华耳科学杂志 2010年第4期8卷 456-460页

作者：施磊赵宁陈丽平商秀丽徐义策王雪峰柳柯中国医科大学附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科沈阳110001 辽宁医学院附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科锦州121001 中国人民解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科中国人民解放军总医院耳鼻咽喉研究所北京100853

目的探讨小鼠耳蜗内毛细胞传入神经突触的免疫学标记特点及其应用方法。方法在成年的C57BL/6J小鼠上剥取新鲜的耳蜗基底膜标本,灌洗及漂洗处理之后分别使用Ctbp2(C-terminal binding protein 2,C末端结合蛋白2;1∶200),GluR 2/3(glutama... 详细信息

目的探讨小鼠耳蜗内毛细胞传入神经突触的免疫学标记特点及其应用方法。方法在成年的C57BL/6J小鼠上剥取新鲜的耳蜗基底膜标本,灌洗及漂洗处理之后分别使用Ctbp2(C-terminal binding protein 2,C末端结合蛋白2;1∶200),GluR 2/3(glutamate receptor2/3,AMPA receptor subunit 2/3,谷氨酸受体亚单位2/3;1∶200)和Dapi(4',6-Diamidino-2-phenylindole,4',6-二脒基-2-苯基吲哚)染色剂对内毛细胞突触的前膜特异结构RIBEYE、突触后膜的谷氨酸受体以及细胞核进行单独、双重和三重免疫标记,并利用激光共聚焦显微镜能够连续扫描和叠加图像的特性,观察耳蜗内毛细胞带状突触的表达、空间分布情况以及与内、外毛细胞之间的位置关系。结果单独应用Ctbp2可以清晰显示内毛细胞突触前膜所标记的结构,结合使用抗体GluR2/3进行免疫双标则可以完整显示内毛细胞突触前后膜的相关蛋白,而结合应用Dapi细胞核染色的方法可以明确标记其存在的位置以及和内、外毛细胞之间的关系,如果在此基础上加上激光共聚焦显微镜下的平光图像,则会使标记结果更加清晰、客观和准确。结论本方法可以准确显示耳蜗内毛细胞带状突触的表达、空间分布情况以及与内外毛细胞之间的位置关系,如果在实验中合理应用多重免疫荧光标记方法,将会对不同生理和病理条件下深入研究耳蜗内毛细胞突触的可塑性及其在听力变化中的作用具有重要的价值。

关键词：内毛细胞传入神经突触 RIBEYE/Ctbp2 免疫标记激光共聚焦显微镜

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氨基糖甙类药物毒性对耳蜗内毛细胞传入神经突触后谷氨酸受体的影响

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解剖科学进展 2012年第5期18卷 401-404,408页

作者：徐义策王雪峰柳柯施磊杨仕明辽宁医学院附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科辽宁锦州121000 中国人民解放军总医院中国人民解放军耳鼻咽喉研究所北京100853 中国医科大学附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科辽宁沈阳110001

目的探讨氨基糖甙类耳毒性药物暴露下小鼠内毛细胞传入神经突触后谷氨酸受体表达水平的变化,以及这种变化和小鼠听功能改变之间的关系。方法选择5周大小的C57BL/6J小鼠,每天腹腔注射庆大霉素1次,药物浓度为100mg/kg,连续给药14d,分... 详细信息

目的探讨氨基糖甙类耳毒性药物暴露下小鼠内毛细胞传入神经突触后谷氨酸受体表达水平的变化,以及这种变化和小鼠听功能改变之间的关系。方法选择5周大小的C57BL/6J小鼠,每天腹腔注射庆大霉素1次,药物浓度为100mg/kg,连续给药14d,分别在第7天、第14天时检测受试小鼠的ABR(Click&Tone burst),并以未进行腹腔注射给药的小鼠(0d)作为对照组。使用抗GluR2/3抗体对小鼠基底膜铺片标本进行染色标记,以观察耳蜗内毛细胞传入神经突触后谷氨酸受体(GluR2/3)的表达情况。结果注射庆大霉素小鼠在第7天、10天、14天时听力损失明显,听力阈值显著高于对照组(p内毛细胞传入神经突触后谷氨酸受体(GluR2/3)的表达水平和对照组相比显著增高,听力损失最为严重,提示GluR2/3在突触后的过高表达和耳聋程度存在相关性。结论氨基糖甙类耳毒性药物持续暴露可以造成耳蜗内毛细胞传入神经突触间隙内谷氨酸递质过表达,与耳聋程度呈正相关。

关键词：氨基糖甙类药物毒性耳蜗内毛细胞传入神经突触听阈谷氨酸受体亚单位小鼠

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